1、 4 1BCA 蛋白浓度测定试剂盒产品编号 产品名称 包装CHEM001 BCA 蛋白浓度测定试剂盒 102ml包装清单：产品编号 产品名称 包装CHEM001A BCA 试剂 A 100mlCHEM001B BCA 试剂 B 3mlCHEM001C 蛋白标准（2mg/ml） 1.2ml 说明书 1 份产品简介：增强型 BCA 蛋白浓度测定试剂 (Enhanced BCA Protein Assay)是常用蛋白浓度测定方法之一。Viagene 的 BCA 测定试剂测定方法简单，稳定性好，灵敏度高和抗干扰性强。增强型 BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质影响，可以兼容样品中高达 5%
2、的 SDS，5%的 Triton X-100，5%的 Tween 20, 60, 80。能够耐受低浓度的 EDTA、EGTA、二硫苏糖醇，但高浓度螯合剂和还原剂可能会对测定有影响。增强型 BCA 蛋白浓度测定试剂适合用于测定 Western Blotting 样品，EMSA 核提取液的蛋白浓度。检测灵敏度达到 10g/ml。按照本说明书操作，每套试剂可进行 145 次比色杯法测定或 500 次微板法测定。比色杯法测定的 BCA 工作液用量较微板法多，但抗干扰性强，结果更准确。使用说明：A. 比色杯法测定1、 根据待测定样品数算出所需 BCA 工作液总体积（每个测定需 0.7ml 工作液） ，按
3、 50 体积 BCA 试剂 A 加 1 体积 BCA 试剂 B（50：1）配制适量 BCA 工作液，充分混匀。BCA 工作液在室温可稳定 24 小时。2、 试管编号，按以下操作。管 号 S0 S1 S2 S5 S10 S20 S40 样品 xH2O （l） 20 19.5 19 17.5 15 10 0 20样品制备液（l）4 4 4 4 4 4 4 蛋白标准液（l）0 0.5 1 2.5 5 10 20 样品体积 4反应体积 24 24 24 24 24 24 24 24BCA 工作液（ml）0.7 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7蛋白浓度（g/l）0 1 2 5 10
4、 20 40 待定注：1）标准曲线一般做 4 个点加一个空白。实际使用中，可以根据待测样品的估计蛋白浓度选取上表标准蛋白管 S0-S40 的任意 4 个点加一个空白。2）为了排除干扰，反应中需要加与样品用量等体积的样品制备液。3）如果样品用量变化，表中所加的样品制备液需做相应调整。3、 56放置 30 分钟。 （注：也可以室温放置 2 小时，或 37放置 60 分钟。BCA 法测定蛋白浓度时，吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或延长孵育时间） 。4、 用分光光度计，在 562nm 测定光密度读数（540-595nm 之间的波长也可
5、使用） 。根据标准曲线计算出蛋白浓度。B. 微孔板法测定。1、 根据待测定样品数算出所需 BCA 工作液总体积（每个样品需 0.2ml 工作液）按 50 体积BCA 试剂 A 加 1 体积 BCA 试剂 B（50：1）配制适量 BCA 工作液，充分混匀。BCA 工4 1作液在室温可稳定 24 小时。2、 参照上表中的蛋白标准液用量，加 0、0.5、1、2.5、5、10、20ul 蛋白标准液到 96 孔板的标准品孔中。加 dH2O 补足体积至 20ul。加与样品用量相同体积的样品制备液到标准孔中。3、 加适当体积样品到 96 孔板的样品孔中。加 dH2O 使反应体积与蛋白标准孔的体积相同。4、
6、各孔加入 200ul BCA 工作液， 56放置 30 分钟 （注：也可以室温放置 2 小时，或 37放置 60 分钟。BCA 法测定蛋白浓度时，吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或延长孵育时间） 。5、 用酶标仪在 562nm 测定光密度读数（540-595nm 之间的波长也可使用） 。根据标准曲线计算出蛋白浓度。保存条件：A 液与 B 液放室温保存。蛋白标准液须在 -20冻存。本试剂盒自订购之日起一年内有效。注意事项：比色杯法需要使用普通的分光光度计。微板法测定需使用 96 孔板与酶标仪。测定波长为 540-595nm 之间，
7、562nm 最佳。 为了加快 BCA 法测定蛋白浓度的速度可以适当用微波炉加热。加热条件需要实验确定。 为了安全，请穿实验服并戴一次性手套操作。常见问题：1、 是否每次测定时都需要制作标准曲线？建议每次测定时都做标准曲线。因为 BCA 法测定时颜色会随着时间的延长不断加深，并且显色反就的速度和温度有关，所以除非精确控制显色的时间和温度，否则每次都要做标准曲线。2、 测定标准曲线时发现随着标准品浓度的增加吸光度或颜色没有明显变化。可能的原因是样品制备液中含有严重干扰 BCA 法测定蛋白浓度的物质。有这种情况时，需要换样品制备液或改用不同的蛋白测定试剂。产品使用文献： Genya Hrang,Ch
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