1、实验10过氧化氢酶活性测定 高锰酸钾滴定法 一实验目的 掌握和学习测定过氧化氢酶活性的原理和方法 2了解过氧化氢酶的作用 二实验原理 过氧化氢酶 catalase 属于血红蛋白酶 含有铁 它能催化过氧化氢分解为水和分子氧 在此过程中起传递电子的作用 过氧化氢既是氧化剂又是还原剂 可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小 在反应系统中加入一定量 反应过量 的过氧化氢溶液 经酶促反应后 用标准高锰酸钾溶液 在酸性条件下 滴定多余的过氧化氢 即可求出消耗的H2O2的量 反应式 5H2O2 2KMnO4 4H2SO45O2 2KHSO4 8H2O 2MnSO4 三实验器材 10 H2SO4
2、 0 2mol LpH7 8磷酸缓冲液 0 1mol LKMnO4标准液 称取KMnO4 AR 3 1605g 用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000mL 再用0 1mol L草酸溶液标定 0 1mol LH2O2 取30 H2O2 17 6mol L 溶液5 68mL 稀释至1000mL 用标准0 02mol LKMnO4溶液 在酸性条件下 标定 1试剂 2材料 小麦叶片 3主要设备 离心机 恒温箱 酸式滴定管 四方法步骤 1 酶液提取取小麦叶片2 5g加入pH7 8的磷酸缓冲溶液少量 研磨成匀浆 转移至25ml容量瓶中 用该缓冲液冲洗研钵 并将冲洗液转至容量瓶中 用同一缓冲液定容 4000转离心
3、15min 上清液即为过氧化氢酶的粗提液 2 滴定 取50mL三角瓶3个 2个测定 另1个为对照 测定瓶中加入酶液2 5mL 对照加煮死酶液2 5mL 再加入0 1mol LH2O22 5mL 同时计时 于30 恒温水浴中保温10min 立即加入10 H2SO42 5mL 3 用0 1mol LKMnO4标准溶液滴定 至出现粉红色 在30s内不消失 为终点 5实验结果 酶活性 每g鲜重样品1min内分解H2O2的mg数表示 式中 A 对照KMnO4滴定mL数 B 酶反应后KMnO4滴定mL数 VT 提取酶液总量 mL VS 反应时所用酶液量 mL W 样品鲜重 g T 反应时间 min 1 7 1mL0 1mol LKMnO4相当于1 7mgH2O2 六思考题 简述测定过氧化氢酶的生理意义 下周实验 实验36谷物种子萌发时淀粉酶活力的测定
