,实验八 DNA的限制性内切酶酶切和鉴定,一、实验目的 掌握限制性内切酶的特性。 了解限制性内切酶的用途。,二、DNA限制性内切酶概述和分析 限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA。它可分为三类:类和类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和
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1、实验八 DNA的限制性内切酶酶切和鉴定,一、实验目的 掌握限制性内切酶的特性。 了解限制性内切酶的用途。,二、DNA限制性内切酶概述和分析 限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA。它可分为三类:类和类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP的存在。类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远处的DNA，而类酶在识别位点上切割DNA分子,然后从底物上解离。类由两种酶组成: 一种为限制性内切核酸酶(限制酶),它切割某一特异的核苷酸序列; 另一种为独立。
2、实验十,DNA的限制性 内切酶酶切,一、实验目的,了解核酸限制性内切酶的特点及其对DNA的酶切过程 学会设计构建体外重组DNA分子的方法，并根据目的基因合理选择载体与限制性内切酶以及DNA的酶切技术,二、实验原理,EcoRI限制性内切酶的识别与切割顺序为：5GAATTC33CTTAAG5 Xhol I限制性内切酶的识别与切割顺序为：5CTCGAG33TAGCTC5,三、实验材料,仪器：水浴锅、制冰机、离心机、电泳设备、各式移液枪、核酸紫外检测仪等。 1.5ml离心管、移液枪枪头等。 DNA样品：上一个实验获得的质粒DNA 限制性内切酶Xhol I和EcoR I（Takara）,四、实验步骤,。
3、DNA 的限制性内切酶酶切分析,实验十二,限制性内切酶(Restriction Endonuclease,RE): 由细菌自身产生，能识别双链DNA分子中特定的碱基顺序，以内切方式水解核酸中的磷酸二酯键，产生粘性末端或平头末端,实验原理,EcoR I的作用模式图:,产生5 突出粘性末端,*GAATTC* *CTTAAG*,5,3,5,3,EcoR I,*G,*CTTAA,5,3,OH,P,AATTC*,G*,3,5,P,OH,5,5,EcoR I,Bcl-2 (1.9kb),pBS (2.96kb),pBS-Bcl-2 (4.86kb),Bcl-2重组质粒的酶切模式图,1.酶切: 20ul反应体系组分 加入体积灭菌双蒸水 11ul10buffer H(含BSA） 2ul质粒DNA 5ul10U/ul EcoRI 2ul掌型离心机混匀。
4、DNA 的限制性内切酶酶切分析,实验九,1.酶切: 20ul反应体系 组分 加入体积 灭菌双蒸水 12l 10buffer H(含BSA) 2l 质粒DNA 5l 4U/ul EcoRI 1l 掌型离心机混匀，37水浴反应50min,操作步骤（改动）,EcoR I的作用模式图:,产生5 突出粘性末端,*GAATTC*CTTAAG*,5,3,5,3,EcoR I,*G,*CTTAA,5,3,OH,P,AATTC*,G*,3,5,P,OH,5。
