1、1. 根据样品数量，按 50 体积 BCA 试剂 A 加 1 体积 BCA 试剂 B（50:1）配制适量 BCA 工作液，充分混匀。BCA 工作液室温 24 小时内稳定。2. 完全溶解蛋白标准品，取 10 微升稀释至 100 微升 ，使终浓度为 0.5mg/ml。蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀 释。但是 为了简便起 见，也可以用 0.9%NaCl 或 PBS稀释标准品。3. 将标 准品按 0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20 微升加到 96 孔板的 标准品孔中，加 标准品稀释液补足到 20 微升。4. 加适当体积样品到 96 孔板的样品空中，加标准品稀释液到 20
2、微升。5. 各孔加入 200 微升 BCA 工作液，37放置 30 分钟。注：也可以在室温放置 2 小时，或 60放置 30 分钟。BCA 法测定蛋白浓度时，吸光度会随着时间的延长不断加深。并且 显色反应会因温度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或延长孵育时间。6. 测定 A562，540-595nm 之间的波长也可接受。根据标准曲线计算出蛋白浓度。混匀的问题，可以在参数中选择快速震荡，30s 就可以了做的好的话可以达到 4 个九事先配好各个浓度的 bsa 标准品，step 1A 液和 B 液按 50：1 混合， （比如你要测 2 个样品，可以是 6 个标准曲线点 0，0.05 ，0.1，0.2，0.5 ，1mg/ml ，加上 2 个样品，也就是 8 个孔，做平行就是 16 孔，那么取 A 液取 16*0.2=3.2ml，B 液取 64ul 混合就 ok 了）step2 每孔加 200ul 混合液，然后标准曲线孔加入 25ul 标准品 ，样品稀释到合适的比例，也加入 25ul（如果图省事的话，比如也可以加 1ul 样品，再加 24ul 水补齐，加样的时候可能不会太准）step3 37 度孵育 30minstep4 测 od 565，附近也行
