1、森林培育专业毕业论文 精品论文 厚朴组织培养技术研究关键词：厚朴 组织培养 快速繁殖 植株再生摘要：本研究对厚朴组织培养技术体系进行了探索，分别对厚朴外植体灭菌、启动培养、愈伤组织芽诱导培养、继代增殖培养、生根培养以及炼苗移栽等方面进行了研究，着重探索了厚朴组织培养过程中最佳培养基配方及培养程序，对以后厚朴品种的改良及遗传转化等研究奠定了技术基础，并为厚朴的组培工厂化育苗提供了理论依据，具有重要的科学和经济价值。其主要研究结果如下：1.厚朴外植体材料本身消毒灭菌较困难且易受到季节因素的影响。就厚朴外植体的取材部位和取材时间来说，以 4 月-6 月取厚朴种子发芽苗茎经过 75酒精处理 30-45
2、s 后，再以 0.1HgCl2 溶液灭菌 6min 的处理效果最好，平均污染率只有 17.1，平均存活率为 70.1；其次是厚朴顶芽及侧芽以 75酒精处理 30-45s 后，再以 0.1HgCl2 溶液灭菌 8min，平均污染率为 30.3，平均存活率可以达到 69.3；以 7 月-9 月消毒最难，尤其是叶片、叶柄、侧芽最不容易消毒，平均污染率高达 60.4，而平均存活率仅有 17.5。 2.启动培养试验结果表明： (1)厚朴外植体的取材季节应选择 4 月-6 月为最佳，在 4-6月以材料以厚朴种子发芽苗茎最好；其余时间以厚朴顶芽及侧芽最好。 (2)在附加不同浓度 NAA 的 B5 培养基上，
3、厚朴外植体均可诱导出愈伤组织且不同浓度的 NAA 对厚朴外植体的启动速度有极显著性影响。当 NAA 浓度为 0.1mgL-1时，外植体启动速度最快，平均启动速度达到 9.55d。可见启动培养阶段对于厚朴外植体来说较低浓度的 NAA 促进启动速度加快，浓度升高时则有利于愈伤组织的形成。 (3)分别在 MS 和 B5 基本培养基上添加不同浓度 6-BA。两种基本培养基中 B5 培养基上的外植体平均启动速度为 15.85d，明显快于 MS 培养基上的平均启动速度；两种基本培养基对愈伤组织分化率的影响不显著，对芽体分化率的影响显著。以 B5 培养基对厚朴外植体芽体分化培养效果较好，平均芽体分化率达到
4、15.39，高于 MS 培养基的培养效果。对 6-BA 不同浓度水平对厚朴外植体培养结果研究发现不同浓度 6-BA 对启动速度影响均有显著性影响，当 6-BA4.0mgL-1 时启动速度最快，平均启动速度达到 14.28d，平均芽分化率也最大，达到 44.84。当是 6-BA 浓度为 3.0mgL-1 时，平均愈伤组织分化率最高，达到 45.95。 (4)在附加不同浓度 6-BA、2，4-D 的 B5 培养基上，各个处理均有一些愈伤组织产生和少量芽体分化。经过统计分析表明：6-BA 和 2，4-D 的浓度对厚朴外植体愈伤组织分化率均有极显著影响。因此，二者对愈伤组织诱导的最佳组合为：B5+6-
5、BA3.0mgL-1+2，4-D3.0mgL-1。不同的 6-BA 浓度水平还对厚朴外植体芽体分化率有极显著性影响，2，4-D 浓度水平则对厚朴外植体芽体分化率有显著性影响。因此，二者对芽分化诱导的最佳组合为：B5+6-BA4.5mgL-1+2，4-D2.0mgL-1。 (5)在附加不同浓度 6-BA、NAA 的 B5 培养基上，各处理也均有一些愈伤组织产生和芽体分化。经过统计分析表明；6-BA 和 NAA 的浓度对厚朴外植体愈伤组织分化率均有极显著影响。因此，二者对愈伤组织诱导的最佳组合为：B5+6-BA4.5mgL-1+NAA1.0mgL-1。不同的 6-BA 浓度水平还对厚朴外植体芽体分
6、化率有极显著性影响，NAA 浓度水平则对厚朴外植体芽体分化率有显著性影响。因此，二者对芽分化诱导的最佳组合为：B5+6-BA5.0mgL-1+NAA1.0mgL-1。 3.厚朴愈伤组织芽诱导培养试验中 6-BA 浓度和 NAA 浓度对厚朴愈伤组织芽诱导均有显著性影响，2，4-D 浓度则对芽诱导无显著性影响。6-BA 浓度、NAA 浓度、2，4-D 浓度三者对厚朴愈伤组织芽诱导效果影响的主次关系是 6-BA 浓度gt;NAA 浓度gt;2，4-D 浓度。厚朴愈伤组织芽诱导的最佳组合为：B5+6-BA5.0mgL-1+NAA1.0mgL-1+2，4-D1.0mgL-1，芽诱导率最高达 61.66。
