内切酶酶切

1、NEBuffer Activity Chart for Restriction EnzymesNew England Biolabs provides a color-coded 10X NEBuffer with every restriction endonuclease to ensure 100% activity. To help select the best conditions for double digests, this chart shows the optimal (supplied) NEBuffer and approximate activity in the four standard NEBuffers for each enzyme. If BSA is supplied with an enzyme, it is included in all NEBuffer activity reactions. In addition, the table also shows recommended reaction temperature, heat 。

2、限制性核酸内切酶,概念,限制性核酸内切酶是一类能够识别双链DNA分子中的某链的核酸内切酶。 主要存在于原核生物，是原核生物自我保护的一种机制（限制修饰系统）。,类似于DNA测序中的化学修饰法,第1个字母取自它来源细菌的种名的头2个字母，小写 第4个字母代表株 最后用大写罗马数字，代表同一菌株中不同限制酶的编号,命名限制酶由三部分构成，即菌种名、菌系编号、分离顺序。,Hin d,Haemophilus influenzae d株 流感嗜血杆菌d株的第三种酶,限制性内切酶的类型,根据限制性内切酶的识别位点和切割位点以及所需要的辅分为3种不同类型。I 型。

3、ApaI （类型：Type II restriction enzyme ） 识别序列： 5GGGCCC 3BamHI（类型： Type II restriction enzyme ） 识别序列： 5 GGATCC 3BglII （类型： Type II restriction enzyme ） 识别序列： 5 AGATCT 3EcoRI （类型：Type II restriction enzyme ） 识别序列： 5 GAATTC 3HindIII （类型：Type II restriction enzyme ） 识别序列： 5 AAGCTT 3KpnI （类型：Type II restriction enzyme ） 识别序列： 5 GGTACC 3NcoI （类型：Type II restriction enzyme ） 识别序列： 5 CCATGG 3NdeI （类型：Type II restriction enzy。

4、DNA 的限制性内切酶酶切分析,实验九,1.酶切: 20ul反应体系 组分 加入体积 灭菌双蒸水 12l 10buffer H(含BSA) 2l 质粒DNA 5l 4U/ul EcoRI 1l 掌型离心机混匀，37水浴反应50min,操作步骤（改动）,EcoR I的作用模式图:,产生5 突出粘性末端,*GAATTC*CTTAAG*,5,3,5,3,EcoR I,*G,*CTTAA,5,3,OH,P,AATTC*,G*,3,5,P,OH,5。

5、一、 前言：1950年科學家發現噬菌體 ( phage) 對大腸桿菌的不同菌株 (strain) 具有不同的感染能力。1962年瑞士科學家 Werner Arber等人證實 E. coli K菌株可產生一種酵素能水解 phage 的 DNA，因而稱為限制酵素。1970年科學家開始利用限制酵素來處理自細胞分離出的長條型 DNA，以得到固定大小的特定 DNA片段，可應用在基因組結構與重組 DNA的研究。二、 目的：1. 將分離得到的質體 DNA，以不同的限制酶切割，經 agarose膠電泳分離 DNA片段後，檢定質體圖譜或截切所需 DNA片段，以進行重組質體 DNA（recombinant plasmid DNA）之建構。2. 。

6、DNA 的限制性内切酶酶切分析,实验十二,限制性内切酶(Restriction Endonuclease,RE): 由细菌自身产生，能识别双链DNA分子中特定的碱基顺序，以内切方式水解核酸中的磷酸二酯键，产生粘性末端或平头末端,实验原理,EcoR I的作用模式图:,产生5 突出粘性末端,*GAATTC* *CTTAAG*,5,3,5,3,EcoR I,*G,*CTTAA,5,3,OH,P,AATTC*,G*,3,5,P,OH,5,5,EcoR I,Bcl-2 (1.9kb),pBS (2.96kb),pBS-Bcl-2 (4.86kb),Bcl-2重组质粒的酶切模式图,1.酶切: 20ul反应体系组分 加入体积灭菌双蒸水 11ul10buffer H(含BSA） 2ul质粒DNA 5ul10U/ul EcoRI 2ul掌型离心机混匀。

7、一、DNA的限制性酶切实验原理,实验三 质粒DNA限制性酶切图谱分析,核酸限制性内切酶是一类能识别双链中特定碱基顺序的核酸水解酶，这些酶都是从原核生物中发现，它们的功能犹似高等功物的免疫系统， 用于抗击外来的侵袭。 限制性内切酶以内切方式水解核酸链中的磷酸二酯键， 产生的片段端为，端为。,根据限制酶的识别切割特性， 催化条件及是否具有修饰酶活性可分为、型三大类。 第一类（I型）限制性内切酶能识别专一的核苷酸顺序，它们在识别位点很远的地方任意切割DNA链，但是切割的核苷酸顺序没有专一性，是随机的。这类限制性内切酶在D。

