PCR技术的原理和应用

1、荧光定量PCR的原理及其应用,蒋昌龙,荧光定量PCR,Outline荧光定量PCR的原理荧光定量PCR应用,PCR 反应过程,d.NTPs,Taq 酶,Primers,反应组分,变 性,延 伸,重 复,退 火,循环24个拷贝,循环38个拷贝,Cycle #,PCR反应模式,同一样品96复孔的实验结果,荧光定量PCR 原理,缺憾 无法对初始模板精确定量 无法实时监测扩增情况 跑胶繁琐、易污染,常规PCR 电泳鉴定,荧光定量PCR在体系中引入荧光染料实时检测 扩增阶段：指数期平台期,荧光定量PCR 原理,荧光定量PCR 原理,Threshold line,C(t) value,阈值：荧光扩增曲线指数增长期设定的一个荧光强度标准C(t。

2、,大型仪器管理中心 黄雪玲 2010-9-27,实时荧光定量PCR 原理及其应用,荧光定量PCR仪的应用,基础研究中基因表达丰度的测定； 差异基因的表达检测，基因型分析； 临床医疗领域病原体的检测和基因诊断：包括特定基因的检测、细菌和病毒等病原体的检测； 环境监测，包括水质、空气的污染检验； 检验检疫工作：食品卫生检验，转基因作物的检验； 法医的遗传学鉴定；,PCR的反应过程,Cycle,Fluorescence,实时荧光定量PCR,实时荧光定量PCR （ Real-time Q-PCR ）技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积，实时监测整个PCR进程，最。

3、PCR理论基础及基本操作,李 静 2012.2.21,第一节 PCR技术,聚合酶链式反应 Polymerase Chain ReactionPCR的基本原理 PCR的成分 PCR的操作步骤,一、PCR的基本原理和步骤,基本原理DNA复制 碱基互补配对原则 A=T，G=C,一级结构的文字式缩写,基因 TGCAGGTTAAAGG 它的互补链: ACGTCCAATTTCC(误) CCTTTAACCTGCA(正) 3-ACGTCCAATTTCC-5(正),二、PCR的成分,模板 （Template DNA）引物 （Primer）Taq DNA聚合酶 dNTPTaq聚合酶缓冲液 （Taq Buffer）所有成分在同一离心管中,模板,是一段单链或者双链DNA，提供用于进行PCR扩增的原始信息 对模板的纯度要。

4、PCR技术的原理与方法,钟召迪,PCR定义,聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction)简称，是一项在短时间内大量扩增特定的片段的分子生物学技术。是指在DNA 聚合酶的催化下，以母链DNA 为模板，一特定引物为延伸起点，经过变性、退火、延伸等步骤，体外复制出于母链模板DNA互补的子链DNA的过程。可用于基因分离克隆，序列分析，基因表达调控，基因多态性研究等。,PCR反应特点,特异性强 灵敏度高 简便、快速 对标本的纯度要求低,PCR技术的基本原理,PCR的反应成分 PCR的反应基本步骤 PCR的反应体系,PCR的反应成分,模板DNA 引物 四种脱氧核糖核苷。

5、,实时荧光定量PCR技术的原理及应用 (Real time Quantitative PCR),讲 座 提 纲,实时荧光定量PCR原理实时荧光定量PCR的几种方法介绍实时荧光定量PCR医学和科研中的应用,实时荧光定量PCR原理实时荧光定量PCR的几种方法介绍实时荧光定量PCR医学和科研中的应用,实时荧光定量PCR定义,在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法,实时荧光定量PCR 原理 实时原理,常 规 PCR技术：对PCR扩增反应的终点产物进行定量和定性分析无法对起始模板准确定量，无法对扩增反应实时检。

6、PCR的发明、原理及应用,PCR的发明,Kary B. Mullis ，在Cetus公司工作期间，发明了PCR。 他原本是要合成DNA引物来进行测序工作， 却常为没有足够多的模板DNA而烦恼。1983年春夏之交的一个晚上，他开车去乡下别墅的路上萌发了用两个引物（而不是一个引物）去扩增模板DNA 的想法,DNA双螺旋结构于1953年发现 第一个细胞内用来复制DNA所需的聚合酶于1956年分离成功 自1970年代起，由于发现选择性切割DNA分子的限制性内切酶及接合酶，可将DNA分子加以重组，因此引发了基因工程的开展,1983年春，Mullis发展出PCR的概念； 1983年9月，Mullis用大肠。

7、荧光定量PCR技术 原理及应用,LM Su, 2015 Vazyme, China,主要内容,qPCR的原理 化学原理 数学原理 qPCR的实验流程及注意事项 qPCR的应用 -绝密-,qPCR的原理,什么是qPCR？Real-time PCR ，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过Ct值和标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。,qPCR 化学原理,荧光 （染料、荧光基团),SYBR,TaqMan,qPCR 化学原理,SYBR 一种DNA小沟非饱和性结合染料 与DNA结合时发光/不结合(游离)时不发光 每形成一条DNA双链，就会有一定数量的染料结合上去 染料一结合，就会产生荧光信号 信号强度与DNA分子总数目成正。