7、 4.增殖培养试验中不同 6-BA 浓度水平对厚朴芽增殖系数有极显著性影响，不同 NAA 浓度水平对其增殖系数有显著性影响，蔗糖浓度对增殖系数无显著性影响。6-BA 浓度、NAA 浓度、蔗糖浓度三者对增殖效果影响的主次关系是：6-BA 浓度gt;NAA 浓度gt;蔗糖浓度。增殖培养的最佳组合为：B5+6-BA5.0mgL-1+NAA0.1mgL-1+蔗糖 15gL-1，增殖系数最高达 4.89。 5.在壮苗培养试验中 B5+NAA0.5mgL-1+GA30.3mgL-1 组合最有利于壮苗培养。 6.生根培养试验结果表明： (1)基本培养基、IBA 和 NAA 三者对生根率影响的主次关系为，基本
8、培养基gt;IBAgt;NAA。基本培养基与 IBA 的浓度水平对生根率有极显著性影响，而 NAA 浓度水平对生根率无显著性影响。B5基本培养基对厚朴组培苗生根率的效应最好，平均生根率达到 45.71。组培苗生根的最佳组合为：B5+IBA1.0mgL-1+NAA1.0mgL-1，高达 62.66。 (2)ABT1、ABT3 各浓度均可诱导生根，以处理 HG14：B5+ABT31.5mgL-1+蔗糖20gL-1 生根率最高，达到 61.23；其次是 HG12：B5+ABT13.0mgL-1+蔗糖20gL-1 生根率达到 60.01。 7.不同炼苗方式对组培苗移栽成活率有极显著影响。最佳处理方式是
9、：闭瓶锻炼 6d 后开瓶炼苗 6d 的移栽成活率最高，平均移栽成活率达 92.19；其次是闭瓶锻炼 6d 后开瓶炼苗 3d，平均移栽成活率也达到了 87.02。不同基质处理对移栽成活率有极显著影响。最有利于移栽的基质为沙：田园土=1：1，平均移栽成活率高达 86.03其次是沙，平均移栽成活率为 52.15。正文内容本研究对厚朴组织培养技术体系进行了探索，分别对厚朴外植体灭菌、启动培养、愈伤组织芽诱导培养、继代增殖培养、生根培养以及炼苗移栽等方面进行了研究，着重探索了厚朴组织培养过程中最佳培养基配方及培养程序，对以后厚朴品种的改良及遗传转化等研究奠定了技术基础，并为厚朴的组培工厂化育苗提供了理论
10、依据，具有重要的科学和经济价值。其主要研究结果如下： 1.厚朴外植体材料本身消毒灭菌较困难且易受到季节因素的影响。就厚朴外植体的取材部位和取材时间来说，以 4 月-6 月取厚朴种子发芽苗茎经过 75酒精处理 30-45s 后，再以 0.1HgCl2 溶液灭菌 6min 的处理效果最好，平均污染率只有 17.1，平均存活率为 70.1；其次是厚朴顶芽及侧芽以 75酒精处理30-45s 后，再以 0.1HgCl2 溶液灭菌 8min，平均污染率为 30.3，平均存活率可以达到 69.3；以 7 月-9 月消毒最难，尤其是叶片、叶柄、侧芽最不容易消毒，平均污染率高达 60.4，而平均存活率仅有 17
11、.5。 2.启动培养试验结果表明： (1)厚朴外植体的取材季节应选择 4 月-6 月为最佳，在 4-6 月以材料以厚朴种子发芽苗茎最好；其余时间以厚朴顶芽及侧芽最好。 (2)在附加不同浓度 NAA 的 B5 培养基上，厚朴外植体均可诱导出愈伤组织且不同浓度的 NAA 对厚朴外植体的启动速度有极显著性影响。当 NAA 浓度为 0.1mgL-1 时，外植体启动速度最快，平均启动速度达到 9.55d。可见启动培养阶段对于厚朴外植体来说较低浓度的 NAA 促进启动速度加快，浓度升高时则有利于愈伤组织的形成。 (3)分别在 MS 和 B5 基本培养基上添加不同浓度 6-BA。两种基本培养基中 B5 培养
12、基上的外植体平均启动速度为 15.85d，明显快于 MS 培养基上的平均启动速度；两种基本培养基对愈伤组织分化率的影响不显著，对芽体分化率的影响显著。以 B5 培养基对厚朴外植体芽体分化培养效果较好，平均芽体分化率达到 15.39，高于 MS 培养基的培养效果。对 6-BA 不同浓度水平对厚朴外植体培养结果研究发现不同浓度 6-BA 对启动速度影响均有显著性影响，当6-BA4.0mgL-1 时启动速度最快，平均启动速度达到 14.28d，平均芽分化率也最大，达到 44.84。当是 6-BA 浓度为 3.0mgL-1 时，平均愈伤组织分化率最高，达到 45.95。 (4)在附加不同浓度 6-BA
