分子生物学实验方法1

1、糖蛋白抗肿瘤的研究进展摘要 糖蛋白是由短的寡糖链与蛋白质共价相连构成的分子，是细胞的识别及体内功能多为糖蛋白介导。其独特免疫原性使其在抗肿瘤方面具显著效果。在这近几年来，糖蛋白发展迅速，本文就糖蛋白结构、功能及抗肿瘤方面研究进展进行综述。关键词 糖蛋白；生物学功能；抗肿瘤；前言 糖蛋白在生物体内是重要的生物活性物质，其糖链和蛋白相互作用介导细胞的专一性识别，调控各种生命过程如受精、发育、神经系统的维持，在目前炎症及癌细胞异常增殖、自身免疫系统中起重要作用。笔者就其糖蛋白的功能、及抗肿瘤方面国内外研。

2、分子生物学实验小技巧主要内容1.SDS-PAGE 2.双向电泳3.质粒提取 4.Western Blot5.溶液配制 6.PCR、酶切、连接并进行凝胶检测7.RNA 提取与检测 8.其他SDS-PAGE1.? ? ? SDS-PAGE 配制过程中，浓缩胶与分离胶可预先配好大体积（如 100ml）预制胶，储存在 4 度冰箱（注：10% APS，TEMED 不加） ，每次配置时只需吸取所需体积的预制胶加入相应体积 APS，TEMED 即可，预制胶可储存半年以上，能节省很多时间，更重要的是，可大大减少与丙稀酰胺的接触，减少中毒。 。2.? ? ? 配胶过程中，普通的 SDS-PAGE 中加入约 13%的甘油，可以提高分辨率，有。

3、Griffith19281889 年，生物化学家奥尔特曼（Altrmann）从酵母和动植物组织中终于制备出纯净的、不含蛋白质的细胞核中的酸性物质，将其称为核酸1、19281944 年，O.T.Avery 等证明了肺炎球菌转化因子是 DNA。2、1952 年，A.D.Hershey 和 M.Chase 用 35S 和 32P 分别标记 T2 噬菌体的蛋白质和核酸，感染大肠杆菌的实验进一步证明了核酸是遗传物质。3、1941 年 Beadlr G.W 和 Tatum E.L. 建立“一个基因-一种酶”学说: 用 X 射线诱导处理红色面包霉，筛选出被诱导的突变体来进行实验。根据遗传分析和大量研究，他们认为基因发生突变，就可能导。

4、现代分子生物学讲稿王庆容20132014 学年度第一学期1 绪论重点：1. 分子生物学的基本含义2. DNA 的发现3. 分子生物学与其他学科的关系难点：DNA 的发现课时分配：2分子生物学的基本含义分子生物学是从分子水平研究生命本质为目的的一门新兴边缘学科，它以核酸和蛋白质等生物大分子的结构及其在遗传信息和细胞信息传递中的作用为研究对象，是当前生命科学中发展最快并正在与其它学科广泛交叉与渗透的重要前沿领域。分子生物学的发展为人类认识生命现象带来了前所未有的机会，也为人类利用和改造生物创造了极为广阔的前景。所谓在分子水平上。

5、植物分子生物学实验技术班 级：研 122 班专 业：作物生物技术姓 名：陕建国学 号：20122419授课教师：李红英老师实验一：植物 DNA 和 RNA 提取方法的讨论一、提取植物 DNA 和 RNA 的用处提取植物组织的 DNA 和 RNA，分析其序列，了解序列的排列顺序可以更好的从分子水平上进行研究，从分子水平上改良植物或者说农作物的一些性状、品质等。（一）提取植物 DNA 的用处DNA 的提取在植物基因工程以及植物分子生物学研究中占有重要地位，DNA 的提取效率直接决定着后续实验的成败。另外，提取植物 DNA 在分子育种方面也有很重要的用处。（二）提。

6、1曲霉脂肪酶编码基因的克隆与表达分析接入载体为 pET-28a，外源基因为 AFL-1，PCR 产物直接酶切（NdeI/BamHI）后纯化连接 pET28a外源基因信息：http:/www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/?term=3504452 AFL1-1（Gene ID=3504452）序列信息统计如下：1 atggcttctc caattctgcg atcaccgatt acttcggacc tcgccaacgt aacacccgat61 ttggtggatg ttagcactcc cgaaaaattg aaatcctacc gcgaatcact tgaaccaatc121 ttcactttgg agaatatcat ccgagggaaa gagaacatca tctcctacga ggaactggac181 atcccaggcc ccgcaggacc gatgcgggcc accatcttcc gccccaagca ccaaacccac241 。

