过氧化氢酶活性的测定

1、实验二 过氧化氢酶 Km值的测定课程名称：生物化学与分子生物学实验课 年级：2006 专业、层次：临床医学本科 授课教师：许成山职称：讲师 学时：3 学时基本教材：自编生物化学与分子生物学实验指导教学目的与要求：1、巩固酶促反应有关参数的知识，加深理解 Km 值的定义；2、学习 Hanes 作图法测定 Km 值的原理和方法；3、掌握滴定管的使用和滴定终点的判断。大体内容与时间安排：1、K m 值的定义及求 Km 值的作图方法（林 -贝氏作图法和 Hanes 作图法） 5min2、过氧化氢酶 Km 值测定的原理 5min3、过氧化氢酶 Km 值测定的注意事项 10min4。

2、 过氧化氢酶米氏常数的测定一 实验目的 了解并掌握米氏常数的意义和测定方法 二 实验原理H2O2被过氧化氢酶分解出H 2O和O 2，未分解的H 2O2用KMnO 4在酸性环境中滴定，根据反应前后H 2O2的浓度差可求出反应速度。2H2O2 。

3、植物生理学实验报告实验题目：过氧化氢酶活性的测定-紫外线吸收法姓名 班级 学号 一、 实验原理和目的H2O2在 240 nm 波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度(A240)随反应时间而降低。根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性二、 实验器具和步骤材料：海桐叶仪器与用具：紫外分光光度计；离心机；研钵；250ml 容量瓶 1 个；0.5ml 刻度吸管 2 支，2ml 刻度吸管 1 支；10ml 试管 3 支；恒温水浴；试剂:0.1mol/L 磷酸缓冲液，pH7.0 、pH7.8 0.1mol/L H2O2步骤： 1称取植物材料 0.3g，加入 ， 0.1mo1/L 磷酸。

4、过氧化氢酶活力测定 碘量法目的意义 过氧化氢酶(Catalase，CAT)普遍存在于植物所有组织中，其活性与植物的代谢强度、抗衰老、抗寒、抗病能力有一定关系，在生产实践中常进行测定。学习几种测定CAT 活性的方法，理解其测定原理。一、实验原理过氧化氢酶能把过氧化氢分解为水和氧，其活性大小，可以一定时间内分解的过氧化氢量或生成氧气的量来表示。H 202 的测定常采用氧化还原滴定法，碘量法是其经典方法。其原理是在有催化剂钼酸铵存在时，过氧化氢与碘化钾反应，放出游离碘，再用硫代硫酸钠滴定碘，以淀粉指示剂指示滴定终点。根据空白。

5、过氧化氢酶酶活测定方法一 配溶液:1. 1.5% NaBO34H2：称取 1.5g NaBO34H2O 溶于 100ml 纯水2. 0.067M 磷酸盐缓冲：称取磷酸氢二钠 2.398g 溶于 100ml 纯水，另称取磷酸二氢钠 1.05g溶于 100ml 纯水中，按配方配置成 PH 为 6.8 的 PBS3. 1M 硫：10.87ml 浓硫酸加入 200ml 纯水中4. 0.05M 高锰：0.79g 高锰酸钾溶于 100ml 纯水中。5. HCl 溶液：调 PH二 仪器：37水浴箱，滴定管， PH 试纸，移液器，15ML 的离心管，烧杯三 步骤：1.预先用 HCL 将 pH 调至 6.8 的 1.5%NaBO34H2O 8mL 加入含有 1.5mL 0.067M ph6.8 的磷酸盐缓冲液的烧杯中。2.。

6、过氧化氢酶活性探究实验案例动植物在代谢中产生的过氧化氢，对机体是有毒的。机体通过过氧化氢酶催化过氧化氢迅速分解成水和氧气而解毒。就此，组织学生探究动植物体内有关过氧化氢酶的活性问题。一、探究不同植物过氧化氢酶的活性1提出问题 不同植物所含过氧化氢酶的活性是否相同？2作出假设 不同植物过氧化氢酶的活性不同。3设计实验、实施实验 将各种植物的器官称取 3g，切成小薄片，放入试管中，编号，设计空白对照。反应现象序号 植物材料名称 2O3mL1%H反应速度 产生气泡多少1 元葱肉质鳞叶 较快 较多2 马铃薯块茎 迅速 大量3 胡萝卜。