13、、2，4-D 的 B5 培养基上，各个处理均有一些愈伤组织产生和少量芽体分化。经过统计分析表明：6-BA 和2，4-D 的浓度对厚朴外植体愈伤组织分化率均有极显著影响。因此，二者对愈伤组织诱导的最佳组合为：B5+6-BA3.0mgL-1+2，4-D3.0mgL-1。不同的 6-BA 浓度水平还对厚朴外植体芽体分化率有极显著性影响，2，4-D 浓度水平则对厚朴外植体芽体分化率有显著性影响。因此，二者对芽分化诱导的最佳组合为：B5+6-BA4.5mgL-1+2，4-D2.0mgL-1。 (5)在附加不同浓度 6-BA、NAA 的B5 培养基上，各处理也均有一些愈伤组织产生和芽体分化。经过统计分析表
14、明；6-BA 和 NAA 的浓度对厚朴外植体愈伤组织分化率均有极显著影响。因此，二者对愈伤组织诱导的最佳组合为：B5+6-BA4.5mgL-1+NAA1.0mgL-1。不同的6-BA 浓度水平还对厚朴外植体芽体分化率有极显著性影响，NAA 浓度水平则对厚朴外植体芽体分化率有显著性影响。因此，二者对芽分化诱导的最佳组合为：B5+6-BA5.0mgL-1+NAA1.0mgL-1。 3.厚朴愈伤组织芽诱导培养试验中 6-BA 浓度和 NAA 浓度对厚朴愈伤组织芽诱导均有显著性影响，2，4-D 浓度则对芽诱导无显著性影响。6-BA 浓度、NAA 浓度、2，4-D 浓度三者对厚朴愈伤组织芽诱导效果影响的
15、主次关系是 6-BA 浓度gt;NAA 浓度gt;2，4-D 浓度。厚朴愈伤组织芽诱导的最佳组合为：B5+6-BA5.0mgL-1+NAA1.0mgL-1+2，4-D1.0mgL-1，芽诱导率最高达 61.66。 4.增殖培养试验中不同 6-BA 浓度水平对厚朴芽增殖系数有极显著性影响，不同 NAA 浓度水平对其增殖系数有显著性影响，蔗糖浓度对增殖系数无显著性影响。6-BA 浓度、NAA 浓度、蔗糖浓度三者对增殖效果影响的主次关系是：6-BA 浓度gt;NAA 浓度gt;蔗糖浓度。增殖培养的最佳组合为：B5+6-BA5.0mgL-1+NAA0.1mgL-1+蔗糖15gL-1，增殖系数最高达 4
16、.89。 5.在壮苗培养试验中 B5+NAA0.5mgL-1+GA30.3mgL-1 组合最有利于壮苗培养。 6.生根培养试验结果表明： (1)基本培养基、IBA 和 NAA 三者对生根率影响的主次关系为，基本培养基gt;IBAgt;NAA。基本培养基与 IBA 的浓度水平对生根率有极显著性影响，而 NAA 浓度水平对生根率无显著性影响。B5 基本培养基对厚朴组培苗生根率的效应最好，平均生根率达到 45.71。组培苗生根的最佳组合为：B5+IBA1.0mgL-1+NAA1.0mgL-1，高达 62.66。 (2)ABT1、ABT3 各浓度均可诱导生根，以处理 HG14：B5+ABT31.5mg
17、L-1+蔗糖 20gL-1 生根率最高，达到 61.23；其次是 HG12：B5+ABT13.0mgL-1+蔗糖 20gL-1 生根率达到60.01。 7.不同炼苗方式对组培苗移栽成活率有极显著影响。最佳处理方式是：闭瓶锻炼 6d 后开瓶炼苗 6d 的移栽成活率最高，平均移栽成活率达92.19；其次是闭瓶锻炼 6d 后开瓶炼苗 3d，平均移栽成活率也达到了87.02。不同基质处理对移栽成活率有极显著影响。最有利于移栽的基质为沙：田园土=1：1，平均移栽成活率高达 86.03其次是沙，平均移栽成活率为52.15。本研究对厚朴组织培养技术体系进行了探索，分别对厚朴外植体灭菌、启动培养、愈伤组织芽诱
18、导培养、继代增殖培养、生根培养以及炼苗移栽等方面进行了研究，着重探索了厚朴组织培养过程中最佳培养基配方及培养程序，对以后厚朴品种的改良及遗传转化等研究奠定了技术基础，并为厚朴的组培工厂化育苗提供了理论依据，具有重要的科学和经济价值。其主要研究结果如下： 1.厚朴外植体材料本身消毒灭菌较困难且易受到季节因素的影响。就厚朴外植体的取材部位和取材时间来说，以 4 月-6 月取厚朴种子发芽苗茎经过 75酒精处理 30-45s 后，再以 0.1HgCl2 溶液灭菌 6min 的处理效果最好，平均污染率只有 17.1，平均存活率为 70.1；其次是厚朴顶芽及侧芽以 75酒精处理 30-45s 后，再以 0
