sds-page凝胶电泳

1、实验十五、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,一、概述,蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）是蛋白质分析过程中最常用的技术，通常在电泳分离时，其迁移率主要取决于蛋白质本身所带的电荷多少、分子量大小和形态。但如在PAGE中加入阴离子去污剂SDS, SDS将蛋白质的二硫键、氢键及梳水键打开，使蛋白质变性， SDS将包裹在变性蛋白表面，使蛋白质成为刚性分子；同时，由于SDS带有大量负电荷，使蛋白质本身带有的。

2、,过硫酸铵-TEMED（四甲基乙二胺）系统 ：在Acr 和Bis的溶液中放入这个催化系统后，过硫酸铵（NH4）2S2O8产生出游离氧原子使单体成为具有游离基的状态，从而发生聚合作用。聚合的初速度和过硫酸铵浓度的平方根成正比。这种催化系统需要在碱性条件下进行。例如，在pH 8.8条件下7的丙烯酰胺溶液30分钟就能聚合完毕；在 pH 4.3时聚合很慢，要90分钟才能完成。温度与聚合的快慢成正比。通常在室温下就很快聚合，温度升高聚合更快。如将混合后的凝胶溶液放在近0的地方，就能延缓聚合。一般来讲，温度过低，有氧分子或不纯物质存在时都能延缓凝胶。

3、 实验十一 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE ）测定蛋白质分子质量一、目的要求学习和掌握采用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质分子质量的基本原理和方法。二、 实验原理聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺（Acr）和少量交联剂甲叉双丙烯酰胺（Bis ）在催化剂的作用下聚合交联形成的三围网状结构。通过改变单体 Acr 浓度或单体与交联剂的比例可以控制凝胶孔径的大小，这取决于两个重要的参数 T 和 C，其中 T 是两个单体（Acr 和Bis）的总百分浓度，C 是与总浓度有关的交联百分浓度。T=（a+b）/m100(%) C=b/(a+b)100(%)式中，a 为 Acr 质量（g） 。

4、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,SDS-Polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE,一、什么是SDS？,十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate,SDS) 是一种阴离子去污剂。它在水溶液中以单体 （monomer）和分子团（micellae）的混合形 式存在。,SDS的作用,破坏蛋白质分子之间以及其他物质分子之间的非共价键，使蛋白质变性而改变原有的构象，保证蛋白质分子与SDS充分结合而形成带负电荷的蛋白质-SDS复合物。,二、SDS-PAGE的基本原理,（一）蛋白质分子的解聚 样品介质和聚丙烯酰胺中加入离子去污剂和强还原剂后，蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于。

5、第五章 双向凝胶电泳 (2D-PAGE),蛋白质组分析的技术路线 双向凝胶电泳技术的发展及原理 仪器简介 样品制备 技术流程,1. 蛋白质组分析的技术路线,要求 流程 技术路线,蛋白质组分析的首要要求,将来自于全细胞、组织或生物体中所包含的多达几千种混合蛋白质进行分离、检测和分析 。,生物学问题的提出,实验模型的设计,实验组和对照组样品的制备,蛋白样品的IEF和PAGE电泳分离,图像扫描和初步分析,感兴趣蛋白点的切取,胰酶对脱色后蛋白质的消化,质谱的多肽指纹图、微测序分析,质谱结果的生物信息学分析和比对,新蛋白质的发现,其它实验的进一步验。

6、实验五 SDS-PAGE蛋白质电泳准备实验,-溶液的配置,实 验 内 容,一、变性蛋白质电泳系列溶液,1、单体母液 （第一小组） 25 ml丙烯酰胺 7.50 g甲叉双丙烯酰胺 0.20 g去离子水定容至25 ml ,定性中速滤纸过 滤，棕色试剂 瓶4存放。2、 10 (w/v) SDS （第一小组） 10mlSDS 1.0 g去离子水 10 ml,3、分离胶缓冲液（4，pH=8.80，25 ml）（第二小组） Tris-Base(1.5 mol/L) 4.54 g10(w/v)SDS 1 ml用20ml去离子水溶解，再用浓HCl调节pH到8.8，过滤，定容到25ml,4存放。,4、浓缩胶缓冲液（4 ，pH=6.80，50 ml ）（第二小组） Tris-Base(0.50 mol/L) 3.。

