1、实验十,DNA的限制性 内切酶酶切,一、实验目的,了解核酸限制性内切酶的特点及其对DNA的酶切过程 学会设计构建体外重组DNA分子的方法，并根据目的基因合理选择载体与限制性内切酶以及DNA的酶切技术,二、实验原理,EcoRI限制性内切酶的识别与切割顺序为：5GAATTC33CTTAAG5 Xhol I限制性内切酶的识别与切割顺序为：5CTCGAG33TAGCTC5,三、实验材料,仪器：水浴锅、制冰机、离心机、电泳设备、各式移液枪、核酸紫外检测仪等。 1.5ml离心管、移液枪枪头等。 DNA样品：上一个实验获得的质粒DNA 限制性内切酶Xhol I和EcoR I（Takara）,四、实验步骤,酶
2、切体系：,质粒DNA 5ul EcoR 1ul Xhol 1ul 2Buffer H 2ul Sw 11ul Total 20ul,用微量移液枪（20微升）依次吸取 SW 10倍酶切缓冲液 DNA EcoR I Xhol I,盖紧上述两个1.5ml离心管的盖子，在振荡器上充分混匀2秒钟，立即于离心机内离心一下，以将管壁上的液体集中于管底。 将离心管放置37水浴锅中反应3小时。在酶切反应的同时，制备1.0%的琼脂糖凝胶，并准备好电泳装置。,五、实验结果,根据电泳结果，描述酶切的结果与效果。,M 1 2,4900bp,1518bp,Analysis of recombinant expression vector with restriction enzyme M. DNA Marker(Lambda DNA/Hind III+EcoR I Markers) 1. pGEX 6p-1-hly/BamH I/Xho I 2. pGEX 6p-1 / EcoR I,重组质粒pGEX 6p-1-hly酶切结果,bp,19329,6223,1489,4254,2590,7743,1882,3472,