19、.1HgCl2 溶液灭菌 8min，平均污染率为 30.3，平均存活率可以达到 69.3；以 7 月-9 月消毒最难，尤其是叶片、叶柄、侧芽最不容易消毒，平均污染率高达 60.4，而平均存活率仅有 17.5。 2.启动培养试验结果表明： (1)厚朴外植体的取材季节应选择 4 月-6 月为最佳，在 4-6 月以材料以厚朴种子发芽苗茎最好；其余时间以厚朴顶芽及侧芽最好。 (2)在附加不同浓度 NAA 的 B5 培养基上，厚朴外植体均可诱导出愈伤组织且不同浓度的NAA 对厚朴外植体的启动速度有极显著性影响。当 NAA 浓度为 0.1mgL-1 时，外植体启动速度最快，平均启动速度达到 9.55d。可
20、见启动培养阶段对于厚朴外植体来说较低浓度的 NAA 促进启动速度加快，浓度升高时则有利于愈伤组织的形成。 (3)分别在 MS 和 B5 基本培养基上添加不同浓度 6-BA。两种基本培养基中 B5 培养基上的外植体平均启动速度为 15.85d，明显快于 MS 培养基上的平均启动速度；两种基本培养基对愈伤组织分化率的影响不显著，对芽体分化率的影响显著。以 B5 培养基对厚朴外植体芽体分化培养效果较好，平均芽体分化率达到 15.39，高于 MS 培养基的培养效果。对 6-BA 不同浓度水平对厚朴外植体培养结果研究发现不同浓度 6-BA 对启动速度影响均有显著性影响，当6-BA4.0mgL-1 时启动
21、速度最快，平均启动速度达到 14.28d，平均芽分化率也最大，达到 44.84。当是 6-BA 浓度为 3.0mgL-1 时，平均愈伤组织分化率最高，达到 45.95。 (4)在附加不同浓度 6-BA、2，4-D 的 B5 培养基上，各个处理均有一些愈伤组织产生和少量芽体分化。经过统计分析表明：6-BA 和2，4-D 的浓度对厚朴外植体愈伤组织分化率均有极显著影响。因此，二者对愈伤组织诱导的最佳组合为：B5+6-BA3.0mgL-1+2，4-D3.0mgL-1。不同的 6-BA 浓度水平还对厚朴外植体芽体分化率有极显著性影响，2，4-D 浓度水平则对厚朴外植体芽体分化率有显著性影响。因此，二者
22、对芽分化诱导的最佳组合为：B5+6-BA4.5mgL-1+2，4-D2.0mgL-1。 (5)在附加不同浓度 6-BA、NAA 的B5 培养基上，各处理也均有一些愈伤组织产生和芽体分化。经过统计分析表明；6-BA 和 NAA 的浓度对厚朴外植体愈伤组织分化率均有极显著影响。因此，二者对愈伤组织诱导的最佳组合为：B5+6-BA4.5mgL-1+NAA1.0mgL-1。不同的6-BA 浓度水平还对厚朴外植体芽体分化率有极显著性影响，NAA 浓度水平则对厚朴外植体芽体分化率有显著性影响。因此，二者对芽分化诱导的最佳组合为：B5+6-BA5.0mgL-1+NAA1.0mgL-1。 3.厚朴愈伤组织芽诱
23、导培养试验中 6-BA 浓度和 NAA 浓度对厚朴愈伤组织芽诱导均有显著性影响，2，4-D 浓度则对芽诱导无显著性影响。6-BA 浓度、NAA 浓度、2，4-D 浓度三者对厚朴愈伤组织芽诱导效果影响的主次关系是 6-BA 浓度gt;NAA 浓度gt;2，4-D 浓度。厚朴愈伤组织芽诱导的最佳组合为：B5+6-BA5.0mgL-1+NAA1.0mgL-1+2，4-D1.0mgL-1，芽诱导率最高达 61.66。 4.增殖培养试验中不同 6-BA 浓度水平对厚朴芽增殖系数有极显著性影响，不同 NAA 浓度水平对其增殖系数有显著性影响，蔗糖浓度对增殖系数无显著性影响。6-BA 浓度、NAA 浓度、蔗
24、糖浓度三者对增殖效果影响的主次关系是：6-BA 浓度gt;NAA 浓度gt;蔗糖浓度。增殖培养的最佳组合为：B5+6-BA5.0mgL-1+NAA0.1mgL-1+蔗糖15gL-1，增殖系数最高达 4.89。 5.在壮苗培养试验中 B5+NAA0.5mgL-1+GA30.3mgL-1 组合最有利于壮苗培养。 6.生根培养试验结果表明： (1)基本培养基、IBA 和 NAA 三者对生根率影响的主次关系为，基本培养基gt;IBAgt;NAA。基本培养基与 IBA 的浓度水平对生根率有极显著性影响，而 NAA 浓度水平对生根率无显著性影响。B5 基本培养基对厚朴组培苗生根率的效应最好，平均生根率达到
