1、实验九 过氧化氢酶的活性测定 紫外吸收法,原 理：H2O2在240nm波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度(A240)随反应时间而降低。根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。,材料与设备,实验材料: 海桐叶,实验器材：紫外分光光度计；离心机；研钵；0.5ml刻度吸管2支，2ml刻度吸管1支；10ml试管3支；恒温水浴； 试 剂： O.1mol/L过氧化氢；，0.1mo1/L磷酸缓冲液,pH7.0、 pH7.8,操作步骤：,1称取植物材料0.3g，加入，0.1mo1/L磷酸缓冲液 (pH7.0) 6ml(分三次加入，最后两次用于洗研钵)，在研钵中研磨成匀浆，以
2、 6000rmin 离心15分钟，倾出上清液。,操作步骤：,2.测定：取10ml试管3支，其中2支为样品测定管，1支为空白管，按下表顺序加入试剂。,紫外吸收法测定H2O2样品液配置表,操作步骤：,3测定25预热后,逐管加入0.3ml 0.1mol/L的H2O2，每加完一管立即记时，并迅速倒入石英比色杯中，240nm下测定吸光度，每隔1min读数1次，共测2min，记录数据。,4.按下式计算酶活性。,结果计算： 以1min内A240减少0.1的酶量为1个酶活单位（u）。过氧化氢酶活性(u/gFW/min)=,式中：,A240 = AS0-,AS0加入煮死酶液的对照管吸光值；AS1, AS2样品管吸光值；Vt粗酶提取液总体积（ml）；V1测定用粗酶液体积（ml）；FW样品鲜重（g）；0.1A240每下降0.1为1个酶活单位（u）；t加过氧化氢到最后一次读数时间（min）。,作 业：,1.写实验报告 2.问题：（1）影响过氧化氢酶活性测定的因素有哪些?（2）过氧化氢酶与哪些生化过程有关?,