8、PCR原理技术与应用,PCR（Polymerase Chain Reaction）即聚合酶链式反应，是指在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以特定引物为延伸起点，通过变性、退火、延伸等步骤，体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。 是一项DNA体外合成放大技术，能快速特异地在体外扩增任何目的DNA。可用于基因分离克隆，序列分析，基因表达调控，基因多态性研究等许多方面。,PCR技术的基本原理 一.PCR反应成分： 1.模板DNA；2.引物；3.四种脱氧核糖核苷酸； 4.DNA聚合酶；5.反应缓冲液、Mg2 等。 二.PCR反应基本步骤： 1.变性：高温使双链DNA解离形成。

9、PCR技术的应用,1、PCR技术在分子生物学中的应用,一：基因克隆,基因的克隆和分离是分子生物学和细胞生物学研究中必不可少的手段。运用PCR技术进行基因克隆和亚克隆比传统的方法具有更大的优点。由于PCR可以对单拷贝的基因放大上百万倍，产生微克(pg)级的特异DNA片段，从而可省略从基因组DNA中克隆某一特定基因片段所需要的DNA的酶切、连接到载体DNA上、转化、建立DNA文库及基因的筛选、鉴定、亚克隆等烦琐的实验步骤。,二：重组PCR,在分子生物学研究中常常需要将两个不同的基因融合在一起。通过PCR反应可以比较容易地实现这一目的。,三：DN。

10、PCR技术及其发展和应用,张雪梅 检验系临床生化教研室,主要参考书,CW迪芬巴赫 、GS德弗克斯勒美主编 。PCR技术实验指南黄留玉主编。PCR最新技术原理、方法及应用尹一兵主编。分子诊断学,目 录,PCR技术的原理 PCR技术的衍生技术 实时荧光PCR技术 PCR技术的应用,一、PCR的基本原理,PCR反应体系 PCR过程 PCR的特点,PCR的基本原理,PCR反应体系 PCR过程 PCR的特点,PCR的基本原理,PCR反应体系 PCR过程 PCR的特点,重复13步 2530轮,目的DNA片段 扩增100万倍以上,DNA双螺旋,DNA单链 与引物复性,DNA变性 形成2条单链,子链延伸 DNA加倍,MOVIE,PCR的基。

11、实时荧光定量PCR技术的原理及应用 （Real-time PCR）,神经感染组 金戈,提纲,实时荧光定量PCR原理实时荧光定量PCR的定量方法平台定量PCR仪器介绍,实时荧光定量PCR的定义,定义：在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实现了实时监测整个PCR进程，对起始模板进行定量分析的方法,与普通PCR的区别,普通PCR技术：在PCR结束后对终点产物进行定量分析实时定量PCR技术： 实时检测PCR扩增，在扩增的指数期对 起始模板进行定量,起点定量和终点定量,起始DNA量是“天然”的量，更有意义；终点DNA量是经过PCR“加工”后的量，存在部分失真起点。

12、第二章 PCR技术的原理及应用,故事发生在1983年 的春夏之交,Kary B. Mullis (1944 -)，在Cetus公司工作期间，发明了PCR。 他原本是要合成DNA引物来进行测序工作， 却常为没有足够多的模板DNA而烦恼。1983年春夏之交的一个晚上，他开车去乡下别墅的路上萌发了用两个引物（而不是一个引物）去扩增模板DNA 的想法.,很少有在公司工作的科研人员得 诺贝尔奖， Mullis是其中之一,Mullis开车的时候, 瞬间感觉两排路灯就是DNA的两条链，自己的车和对面开来的车象是DNA聚合酶，面对面地合成着DNA， ,Mullis的第一个PCR实验,1983年9月中旬。 Mullis在。

13、,实时荧光定量PCR技术的原理(Real time Quantitative PCR)吴智明,实时荧光定量PCR定义：,在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实现了实时监测整个PCR进程，对起始模板进行定量分析的方法。,与普通PCR的区别,普通PCR技术：在PCR结束后对终点产物进行定量分析。实时定量PCR技术： 实时检测PCR扩增，在扩增的指数期对起 始模板进行定量。,荧光阈值是在荧光扩增曲线上人为设定的一个值，它可以设定在荧光信号指数扩增阶段任意位置上，一般荧光阈值的设置是 基线（背景）荧光信号的标准偏差的 10 倍。每个反应管内的荧光信号到达设定。

14、荧光定量 PCR技术的原理及其应用 基因有限公司 技术支持部 张会敏 实时荧光定量 PCR 实时荧光定量 PCR （ real-time Q-PCR ）技术 :指在 PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个 PCR进程，最后通过参照标准曲线对反应体系中未知模板进行量化分析的方法。 定量 PCR技术的产生 1992年由 Higuchi等人第一次报告：使用 EB内插染料法插至双链 DNA， 经改装的带有冷 CCD的 PCR仪检测样品的荧光强度，后来用与双链 DNA有更强结合力的染料 SYBR Green I取代 EB 90年代早期，发现 Taq DNA多聚酶具有 5核酸外切酶活性，能在 DNA双。