7、过氧化物酶活性测定 一 实验目的 学习和掌握过氧化物酶 POD 活性测定的原理及方法 二 实验原理 在通常情况下 需氧生物在还原氧至水的过程中会产生氧气 植物细胞中电子传递不通畅时 会产生一系列活性氧 超氧阴离子自由基 羟自由基 单线态氧 。

8、实验九 过氧化氢酶的活性测定 紫外吸收法,原 理：H2O2在240nm波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度(A240)随反应时间而降低。根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。,材料与设备,实验材料: 海桐叶,实验器材：紫外分光光度计；离心机；研钵；0.5ml刻度吸管2支，2ml刻度吸管1支；10ml试管3支；恒温水浴； 试 剂： O.1mol/L过氧化氢；，0.1mo1/L磷酸缓冲液,pH7.0、 pH7.8,操作步骤：,1称取植物材料0.3g，加入，0.1mo1/L磷酸缓冲液 (pH7.0) 6ml(分三次加入，最后两次用于洗研钵)，在研钵中研磨成匀浆，。

9、实验九 过氧化氢酶的活性测定 紫外吸收法,原 理：H2O2在240nm波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度(A240)随反应时间而降低。根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。,材料与设备,实验材料: 海桐叶,实验器材：紫外分光光度计；离心机；研钵；0.5ml刻度吸管2支，2ml刻度吸管1支；10ml试管3支；恒温水浴； 试 剂： O.1mol/L过氧化氢；，0.1mo1/L磷酸缓冲液,pH7.0、 pH7.8,操作步骤：,1称取植物材料0.3g，加入，0.1mo1/L磷酸缓冲液 (pH7.0) 6ml(分三次加入，最后两次用于洗研钵)，在研钵中研磨成匀浆，。

10、实验项目二、过氧化氢酶的活力和动力学常数测定姓 名： 凌豪 指导教师： 汪财生 实验室： 6503 组员： 吴李伟 凌豪 成绩： 第三部分：实验记录与分析一、酶活力测定（一）原始数据1.样品原始质量：豆芽菜 5g2.标定数据：（1）KMnO 4质量数及配制：KMnO 4质量数 3.1605g 溶解配制成1000ml（2）Na 2C2O4质量数：取草酸钠 0.11g（3）标定数据：17.3 17.4 16.8 平均 17.2（4）KMnO 4实际浓度 0.0191mol/L3.样品滴定酶反应组 0.25ml 0.3ml对照组 0.7ml 0.6ml（二）结果计算1换算系数（1mL KMnO 4溶液相当于多少 mg H2O2）(0.011*1)/0.0191=4.1m。

11、过氧化氢酶的活力测定紫外吸收法H2O2在 240nm 波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度A 240随反应时间而降低。根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活力。三材料仪器与试剂一 材料：小麦叶片二 仪器仪器的。

12、实验10过氧化氢酶活性测定 高锰酸钾滴定法 一实验目的 掌握和学习测定过氧化氢酶活性的原理和方法 2了解过氧化氢酶的作用 二实验原理 过氧化氢酶 catalase 属于血红蛋白酶 含有铁 它能催化过氧化氢分解为水和分子氧 在此过程中起传递电。

13、实验 40 植物组织中过氧化氢含量及过氧化氢酶活性测定植物在逆境下或衰老时，由于体内活性氧代谢加强而使 H2O2 发生累积。H 2O2 可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体。过氧化氢酶可以清除 H2O2，是植物体内重要的酶促防御系统之一。因此，植物组织中 H2O2 含量和过氧化氢酶活性与植物的抗逆性密切相关。本实验用分光光度法测定过氧化氢含量，利用高锰酸钾滴定法和紫外吸收法测定过氧化氢酶活性。一、过氧化氢含量的测定【原理】H2O2 与硫酸钛（或氯化钛）生成过氧化物钛复。