7、实验八,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）,领作歇蛆胜殆逞取让吉画卉爷驾托收懂涛椽岔巢同亲耕奖歹海毒穆崔嚣腐SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)及westernSDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)及western,一. 实验目的,1.学习SDS-PAGE测定蛋白质分子量的原理2.掌握垂直板电泳的操作方法 3.熟悉蛋白印迹技术原理和方法,恐晰鞋右夹癌堪焙掷徽胯画酌珠峙碍渍停懈档回情哀章捡烫赊污惠稚冬坯SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)及westernSDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)及western,二. 实验原理,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳:是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS（十二烷基磺。

8、SDS-PAGE 电泳技术 测定蛋白质的分子量,SDS-PAGE凝胶的制备 SDS-PAGE电泳 凝胶染色和脱色 蛋白质分子量的测定,电 泳,电泳是带电跟粒在电场作用下，向着与其电荷相反的电极移动的现象。 这现象在1808年就发现了，但是作为一项生物化学研究的方法学却是在1937年后，随着电泳仪器等装置的改进才有了较大的进展。然而，电泳真正在生物化学和其它领域的研究中得到广泛的应用，还是在用滤纸作支持物的纸电泳问世之后。60年代以来，由于采用了新型的支持物和先进的仪器没备，所以适合于各种目的的电泳便应时而生。,电 泳 的 种 类,1、显微电泳：。

9、实验十 聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离蛋白质【实验目的】1. 了解和掌握聚丙烯酰胺凝胶电泳的技术和原理；2. 掌握用此法分离蛋白质组分的操作方法。【实验原理】在生物化学、分子生物学和基因（遗传）工程实验中，常常要进行蛋白质和核酸的分离工作。聚丙烯酰胺凝胶电泳（Polyacrylamide Gel Electrophoresis, PAGE）是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质进行蛋白质或核酸分离的一种电泳方法。聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺单体（acrylamide，简称 ACR）和交联剂 N，N-甲叉双丙烯酰胺（N,N-methylene bisacrylsmide 简称 BIS）在催化剂的作。

10、Comment a1: 打开二硫键的作用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) 实验原理和操作步骤实验原理：SDS-PAGE是对蛋白质进行量化，比较及特性鉴定的一种经济、快速、而且可重复的方法。该法是依据混合蛋白的分子量不同来进行分离的。SDS是一种去垢剂，可与蛋白质的疏水部分相结合，破坏其折叠结构，并使其广泛存在于一个广泛均一的溶液中。SDS 蛋白质复合物的长度与其分子量成正比。在样品介质和凝胶中加入强还原剂和去污剂后，电荷因素可被忽略。蛋白亚基的迁移率取决于亚基分子量。试剂和器材：试剂：1. 5x样品缓冲液（10ml）:0.6ml 1mol/L的。

11、实验六 SDS-PAGE电泳,武汉生物医学研究院 2013年4月3日,实 验 目 的,学习SDS-PAGE电泳的基本原理掌握垂直板电泳的操作方法运用SDS-PAGE测定蛋白质分子量及染色鉴定,SDS-PAGE电泳的基本原理,电泳:带电颗粒在电场的作用下，向着与其电性相反的电极移动，称为电泳。,SDS-PAGE电泳的基本原理,聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳是以聚丙烯酰胺凝胶为载体的一种区带电 泳。该凝胶由丙烯酰胺（Acr）和交联剂N，N甲叉双丙烯聚酰胺（Bis）聚合 而成。利用电泳和分子筛的双重作用分离物质。在聚丙烯酰胺凝胶电泳中，蛋 白质的迁移率取决于它所带的净电荷的多。

12、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,SDS-Polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE,一、什么是SDS？,十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate,SDS) 是一种阴离子去污剂。它在水溶液中以单体 （monomer）和分子团（micellae）的混合形 式存在。,SDS的作用,破坏蛋白质分子之间以及其他物质分子之间的非共价键，使蛋白质变性而改变原有的构象，保证蛋白质分子与SDS充分结合而形成带负电荷的蛋白质-SDS复合物。,二、SDS-PAGE的基本原理,（一）蛋白质分子的解聚 样品介质和聚丙烯酰胺中加入离子去污剂和强还原剂后，蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于。

13、SDS PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳 主要内容 实验目的实验原理实验材料和试剂实验步骤结果处理 实验目的 了解电泳实验原理掌握电泳实验操作规程用电泳方法测定蛋白分子量 实验原理 最广泛使用的不连续缓冲系统最早是由Ornstein 1964 和。

