1、实验九、DNA 的限制性内切酶酶切一、实验目的1、了解核酸限制性内切酶的特点及其对 DNA 的酶切过程。2、 学会设计构建体外重组 DNA 分子的方法，并根据目的基因合理选择载体与限制性内切酶以及 DNA 的酶切技术。二、实验原理EcoR I 限制性内切酶的识别与切割顺序为：5GAATTC33CTTAAG5Xho I 限制性内切酶的识别与切割顺序为：5CTCGAG33TAGCTC5三、实验材料1、仪器：水浴锅、制冰机、离心机、电泳设备、各式移液枪、核酸紫外检测仪等。2、1.5ml 离心管、移液枪枪头等。3、DNA 样品：上一个实验获得的质粒 DNA4、限制性内切酶 Xho I 和 EcoR I
2、（Takara）四、实验步骤酶切体系：质粒 DNA 5ulEcoR 1ulXhol 1ul2Buffer H 2ulSw 11ulTotal 20ul1、用微量移液枪（20 微升）依次吸取 SW、10 倍酶切缓冲液、DNA、EcoR I、Xhol I。2、盖紧上述两个 1.5ml 离心管的盖子，在振荡器上充分混匀 2 秒钟，立即于离心机内离心一下，以将管壁上的液体集中于管底。3、将离心管放置 37水浴锅中反应 3 小时。在酶切反应的同时，制备 1.0%的琼脂糖凝胶，并准备好电泳装置。五、实验结果很明显 17 组由于样品里的目的片段 DNA 量太少，所以没有检测到。观察其他组的结果可知，酶切后产生 2 条条带，由于质粒 DNA是一种环状闭合双链 DNA，这与质粒 DNA 被两不同的限制性核酸内切酶酶切后的 DNA 数符合。