25、 45.71。组培苗生根的最佳组合为：B5+IBA1.0mgL-1+NAA1.0mgL-1，高达 62.66。 (2)ABT1、ABT3 各浓度均可诱导生根，以处理 HG14：B5+ABT31.5mgL-1+蔗糖 20gL-1 生根率最高，达到 61.23；其次是 HG12：B5+ABT13.0mgL-1+蔗糖 20gL-1 生根率达到60.01。 7.不同炼苗方式对组培苗移栽成活率有极显著影响。最佳处理方式是：闭瓶锻炼 6d 后开瓶炼苗 6d 的移栽成活率最高，平均移栽成活率达92.19；其次是闭瓶锻炼 6d 后开瓶炼苗 3d，平均移栽成活率也达到了87.02。不同基质处理对移栽成活率有极显
26、著影响。最有利于移栽的基质为沙：田园土=1：1，平均移栽成活率高达 86.03其次是沙，平均移栽成活率为52.15。本研究对厚朴组织培养技术体系进行了探索，分别对厚朴外植体灭菌、启动培养、愈伤组织芽诱导培养、继代增殖培养、生根培养以及炼苗移栽等方面进行了研究，着重探索了厚朴组织培养过程中最佳培养基配方及培养程序，对以后厚朴品种的改良及遗传转化等研究奠定了技术基础，并为厚朴的组培工厂化育苗提供了理论依据，具有重要的科学和经济价值。其主要研究结果如下： 1.厚朴外植体材料本身消毒灭菌较困难且易受到季节因素的影响。就厚朴外植体的取材部位和取材时间来说，以 4 月-6 月取厚朴种子发芽苗茎经过 75酒
27、精处理 30-45s 后，再以 0.1HgCl2 溶液灭菌 6min 的处理效果最好，平均污染率只有 17.1，平均存活率为 70.1；其次是厚朴顶芽及侧芽以 75酒精处理 30-45s 后，再以 0.1HgCl2 溶液灭菌 8min，平均污染率为 30.3，平均存活率可以达到 69.3；以 7 月-9 月消毒最难，尤其是叶片、叶柄、侧芽最不容易消毒，平均污染率高达 60.4，而平均存活率仅有 17.5。 2.启动培养试验结果表明： (1)厚朴外植体的取材季节应选择 4 月-6 月为最佳，在 4-6 月以材料以厚朴种子发芽苗茎最好；其余时间以厚朴顶芽及侧芽最好。 (2)在附加不同浓度 NAA
28、的 B5 培养基上，厚朴外植体均可诱导出愈伤组织且不同浓度的NAA 对厚朴外植体的启动速度有极显著性影响。当 NAA 浓度为 0.1mgL-1 时，外植体启动速度最快，平均启动速度达到 9.55d。可见启动培养阶段对于厚朴外植体来说较低浓度的 NAA 促进启动速度加快，浓度升高时则有利于愈伤组织的形成。 (3)分别在 MS 和 B5 基本培养基上添加不同浓度 6-BA。两种基本培养基中 B5 培养基上的外植体平均启动速度为 15.85d，明显快于 MS 培养基上的平均启动速度；两种基本培养基对愈伤组织分化率的影响不显著，对芽体分化率的影响显著。以 B5 培养基对厚朴外植体芽体分化培养效果较好，
29、平均芽体分化率达到 15.39，高于 MS 培养基的培养效果。对 6-BA 不同浓度水平对厚朴外植体培养结果研究发现不同浓度 6-BA 对启动速度影响均有显著性影响，当6-BA4.0mgL-1 时启动速度最快，平均启动速度达到 14.28d，平均芽分化率也最大，达到 44.84。当是 6-BA 浓度为 3.0mgL-1 时，平均愈伤组织分化率最高，达到 45.95。 (4)在附加不同浓度 6-BA、2，4-D 的 B5 培养基上，各个处理均有一些愈伤组织产生和少量芽体分化。经过统计分析表明：6-BA 和2，4-D 的浓度对厚朴外植体愈伤组织分化率均有极显著影响。因此，二者对愈伤组织诱导的最佳组
30、合为：B5+6-BA3.0mgL-1+2，4-D3.0mgL-1。不同的 6-BA 浓度水平还对厚朴外植体芽体分化率有极显著性影响，2，4-D 浓度水平则对厚朴外植体芽体分化率有显著性影响。因此，二者对芽分化诱导的最佳组合为：B5+6-BA4.5mgL-1+2，4-D2.0mgL-1。 (5)在附加不同浓度 6-BA、NAA 的B5 培养基上，各处理也均有一些愈伤组织产生和芽体分化。经过统计分析表明；6-BA 和 NAA 的浓度对厚朴外植体愈伤组织分化率均有极显著影响。因此，二者对愈伤组织诱导的最佳组合为：B5+6-BA4.5mgL-1+NAA1.0mgL-1。不同的6-BA 浓度水平还对厚朴
31、外植体芽体分化率有极显著性影响，NAA 浓度水平则对厚朴外植体芽体分化率有显著性影响。因此，二者对芽分化诱导的最佳组合为：B5+6-BA5.0mgL-1+NAA1.0mgL-1。 3.厚朴愈伤组织芽诱导培养试验中 6-BA 浓度和 NAA 浓度对厚朴愈伤组织芽诱导均有显著性影响，2，4-D 浓度则对芽诱导无显著性影响。6-BA 浓度、NAA 浓度、2，4-D 浓度三者对厚朴愈伤组织芽诱导效果影响的主次关系是 6-BA 浓度gt;NAA 浓度gt;2，4-D 浓度。厚朴愈伤组织芽诱导的最佳组合为：B5+6-BA5.0mgL-1+NAA1.0mgL-1+2，4-D1.0mgL-1，芽诱导率最高达