14、高锰酸钾滴定法1. 试剂配制： (1)0.3%过氧化氢溶液： （1：100 30%的 H2O2 和水） （0.5molH 2O2+49.5ml 蒸馏水）（1ml30% H 2O2+99ml 蒸馏水） (2)3N 硫酸：（ 10ml 硫酸 +50ml 水） (3)0.1N 高锰酸钾溶液 ：（ 1.58gKMnO4+100ml 蒸馏水） 2. 高锰酸钾的标定：准确称取约 0.2 g 在 110干燥至恒量的基准草酸钠。加入 250 mL 新煮沸过的冷水、10 mL 硫酸，搅拌使之溶解。将草酸钠溶液加热到 75 85 (即开始冒蒸气时的温度)，趁热用待标 KMnO4 溶液进行滴定。开始滴定时反应速度很慢，待溶液中产生 M n2+后，反应速度加快，但滴定时仍必须是。

15、实验 49 过氧化氢酶的活性测定 植物在逆境下或衰老时，由于体内活性氧代谢加强而使 H 2 O 2 累积。 H 2 O 2 可以直接或间接地氧化细胞内核酸、蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体。过氧化氢酶可以清除 H 2 O 2 ，是植物体内重要的酶促防御系统之一。因此，植物组织中 过氧化氢酶活性与植物的抗逆性密切相关。本实验用高锰酸钾滴定法和紫外吸收法测定过氧化氢酶活性。 高锰酸钾滴定法 一、原理 过氧化氢酶能催化过氧化氢分解为水和分子氧，可根据 H 2 O 2 的消耗量或 O 2 的生成量测定该酶活力大小。在反应。

16、过氧化氢酶(CAT)活性测定高锰酸钾滴定法(李合生植物生理生化实验原理和技术M 北京：高等教育出版社2000165-167)一、原理 过氧化氢酶(catalase，CAT)普遍存在于植物的所有组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力有一定关系，它属于血红蛋白酶，含有铁，能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。 R(Fe2+)HO22 R(FeOH3+)2eR(Fe2+R(FeOH3+)+HO22 )2+2 HO222e因此，可以根据 H2O2 的消耗量或者 O2 的生成量测定该酶活力的大小。在该体系中加入一定量(反应过量 )的 H2O2 溶液，。

17、 过氧化氢酶活性测定-紫外吸收法过氧化氢酶普遍存在于植物的所有组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力有一定关系，故常加以测定。一、原理】H2O2在240nm 波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度(A240)随反应时间而降低。根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。【仪器与设备与试剂】1、材料小麦叶片等。2、仪器设备 研钵；离心机；250ml 容量瓶；移液管（0.5ml、2ml 各2支） ；10ml 试管3支；恒温水浴；紫外分光光度计；3、试剂 0.2mol/L pH7.8磷酸缓冲液（内含1% 聚乙烯吡咯烷酮） ；0.1m。

18、植物体内过氧化氢酶活性的测定一、目的过氧化氢酶普遍存在于植物组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力均有关系，故常加以测定。通过实验可了解过氧化氢酶的作用，并掌握测定过氧化氢酶活性的原理和方法。二、原理过氧化氢酶把过氧化氢分解为水和氧，其活性大小，以一定时间内分解的过氧化氢量来表示，当酶与底物（H 2O2）反应结束后，用碘量法测定未分解的 H2O2量。以钼酸铵作催化剂，使 H2O2与 KI 反应，放出游离碘，然后用硫代硫酸钠滴定碘，其反应式为：H2O2 + 2KI + H2SO4 I 2 + K2SO4 + 2H2OI2 + 2Na2S2O3 2NaI + Na 2S4O。

19、 过氧化氢酶活性测定过氧化氢酶普遍存在于植物的所有组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒抗病能力有一定关系，故常加以测定。紫外吸收法一原理H2O2在240nm 波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度A240随反应时间而降。