1、植物生理学实验报告实验题目：过氧化氢酶活性的测定-紫外线吸收法姓名 班级 学号 一、 实验原理和目的H2O2在 240 nm 波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度(A240)随反应时间而降低。根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性二、 实验器具和步骤材料：海桐叶仪器与用具：紫外分光光度计；离心机；研钵；250ml 容量瓶 1 个；0.5ml 刻度吸管 2 支，2ml 刻度吸管 1 支；10ml 试管 3 支；恒温水浴；试剂:0.1mol/L 磷酸缓冲液，pH7.0 、pH7.8 0.1mol/L H2O2步骤： 1称取植物材料 0.3g，加入 ， 0.1mo1
2、/L 磷酸缓冲液 (pH7.0) 6ml(分三次加入，最后两次用于洗研钵)，在研钵中研磨成匀浆，以 6000rmin 离心15 分钟，倾出上清液。 2.测定：取 10ml 试管 2 支，其中 2 支为样品测定管，1 支为空白管，按下表顺序加入试剂。紫外吸收法测定 H2O2样品液配置表 管 号 S1 S2(对照) 粗酶液(ml) 0.2 0.2（ph7.8 PBS） pH7.8 磷酸(ml) 1.5 1.5 蒸馏水(ml) 1.0 1.03测定: 25预热后,逐管加入 0.3ml 0.1mol/L 的 H2O2，每加完一管立即记时，并迅速倒入石英比色杯中，240nm 下测定吸光度，每隔 1min
3、 读数 1 次，共测2min，记录数据。 4.按下式计算酶活性。结果计算： 以 1min 内 A240减少 0.1 的酶量为 1 个酶活单位（u）。 过氧化氢酶活性(u/gFW/min)= A240* Vt/(0.1* t* FW *V 1 )Vt粗酶提取液总体积（ml）； V1测定用粗酶液体积（ml）； FW样品鲜重（g）；0.1A240每下降 0.1 为 1 个酶活单位（u）； t加过氧化氢到最后一次读数时间（min）。三、 实验数据和作业过氧化氢酶活性(u/gFW/min)=(1.546-1.526)*6/(0.1*2*0.3*0.2)=10四、 数据分析过氧化氢酶活性较低，可能是由于叶片采集时间过久。五、 思考题（1） 影响过氧化氢酶活性测定的因素有哪些?答：叶片的选择，温度的变化，研磨是否充分，洗涤是否干净。（2）过氧化氢酶与哪些生化过程有关?答：过氧化氢是一种代谢过程中产生的废物,它能够对机体造成损害.为了避免这种损害,过氧化氢必须被快速地转化为其他无害或毒性较小的物质.过氧化氢酶存在于红细胞及某些组织内的过氧化体中,它的主要作用就是催化H2O2 分解为 H2O 与 O2,使得 H2O2 不至于与 O2 在铁螯合物作用下反应生成非常有害的-OH.