32、61.66。 4.增殖培养试验中不同 6-BA 浓度水平对厚朴芽增殖系数有极显著性影响，不同 NAA 浓度水平对其增殖系数有显著性影响，蔗糖浓度对增殖系数无显著性影响。6-BA 浓度、NAA 浓度、蔗糖浓度三者对增殖效果影响的主次关系是：6-BA 浓度gt;NAA 浓度gt;蔗糖浓度。增殖培养的最佳组合为：B5+6-BA5.0mgL-1+NAA0.1mgL-1+蔗糖15gL-1，增殖系数最高达 4.89。 5.在壮苗培养试验中 B5+NAA0.5mgL-1+GA30.3mgL-1 组合最有利于壮苗培养。 6.生根培养试验结果表明： (1)基本培养基、IBA 和 NAA 三者对生根率影响的主次关
33、系为，基本培养基gt;IBAgt;NAA。基本培养基与 IBA 的浓度水平对生根率有极显著性影响，而 NAA 浓度水平对生根率无显著性影响。B5 基本培养基对厚朴组培苗生根率的效应最好，平均生根率达到 45.71。组培苗生根的最佳组合为：B5+IBA1.0mgL-1+NAA1.0mgL-1，高达 62.66。 (2)ABT1、ABT3 各浓度均可诱导生根，以处理 HG14：B5+ABT31.5mgL-1+蔗糖 20gL-1 生根率最高，达到 61.23；其次是 HG12：B5+ABT13.0mgL-1+蔗糖 20gL-1 生根率达到60.01。 7.不同炼苗方式对组培苗移栽成活率有极显著影响。
34、最佳处理方式是：闭瓶锻炼 6d 后开瓶炼苗 6d 的移栽成活率最高，平均移栽成活率达92.19；其次是闭瓶锻炼 6d 后开瓶炼苗 3d，平均移栽成活率也达到了87.02。不同基质处理对移栽成活率有极显著影响。最有利于移栽的基质为沙：田园土=1：1，平均移栽成活率高达 86.03其次是沙，平均移栽成活率为52.15。本研究对厚朴组织培养技术体系进行了探索，分别对厚朴外植体灭菌、启动培养、愈伤组织芽诱导培养、继代增殖培养、生根培养以及炼苗移栽等方面进行了研究，着重探索了厚朴组织培养过程中最佳培养基配方及培养程序，对以后厚朴品种的改良及遗传转化等研究奠定了技术基础，并为厚朴的组培工厂化育苗提供了理论
35、依据，具有重要的科学和经济价值。其主要研究结果如下： 1.厚朴外植体材料本身消毒灭菌较困难且易受到季节因素的影响。就厚朴外植体的取材部位和取材时间来说，以 4 月-6 月取厚朴种子发芽苗茎经过 75酒精处理 30-45s 后，再以 0.1HgCl2 溶液灭菌 6min 的处理效果最好，平均污染率只有 17.1，平均存活率为 70.1；其次是厚朴顶芽及侧芽以 75酒精处理 30-45s 后，再以 0.1HgCl2 溶液灭菌 8min，平均污染率为 30.3，平均存活率可以达到 69.3；以 7 月-9 月消毒最难，尤其是叶片、叶柄、侧芽最不容易消毒，平均污染率高达 60.4，而平均存活率仅有 1
36、7.5。 2.启动培养试验结果表明： (1)厚朴外植体的取材季节应选择 4 月-6 月为最佳，在 4-6 月以材料以厚朴种子发芽苗茎最好；其余时间以厚朴顶芽及侧芽最好。 (2)在附加不同浓度 NAA 的 B5 培养基上，厚朴外植体均可诱导出愈伤组织且不同浓度的NAA 对厚朴外植体的启动速度有极显著性影响。当 NAA 浓度为 0.1mgL-1 时，外植体启动速度最快，平均启动速度达到 9.55d。可见启动培养阶段对于厚朴外植体来说较低浓度的 NAA 促进启动速度加快，浓度升高时则有利于愈伤组织的形成。 (3)分别在 MS 和 B5 基本培养基上添加不同浓度 6-BA。两种基本培养基中 B5 培养
37、基上的外植体平均启动速度为 15.85d，明显快于 MS 培养基上的平均启动速度；两种基本培养基对愈伤组织分化率的影响不显著，对芽体分化率的影响显著。以 B5 培养基对厚朴外植体芽体分化培养效果较好，平均芽体分化率达到 15.39，高于 MS 培养基的培养效果。对 6-BA 不同浓度水平对厚朴外植体培养结果研究发现不同浓度 6-BA 对启动速度影响均有显著性影响，当6-BA4.0mgL-1 时启动速度最快，平均启动速度达到 14.28d，平均芽分化率也最大，达到 44.84。当是 6-BA 浓度为 3.0mgL-1 时，平均愈伤组织分化率最高，达到 45.95。 (4)在附加不同浓度 6-BA