8、限制性内切酶酶切的常见问题及解决方法限制性内切酶酶切的常见问题及解决方法，个人觉得总结得很好，特供大家分享。酶切现问题，看内切酶说明书，相应试剂公司目录。不同公司出产的内切酶，菌株来源、制备工艺、纯度活力、酶切活性优化可能不同，。可在上面找到酶单位定义、保存条件、酶切体系buffer 及与其它酶双切的 buffer 等、酶切反应温度有些酶是在 50、55 或 30 等温度下反应的、酶是否受甲基化影响、是否有星号活性及出现星号活可能因素、保护性碱基 ，同尾酶、同裂酶 1. 酶切不开或不完全1.1 质粒问题 纯度差或残留酶切抑制物最。

9、DNA 分子克隆,Contents,. DNA 分子克隆的基本原理,基因（gene）一段DNA或RNA顺序。该顺序可以产生或影响某种表型（genotype，phenotype），代表一个遗传单位，一个功能单位，一个突变单位。基因工程（genetic engineering）在体外通过人工剪、接，将不同来源的DNA分子组成一个杂合DNA分子(DNA分子重组体)，然后导入宿主细胞去复制扩增或表达。因为通过人工设计,得到一定的设计方案，故称为基因工程。由于整个操作在分子水平上进行，所以也称分子克隆。基因工程的基本特点是，分子水平操作，细胞水平表达。,在这个过程中： 1.“基因剪刀” 。

10、限制性内切酶1，发现限制性内切酶能保护细菌不受噬菌体的感染，行使微生物免疫功能，缺乏限制性内切酶的大肠杆菌极易被噬菌体感染，但是如果拥有限制性内切酶，被感染的几率就会降低。限制性内切酶在原核生物中普遍存在，所有自由生存的细菌和古细菌几乎都能编码限制性内切酶。2，限制-修饰（R-M）系统大多数限制性内切酶常常伴随有一两种修饰酶（DNA 甲基化酶） ，从而保护细胞自身的 DNA 不被限制性内切酶破坏。修饰酶识别的位点与相应的限制性内切酶相同，但它们的作用是甲基化每条链中的一个碱基，而不是切开 DNA 链。甲基化所形成的。

11、实验五 DNA 的限制性内切酶酶切反应DNA restriction enzyme digestion一、实验目的通过本实验掌握 DNA 的限制性内切酶酶切反应的基本原理与实验过程。二、实验原理限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的 DNA 序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链 DNA。它可分为三类:类和类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于 ATP 的存在。类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远处的 DNA，而类酶在识别位点上切割 DNA 分子,然后从底物上解离。类由两种酶组成: 一种为限制性内切核酸酶(限制酶),它切割某。

12、实验八 DNA的限制性内切酶酶切和鉴定,一、实验目的 掌握限制性内切酶的特性。 了解限制性内切酶的用途。,二、DNA限制性内切酶概述和分析 限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA。它可分为三类:类和类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP的存在。类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远处的DNA，而类酶在识别位点上切割DNA分子,然后从底物上解离。类由两种酶组成: 一种为限制性内切核酸酶(限制酶),它切割某一特异的核苷酸序列; 另一种为独立。

13、限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶是可以识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶，简称限制酶。根据限制酶的结构,辅因子的需求切位与作用方式，可将限制酶分为三种类型，分别是第一型(TypeI)、第二型(TypeII)及第三型(TypeIII)。型限制性内切酶既能催化宿主DNA的甲基化，又催化非甲基化的DNA的水解;而型限制性内切酶只催化非甲基化的DNA的水解。III型限制性内切酶同时具有修饰及认知切割的作用。目录限制性内切酶的定义:限制性内切酶的由来限制酶的分布限制性内切酶的分类和性质用途命名类型第。

14、核 酸 外 切 酶 （ exonuclease） 核酸外切酶是一类能从多核苷酸链的一端开始按序催化水 解 3、 5-磷 酸 二 酯 键 ，降解核 苷 酸 的酶。其水解的最终产物是单个的核苷酸（DNA 为 dNTP，RNA 为 NTP） 。按作用的特性差异可以将其分为单链的核酸外切酶和双链的核酸外切酶。 单链的核酸外切酶包括大 肠 杆 菌 核酸外切酶（exo）和核酸外切酶（exo） 。核酸外切酶（exo）能够从 5-末 端 或 3-末 端 呈单链状态的 DNA 分子上降解 DNA，产生出寡核苷酸短片段，而且是唯 一 不 需 要 Mg2+离 子 的 活 性 酶 ，是一种耐受性很强的核酸酶。核酸外。