7、分子生物学实验院系：生命科学与技术学院专业： 生物科学（基地）班级： 201101 班 学号： 姓名： 分子生物学基础实验分子生物学实验技术已成为生物化学及分子生物学以及相关学科院系教学科研不可缺少的一部分。为提高学生在分子生物学技术方面的动手能力，生物技术综合实验室主要开设常用而基本的分子生物学实验技术。它的内容包括质粒 DNA 的制备；DNA 的重组；PCR 基因扩增等等。 实验一 质粒 DNA 的小量制备一、实验原理要把一个有用的外源基因通过基因工程手段，送进细胞中去进行繁殖和表达，需要运载工具，携带外源基因进入受体细胞。

8、生物秀论坛网上搜集，更多精彩内容请访问 http:/www.bbioo.com/bbs/index.php1国内重点实验室分子生物学实验方法汇总国内重点实验室分子生物学实验方法汇总国内重点实验室分子生物学实验方法汇总国内重点实验室分子生物学实验方法汇总P C R . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .。

9、 分子生物学基础实验 实验一 质粒 DNA 的小量制备一、实验原理载体 :要把一个有用的外源基因通过基因工程手段，送进细胞中去进行繁殖和表达，需要运载工具，携带外源基因进入受体细胞的这种工具就叫载体（vector） 。载体的设计和应用是 DNA 体外重组的重要条件。作为基因工程的载体必须具备下列条件:(1)是一个复制子，载体有复制点才能使与它结合的外源基因复制繁殖；（2）载体在受体细胞中能大量增殖，只有高复制率才能使外源基因在受体细胞中大量扩增；（3）载体 DNA 链上有 1 到几个限制性内切酶的单一识别与切割位点，便于外源基因的。

10、一名词解释IP（免疫沉淀、免疫印迹）：是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。这个实验是用特异性抗体结合细胞裂解液中的目的蛋白，洗涤后解离特异性抗体和目的蛋白质，经聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） ，最后用 Western blot 分析目的蛋白质。这种方法可以分析溶液中的、细胞内的、结合在细胞膜上的蛋白质或者受体，但只能是定性或者半定量的实验。NLS（核定位序列）：核定位信号是另一种形式的信号肽, 可位于多肽序列的任何部分。一般含有 48 个氨基酸, 且没有专一性, 作用是帮助亲核蛋白进入细胞。

11、分子生物学实验技术目录实验一 细菌的培养 2实验二 质粒 DNA 的提取 .3实验三 紫外吸收法测定核酸浓度与纯度 4实验四 水平式琼脂糖凝胶电泳法检测 DNA5实验五 质粒 DNA 酶切及琼脂糖电泳分析鉴定 .7实验六 植物基因组 DNA 提取、酶切及电泳分析 .8实验七 聚合酶链反应（PCR ）技术体外扩增 DNA 9实验八 RNA 提取与纯化 11实验九 RT-PCR 扩增目的基因 cDNA .13实验十 质粒载体和外源 DNA 的连接反应 .15实验十一 感受态细胞的制备及转化 16实验十二 克隆的筛选和快速鉴定 18实验十三 DNA 分析 Southern 杂交 19一 基本操作实验一、细菌培养。

12、实验一、菌株复壮与单菌落菌株的获取一、实验目的学习细菌培养的 LB 培养基及抗生素抗性筛选培养基的配制，掌握高压灭菌和获取细菌单菌落菌株两种基本实验操作技能。二、实验材料、设备及试剂1、实验材料大肠杆菌（E. coli ） DH5 菌株：R -，M -，Amp -2、实验设备恒温摇床，电热恒温培养箱，无菌工作台，高压灭菌锅3、试剂酵母浸膏，蛋白胨，氯化钠，琼脂，卡那霉素三、实验步骤液体 LB（Luria-Bertain）培养基配方：蛋白胨(typtone) 1.0% （1 g/100 ml）酵母提取物(Yeast extraction) 0.5% （0.5g/100 ml）氯化钠 1.0% （1 g/100 ml）P。

13、分子生物学基本技术- -第一章 质粒 DNA 的分离、纯化和鉴定第一节 概 述把一个有用的目的 DNA 片段通过重组 DNA 技术,送进受体细胞中去进行繁殖和表达的工具叫载体(Vector)。细菌质粒是重组 DNA技术中常用的载体。质粒(Plasmid)是一种染色体外的稳定遗传因子,大小从 1-200kb 不等,为双链、闭环的 DNA 分子,并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中,它具有自主复制和转录能力,能在子代细胞中保持恒定的拷贝数,并表达所携带的遗传信息。质粒的复制和转录要依赖于宿主细胞编码的某些酶和蛋白质,如离开宿主细。