38、、2，4-D 的 B5 培养基上，各个处理均有一些愈伤组织产生和少量芽体分化。经过统计分析表明：6-BA 和2，4-D 的浓度对厚朴外植体愈伤组织分化率均有极显著影响。因此，二者对愈伤组织诱导的最佳组合为：B5+6-BA3.0mgL-1+2，4-D3.0mgL-1。不同的 6-BA 浓度水平还对厚朴外植体芽体分化率有极显著性影响，2，4-D 浓度水平则对厚朴外植体芽体分化率有显著性影响。因此，二者对芽分化诱导的最佳组合为：B5+6-BA4.5mgL-1+2，4-D2.0mgL-1。 (5)在附加不同浓度 6-BA、NAA 的B5 培养基上，各处理也均有一些愈伤组织产生和芽体分化。经过统计分析表
39、明；6-BA 和 NAA 的浓度对厚朴外植体愈伤组织分化率均有极显著影响。因此，二者对愈伤组织诱导的最佳组合为：B5+6-BA4.5mgL-1+NAA1.0mgL-1。不同的6-BA 浓度水平还对厚朴外植体芽体分化率有极显著性影响，NAA 浓度水平则对厚朴外植体芽体分化率有显著性影响。因此，二者对芽分化诱导的最佳组合为：B5+6-BA5.0mgL-1+NAA1.0mgL-1。 3.厚朴愈伤组织芽诱导培养试验中 6-BA 浓度和 NAA 浓度对厚朴愈伤组织芽诱导均有显著性影响，2，4-D 浓度则对芽诱导无显著性影响。6-BA 浓度、NAA 浓度、2，4-D 浓度三者对厚朴愈伤组织芽诱导效果影响的
40、主次关系是 6-BA 浓度gt;NAA 浓度gt;2，4-D 浓度。厚朴愈伤组织芽诱导的最佳组合为：B5+6-BA5.0mgL-1+NAA1.0mgL-1+2，4-D1.0mgL-1，芽诱导率最高达 61.66。 4.增殖培养试验中不同 6-BA 浓度水平对厚朴芽增殖系数有极显著性影响，不同 NAA 浓度水平对其增殖系数有显著性影响，蔗糖浓度对增殖系数无显著性影响。6-BA 浓度、NAA 浓度、蔗糖浓度三者对增殖效果影响的主次关系是：6-BA 浓度gt;NAA 浓度gt;蔗糖浓度。增殖培养的最佳组合为：B5+6-BA5.0mgL-1+NAA0.1mgL-1+蔗糖15gL-1，增殖系数最高达 4
41、.89。 5.在壮苗培养试验中 B5+NAA0.5mgL-1+GA30.3mgL-1 组合最有利于壮苗培养。 6.生根培养试验结果表明： (1)基本培养基、IBA 和 NAA 三者对生根率影响的主次关系为，基本培养基gt;IBAgt;NAA。基本培养基与 IBA 的浓度水平对生根率有极显著性影响，而 NAA 浓度水平对生根率无显著性影响。B5 基本培养基对厚朴组培苗生根率的效应最好，平均生根率达到 45.71。组培苗生根的最佳组合为：B5+IBA1.0mgL-1+NAA1.0mgL-1，高达 62.66。 (2)ABT1、ABT3 各浓度均可诱导生根，以处理 HG14：B5+ABT31.5mg
42、L-1+蔗糖 20gL-1 生根率最高，达到 61.23；其次是 HG12：B5+ABT13.0mgL-1+蔗糖 20gL-1 生根率达到60.01。 7.不同炼苗方式对组培苗移栽成活率有极显著影响。最佳处理方式是：闭瓶锻炼 6d 后开瓶炼苗 6d 的移栽成活率最高，平均移栽成活率达92.19；其次是闭瓶锻炼 6d 后开瓶炼苗 3d，平均移栽成活率也达到了87.02。不同基质处理对移栽成活率有极显著影响。最有利于移栽的基质为沙：田园土=1：1，平均移栽成活率高达 86.03其次是沙，平均移栽成活率为52.15。本研究对厚朴组织培养技术体系进行了探索，分别对厚朴外植体灭菌、启动培养、愈伤组织芽诱
43、导培养、继代增殖培养、生根培养以及炼苗移栽等方面进行了研究，着重探索了厚朴组织培养过程中最佳培养基配方及培养程序，对以后厚朴品种的改良及遗传转化等研究奠定了技术基础，并为厚朴的组培工厂化育苗提供了理论依据，具有重要的科学和经济价值。其主要研究结果如下： 1.厚朴外植体材料本身消毒灭菌较困难且易受到季节因素的影响。就厚朴外植体的取材部位和取材时间来说，以 4 月-6 月取厚朴种子发芽苗茎经过 75酒精处理 30-45s 后，再以 0.1HgCl2 溶液灭菌 6min 的处理效果最好，平均污染率只有 17.1，平均存活率为 70.1；其次是厚朴顶芽及侧芽以 75酒精处理 30-45s 后，再以 0