15、DNA 限制性内切酶酶切 Buffer 组分及其活性TaKaRa 公司，为了方便限制酶的统一使用，采用了通用缓冲液 (Universal Buffer) 测定限制酶活性的体系 (5 种通用缓冲液中，用 标注的)，以此时的活性值作为 100%。并把在其它通用缓冲液中的相对活性表示如下表。有 ( ) 标记的是易受 Star 活性影响的缓冲液，为了避免 Star 活性的影响，希望尽量使用 或 标注的缓冲液。每种限制酶都有其自身的基本缓冲液 (BasalBuffer)，其中Acc、Bal 、Bcn 、Bgl、 Bpu1102、Cfr 10、Eam 1105、Eco52、Nru、PshB、SnaB、Ssp 、Taq、VpaK11B (共 14 种) 由于没有。

16、实验十,DNA的限制性 内切酶酶切,一、实验目的,了解核酸限制性内切酶的特点及其对DNA的酶切过程 学会设计构建体外重组DNA分子的方法，并根据目的基因合理选择载体与限制性内切酶以及DNA的酶切技术,二、实验原理,EcoRI限制性内切酶的识别与切割顺序为：5GAATTC33CTTAAG5 Xhol I限制性内切酶的识别与切割顺序为：5CTCGAG33TAGCTC5,三、实验材料,仪器：水浴锅、制冰机、离心机、电泳设备、各式移液枪、核酸紫外检测仪等。 1.5ml离心管、移液枪枪头等。 DNA样品：上一个实验获得的质粒DNA 限制性内切酶Xhol I和EcoR I（Takara）,四、实验步骤,。

17、实验九、DNA 的限制性内切酶酶切一、实验目的1、了解核酸限制性内切酶的特点及其对 DNA 的酶切过程。2、 学会设计构建体外重组 DNA 分子的方法，并根据目的基因合理选择载体与限制性内切酶以及 DNA 的酶切技术。二、实验原理EcoR I 限制性内切酶的识别与切割顺序为：5GAATTC33CTTAAG5Xho I 限制性内切酶的识别与切割顺序为：5CTCGAG33TAGCTC5三、实验材料1、仪器：水浴锅、制冰机、离心机、电泳设备、各式移液枪、核酸紫外检测仪等。2、1.5ml 离心管、移液枪枪头等。3、DNA 样品：上一个实验获得的质粒 DNA4、限制性内切酶 Xho I 和 EcoR 。

18、 % Activity in NEBuffersEnzymeSupplied NEBuffer 1 2 3 4Aat II 4 0 50 50 100Acc I 4 50 50 10 100Acc65 I 3 + BSA 10 75 100 25Aci I 3 25 50 100 50Acl I 4 + BSA 10 10 0 100Afe I * SE-Y 25 50 25 100Afl II 2 + BSA 50 100 25 100Afl III 3 + BSA 25 75 100 50Age I 1 100 50 10 75Ahd I 4 + BSA 25 75 0 100Ale I 4 10 20 10 100Alu I 2 100 100 75 100Alw I 4 50 100 10 100AlwN I 4 50 100 50 100Apa I 25C 4 + BSA 25 50 0 100ApaL I 4 + BSA 100 100 10 100Apo I 50C 3 + BSA 10 75 100 75Asc I 4 0 10 10 100。

19、一、限制性内切酶酶切注意事项在进行限制性酶切反应过程中，影响限制性酶切反应效果的因素较多，要设计酶切反应，一般均应考虑诸如酶切系统、温度条件、反应体积、底物性质及星型反应等因素。根据各种不同的条件，酶切反应的设计一般应注意以下问题：1. 大多数限制酶贮存在 50甘油溶液中，以避免在-20条件下结冰。当最终反应液中甘油浓度大于 12时，某些限制酶的识别特异性降低，从而产生星活性，更高浓度的甘油会抑制酶活性。因此加入反应的酶体积不超过反应总体积的 1/10，避免限制酶活性受到甘油的影响。2. 浓缩的限制酶可在使用前用 1。

20、第五课,DNA限制性内切酶酶切反应,一、核酸限制性内切酶,核酸限制性内切酶是一类能识别双链DNA特定碱基序列的核酸水解酶。这些酶都是在原核生物中发现的，可以为宿主抵御外来DNA的侵袭。根据酶的切割特性、催化条件及是否具有修饰性可分为I、II、III型三大类。 I型酶具有核酸内切酶、甲基化酶、ATP酶和DNA解旋酶四种活性。其内切酶的识别位点和切割部位不一致，无固定的切割位点，不产生特异片断。 II。