14、分子生物学实验指导基础实验实验二十五 核糖核酸的测定【实验目的】1 掌握 RNA 的测定原理2 掌握 RNA 定量技术【实验原理】RNA 分子中的核糖在浓酸中加热，脱水转变成糖醛，后者在氯化铁存在下，与地衣酚试剂（3，5-二羟基甲苯）反应，缩合成绿色化合物，在 670nm 处有最大吸收峰，从而可进行定量测定。待测样品中的 RNA 浓度在 20200g/mL 之间时，其吸光度与浓度成正比。反应式如下：核 糖 糖 醛 绿色化合物【实验内容与方法】1取中试管 3 支，按表 2-17 操作表 2-17 RNA 的测定方法试 剂（mL） 标准管 标本管 空白管RNA 标准液 1.0RNA 。

15、分子生物学基础实验分子生物学实验技术已成为生物化学及分子生物学以及相关学科院系教学科研不可缺少的一部分。为提高学生在分子生物学技术方面的动手能力，生物技术综合实验室主要开设常用而基本的分子生物学实验技术。它的内容包括质粒 DNA 的制备；DNA 的重组；PCR 基因扩增等等。 实验一 质粒 DNA 的小量制备一、实验原理要把一个有用的外源基因通过基因工程手段，送进细胞中去进行繁殖和表达，需要运载工具，携带外源基因进入受体细胞的这种工具就叫载体（vector） 。载体的设计和应用是 DNA 体外重组的重要条件。作为基因工程的载体。

16、引物的设计在 PCR 反应中极为重要，应遵循几条原则：碱基组成，G C 含量应在4060% 长度，1825 个核苷酸，上下游引物的长度差别不能大于 3bp；不能有大于3bp 的反向重复序列或自身互补序列的存在，这种序列可能成发夹结构一个引物的 3末端都不能和其他任何引物互补，否则会形成引物二聚体解链温度（Tm）：计算出两个引物的 Tm 值相差不能大于 5 ，扩增产物的 Tm 值与引物的 Tm 值相差不能大于 10，这些特性保证了扩增产物在每个 PCR 循环可有效地变性； 3末端，每个因为的 3末端碱基应尽可能为 G 或 C，但又不推荐使用 3末端有NNCG 或NNGC 。

17、一、GST pull-down 实验基本原理:将靶蛋白-GST 融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上,作为与目的蛋白亲和的支撑物,充当一种“诱饵蛋白”,目的蛋白溶液过柱,可从中捕获与之相互作用的“捕获蛋白”(目的蛋白),洗脱结合物后通过 SDS-PAGE 电泳分析,从而证实两种蛋白间的相互作用或筛选相应的目的蛋白,“诱饵蛋白”和“捕获蛋白”均可通过细胞裂解物、纯化的蛋白、表达系统以及体外转录翻译系统等方法获得。此方法简单易行,操作方便。注：GST 即谷胱甘肽巯基转移酶(glutathione S-transferase)二、足印法（Footprinting）足印法（Footprintin。

18、实验一 大肠杆菌感受态细胞的制备及质粒转化【实验目的】熟悉利用 CaCl2 法制备大肠杆菌感受态细胞的操作及质粒转化大肠杆菌的方法。【实验原理】当大肠杆菌生长到 OD600 约为 0.20.4 时，用冰冷的氯化钙低渗溶液处理大肠杆菌细胞，细胞膨胀成球形，可使大肠杆菌进入一种易于接受外源 DNA 的状态（感受态） ，处于此状态的细胞称为感受态细胞（competent cells） 。此时，若在感受态细胞中加入质粒，则质粒DNA 与 Ca2+形成的复合物粘附于细胞表面，经过 42短暂的热激处理后，DNA 与 Ca2+形成的复合物进入大肠杆菌细胞，在不含抗生素的培养。

19、6 分子生物学研究方法（下） 基因功能研究技术,蛋白质是生命活动的主要执行者蛋白质的功能主要通过与蛋白质以及其他生物分子的相互作用来实现,6.1 蛋白质相互作用技术研究,举世瞩目的基因组计划使大量的新基因不断被发现，然而单纯的基因组DNA序列尚不能解答许多生命问题。基因是相对静态的，而基因编码的产物蛋白质则是动态的，具有时空性和调节性，是生物功能的主要体现者和执行者。蛋白质的表达水平、存在方式以及相互作用等直接与生物功能相关。在所有生命活动中，蛋白质之间的相互作用是必不可少的，它是细胞进行一切代谢活动的基础。

20、1分子生物学实验新疆农业大学农学院生物技术系2实验 1 植物总 DNA 的提取和紫外分析一、实验目的了解植物 DNA 提取的主要方法及其原理，掌握 SDS 法或 CTAB 法抽提植物总 DNA 的基本程序和操作要求。二、实验原理核酸分子是基因工程研究的主要对象，核酸样品的质量直接关系到基因研究一系列试验的成败。核酸包括 DNA 和 RNA 两种分子，在细胞中它们都是以与蛋白质结合的状态存在。真核生物的染色体 DNA 为双链线性分子，原核生物的“染色体”、质粒及真核细胞器 DNA为双链环状分子。一般地说，总 DNA 主要是指基因组 DNA（genomic DNA），。