44、.1HgCl2 溶液灭菌 8min，平均污染率为 30.3，平均存活率可以达到 69.3；以 7 月-9 月消毒最难，尤其是叶片、叶柄、侧芽最不容易消毒，平均污染率高达 60.4，而平均存活率仅有 17.5。 2.启动培养试验结果表明： (1)厚朴外植体的取材季节应选择 4 月-6 月为最佳，在 4-6 月以材料以厚朴种子发芽苗茎最好；其余时间以厚朴顶芽及侧芽最好。 (2)在附加不同浓度 NAA 的 B5 培养基上，厚朴外植体均可诱导出愈伤组织且不同浓度的NAA 对厚朴外植体的启动速度有极显著性影响。当 NAA 浓度为 0.1mgL-1 时，外植体启动速度最快，平均启动速度达到 9.55d。可
45、见启动培养阶段对于厚朴外植体来说较低浓度的 NAA 促进启动速度加快，浓度升高时则有利于愈伤组织的形成。 (3)分别在 MS 和 B5 基本培养基上添加不同浓度 6-BA。两种基本培养基中 B5 培养基上的外植体平均启动速度为 15.85d，明显快于 MS 培养基上的平均启动速度；两种基本培养基对愈伤组织分化率的影响不显著，对芽体分化率的影响显著。以 B5 培养基对厚朴外植体芽体分化培养效果较好，平均芽体分化率达到 15.39，高于 MS 培养基的培养效果。对 6-BA 不同浓度水平对厚朴外植体培养结果研究发现不同浓度 6-BA 对启动速度影响均有显著性影响，当6-BA4.0mgL-1 时启动
46、速度最快，平均启动速度达到 14.28d，平均芽分化率也最大，达到 44.84。当是 6-BA 浓度为 3.0mgL-1 时，平均愈伤组织分化率最高，达到 45.95。 (4)在附加不同浓度 6-BA、2，4-D 的 B5 培养基上，各个处理均有一些愈伤组织产生和少量芽体分化。经过统计分析表明：6-BA 和2，4-D 的浓度对厚朴外植体愈伤组织分化率均有极显著影响。因此，二者对愈伤组织诱导的最佳组合为：B5+6-BA3.0mgL-1+2，4-D3.0mgL-1。不同的 6-BA 浓度水平还对厚朴外植体芽体分化率有极显著性影响，2，4-D 浓度水平则对厚朴外植体芽体分化率有显著性影响。因此，二者
47、对芽分化诱导的最佳组合为：B5+6-BA4.5mgL-1+2，4-D2.0mgL-1。 (5)在附加不同浓度 6-BA、NAA 的B5 培养基上，各处理也均有一些愈伤组织产生和芽体分化。经过统计分析表明；6-BA 和 NAA 的浓度对厚朴外植体愈伤组织分化率均有极显著影响。因此，二者对愈伤组织诱导的最佳组合为：B5+6-BA4.5mgL-1+NAA1.0mgL-1。不同的6-BA 浓度水平还对厚朴外植体芽体分化率有极显著性影响，NAA 浓度水平则对厚朴外植体芽体分化率有显著性影响。因此，二者对芽分化诱导的最佳组合为：B5+6-BA5.0mgL-1+NAA1.0mgL-1。 3.厚朴愈伤组织芽诱
48、导培养试验中 6-BA 浓度和 NAA 浓度对厚朴愈伤组织芽诱导均有显著性影响，2，4-D 浓度则对芽诱导无显著性影响。6-BA 浓度、NAA 浓度、2，4-D 浓度三者对厚朴愈伤组织芽诱导效果影响的主次关系是 6-BA 浓度gt;NAA 浓度gt;2，4-D 浓度。厚朴愈伤组织芽诱导的最佳组合为：B5+6-BA5.0mgL-1+NAA1.0mgL-1+2，4-D1.0mgL-1，芽诱导率最高达 61.66。 4.增殖培养试验中不同 6-BA 浓度水平对厚朴芽增殖系数有极显著性影响，不同 NAA 浓度水平对其增殖系数有显著性影响，蔗糖浓度对增殖系数无显著性影响。6-BA 浓度、NAA 浓度、蔗糖浓度三者对增殖效果影响的主次关系是：6-BA 浓度gt;NAA 浓度gt;蔗糖浓度。增殖培养的最佳组合为：B5+6-BA5.0mgL-1+NAA0.1mgL-1+蔗糖15gL-1，增殖系数最高达 4.89。 5.在壮苗培养试验中 B5+NAA0.5mgL-1+GA30.3mgL-1 组合最有利于壮苗培养。 6.生根培养试验结果表明： (1)基本培养基、IBA 和 NAA 三者对生根率影响的主次关系为，基本培养基gt;IBAgt;NAA。基本培养基与 IBA 的浓度水平对生根率有极显著性影响，