15、PCR技术的原理、操作及应用,湖南省疾病预防控制中心微生物检验科 黄一伟,什么是PCR,PCR: Polymerase chain reaction，即聚合酶链反应 是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术,PCR技术的发展历史,关于PCR 的文章首次由美国科学家 Kary Mullis等人在 Science杂志上发表 Science杂志报道了耐热性DNA多聚酶 Taq酶（生活在温泉中的水生嗜热杆菌内提取到的一种耐热的DNA聚合酶 ）的发现,预示着分子时代的到来。12月Science杂志将PCR和它所使用的聚合酶命名为第一个“年度分子”。1993 Kary Mullis 因PCR的发明获得诺贝尔化学奖。,PCR技术的原理。

16、PCR技术原理及其应用,1 PCR技术原理 2 PCR技术应用,第一节 PCR技术原理,一、PCR技术简史,DNA的复制 聚合酶链反应的发明,PCR技术简史,DNA的复制 聚合酶链反应的发明,引物酶,引物酶,PCR技术简史,DNA的复制 聚合酶链反应的发明,DNA 聚合酶,DNA 聚合酶,PCR技术简史,DNA的复制 聚合酶链反应的发明,PCR技术简史,DNA的复制 聚合酶链反应的发明,Kary B. Mullis,1989年美国Science杂志列PCR 为十余项重大科学发明之首,比喻1989年为PCR爆炸年,Mullis荣获1993年度诺贝尔化学奖。,引物,引物,Mullis的构思,DNA聚合酶,DNA聚合酶,特定DNA片段,Taq DNA聚合。

17、PCR技术的原理及其应用,PCR技术简史,最早，Korana于1971年提出核酸体外扩增的设想：“经过DNA变性，与合适的引物杂交，用DNA聚合酶延伸引物，并不断重复该过程便可克隆tRNA基因”。1985年美国PE-Cetus公司人类遗传研究室的Mullis等发明了聚合酶链反应。其原理类似于DNA的体内复制，只是在试管中给DNA的体外合成提供一种合适的条件模板DNA，寡核苷酸引物，DNA聚合酶，合适的缓冲体系，DNA变性、复性及延伸的温度与时间。,1988年Saiki 等从温泉中分离的一株水生嗜热杆菌(thermus aquaticus) 中提取到一种耐热的DNA聚合酶。此酶耐高温，并提。

18、PCR技术的原理及应用,PCR技术简史,DNA的复制 核酸体外扩增的设想 聚合酶链反应的发明,PCR技术简史,DNA的复制 核酸体外扩增的设想 聚合酶链反应的发明,引物酶,引物酶,PCR技术简史,DNA的复制 核酸体外扩增的设想 聚合酶链反应的发明,DNA 聚合酶,DNA 聚合酶,PCR技术简史,DNA的复制 核酸体外扩增的设想 聚合酶链反应的发明,PCR技术简史,DNA的复制 核酸体外扩增的设想 聚合酶链反应的发明,Kary B. Mullis,1989年美国Science杂志列PCR 为十余项重大科学发明之首,比喻1989年为PCR爆炸年,Mullis荣获1993年度诺贝尔化学奖。,生物样品,DNA片段,基因。

19、PCR技术的原理及其应用PCR技术简史最早， Korana于 1971年提出核酸体外扩增的设想： “经过 DNA变性，与合适的引物杂交，用 DNA聚合酶延伸引物，并不断重复该过程便可克隆 tRNA基因 ”。1985年美国 PE-Cetus公司人类遗传研究室的 Mullis等发明了聚合酶链反应。其原理类似于 DNA的体内复制，只是在试管中给 DNA的体外合成提供一种合适的条件 模板 DNA， 寡核苷酸引物， DNA聚合酶，合适的缓冲体系， DNA变性、复性及延伸的温度与时间。1988年 Saiki 等从温泉中分离的一株水生嗜热杆菌(thermus aquaticus) 中提取到一种耐热的 DNA聚合酶。此。

20、聚合酶链式反应（PCR）原理和应用,PCR原理与特点,PCR: Polymerase Chain Reaction聚合酶链式反应,一种选择性体外扩增DNA片断的技术广泛应用于生物医学的研究中是分子生物学的主流技术，是所有扩增技术中应用范围最广的一种技术。,PCR的操作过程,Step 1: 变性 Step 2: 退火 Step 3: 延伸,PCR 循环 第一步 变性 （使双链DNA解链为单链93-95 20-30秒）,PCR循环,PCR循环 第二步 退火 （温度由引物长度和GC含量决定，一般在55C左右。增加温度能减少引物与模板的非特异性结合;降低温度可增加反应的灵敏性。）,PCR循环,PCR循环 第三步 延伸 （70-。