14、使用 BIO-RAD 电泳仪进行 SDS-PAGE 凝胶电泳的操作规范实验原理根据蛋白分子量亚基的不同而分离蛋白，在样品介质和丙烯酰胺凝胶中加入离子去污剂和强还原剂后，蛋白质亚基的电泳迁移速率主要取决于亚基分子量的大小。实验所用仪器FR-200A 全自动紫外与可见分析装置 上海复日科技有限公司电泳仪 BIO-RAD 公司TS-1 型脱色摇床 江苏海门市其林贝尔仪器制造有限公司实验用试剂低分子量蛋白 Maker TAKARA4*上样缓冲 TAKARAPagn Blue protein staining solution Fermentas试剂的配制1. 贮液的配制（1） 凝胶储液取 30g 丙烯酰胺+0.8g 甲叉双丙烯。

15、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,SDS-Polyacrylamide gel electrophoresis SDS-PAGE食品科学 王玲华,一、什么是SDS,十二烷基硫酸钠 一种阴离子去污剂。它在水溶液中以单体 和分子团的混合形式存在。,SDS的作用,破坏蛋白质分子之间以及其他物质分子之间的非共价键，使蛋白质解聚而改变原有的构象，保证解聚后的蛋白质分子与SDS充分结合而形成带负电荷的蛋白质-SDS复合物。,二、SDS-PAGE的基本原理,（一）蛋白质分子的解聚 样品介质和聚丙烯酰胺中加入阴离子去污剂SDS和强还原剂后，蛋白质分子解聚，与SDS结合形成带负电荷的蛋白质-SDS复合物，蛋白。

16、SDS-PAGE 蛋白质凝胶电泳第一部 知识准备一、 双向凝胶电泳蛋白质组分析的先决条件是蛋白质的分离。分离过程一般可以分为 2 步，首先将蛋白质消化成肽段，通常由蛋白水解酶完成，然后将复杂的混合物分离成简单地形式。这 2 步没有明确的先后关系，也可先将蛋白质混合体分离成单个的蛋白质或肽段，然后消化分析。双向凝胶电泳是采取的先分离后消化的方法，是目前唯一可以在一块凝胶上同时分离数千乃至数万个蛋白质的方法，是当今蛋白质组学方法的主流。刚刚兴起的非胶系统蛋白质组学是先消化然后直接质谱分析，充分应用生物信息学方法，是。

17、SDSPAGE凝胶电泳操作,SDS凝胶电泳,SDS凝胶电泳实验原理,SDSPAGE凝胶电泳,SDS凝胶电泳测定蛋白质,SDS聚丙烯凝胶电泳,SDS蛋白凝胶电泳的原理,sds凝胶电泳图解,破坏二硫键,酶的等电点3。

18、SDS-PAGE 凝胶电泳操作一、常规试剂的配制1. 30% 聚丙烯酰胺贮液：丙烯酰胺 150g，甲叉双丙烯酰胺 4g，双蒸水 500ml，滤纸过滤后，棕色瓶避光 4保存；2. 1.5mol/L，pH 8.8 Tris-HCl 分离胶缓冲液：18.15g Tris，用 1mol/L HCl 定容至 100ml，棕色瓶避光 4保存；3. 1.0mol/L，pH 6.8 Tris-HCl 分离胶缓冲液：12g Tris，用 1mol/L 调 pH 至 100ml，棕色瓶避光 4保存；4. 10% SDS 溶液：10g SDS 加水定容至 100ml，完全溶解室温保存；5. 10% AP 溶液：0.1g AP（过硫酸铵）加水定容至 1ml，用前新鲜配制；6. 1SDS-PAGE 电泳缓冲液：25mM Tris。

19、SDS-PAGE凝胶电泳 姓名：杨文骏 学号： S1309008 SDS-PAGE凝胶电泳简介及应用 SDS-PAGE凝胶电泳的实验步骤 注意事项 主要内容 聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺 (Acr)和交联剂 N,N-甲叉双丙烯酰胺 (Bis)在加速剂和催化剂作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶 。 以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)。 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE) 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶电泳时，它的迁移率取决于它所带净电荷以及分子的大小和形状等因素。 如果在丙烯酰胺凝胶系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠 (SDS)，则蛋白质分子的电泳迁移率主要取。