1、2006年第卷第5期9 收稿日期 2006- 03- 12 作者简介 张慧丽 , 讲师 , 从事生物制药的研究 。摘要 : 目的 : 确定桦褐孔菌保健酸奶的最佳工艺及其免疫作用 。 方法 : 采用正交法和 E- 花环实验确定酸奶发酵的最佳工艺和功能 。 结果 、 最佳条件为 : 接种量为 2% 、 含糖量为 8% 、 发酵时间为 8h 、 发酵温度为 40 。 结论 : 桦褐孔菌保健酸奶能提高 T- cell 的免疫能力 。关键词 : 桦褐孔菌 ; 酸奶 ; E- 花环形成率中图分类号 : TS275.4文献标识码 : A桦褐孔菌酸奶的工艺及药用功能的研究张慧丽1, 靳宝峰2, 李 辉1, 刘
2、宏生1( 1 辽宁大学生命科学系 , 辽宁沈阳 110036 ;2 沈阳军区药品检验所 , 辽宁沈阳 110026 )桦褐孔菌 Inonotus obliquus ( Fr. ) Pilat 为多孔菌科 ( Polyporaceae ) 褐卧孔菌属 ( Poria hypo-brunnea Petch ) 药用真菌 , 主要分布于俄罗斯北部 、 北欧 、 中国黑龙江 、 吉林长白山 、 日本北海道等北纬 40 50 地区 , 民间广泛用于防治消化道疾病和肿瘤 ( 胃癌 、 肠癌及肝癌等 ) 、 心血管疾病和糖尿病等1, 其菌核是俄罗斯的一种民间药用真菌 , 桦褐孔菌具有明显的抗癌作用1。 桦褐
3、孔菌菌核 含 有 的 特 效 成 份 p.D 甘 露 糖 、 抗 氧 化 物 质“ SOD ” 明显高于其他菇类 , 三萜类化学成分已经分离出单体并鉴定了其化学结构 。 从桦褐孔菌中寻求新的抗肿瘤和 HIV 的药用物质2, 以及研究桦褐孔菌的药理作用 、 临床药用价值具有深远的意义 。酸奶中添加桦褐孔菌不但含丰富的蛋白质 、 维生素和微量元素 , 而且还具有调整胃肠功能 、 抗菌 、 降血脂 、 抗癌等保健及药用功能24。 本实验旨在通过研究在酸奶中添加桦褐孔菌水提物体的最佳工艺和对豚鼠灌喂后免疫功能的变化 , 来验证凝固型桦褐孔菌酸奶是极具营养价值的保健饮料 。1 材料及方法1.1 材料及仪
4、器乳酸菌菌种 ( 优化分离提纯 )5、 鲜乳 、 桦褐孔菌 、 白砂糖 ( 市售 ) 、 E- 花环实验用品 、 恒温箱 、 冰箱 、 KDN- 08A 定氮仪 ( 上海新嘉电子有限公司 ) 。1.2 菌种的分离用 MRS 乳酸菌选择性培养基培养从凝固型酸牛奶中 , 经革兰氏染色 、 葡萄糖产酸 、 接触酶和石蕊牛奶试验分离鉴定出乳酸菌 。 以正交法优化厌氧培养 , 采用 L9( 34) 正交试验得出最佳葡萄糖 、 蔗糖和维生素 B2组合的改良 MRS 配方 ( 葡萄糖 8% 、蔗糖 1.5% 、 维生素 B20.005% ) , 同时 , 筛选出优良菌种5。1.3 桦褐孔菌的水提物的制备为得
5、到桦褐孔菌多糖提取的最佳条件 , 超声60min 、 20kHz 、 95 、 15 倍水 , 每份称取 8g 超声提取两次 , 2000rpm 离心 15min , 合并上清液 , 加热浓缩 。 在搅拌下向浓缩液中加入 95% 乙醇 , 使乙醇含量达 80% , 静置过夜 , 次日收集沉淀 , 用乙醇洗涤三次 , 低温干燥 , 即得桦褐孔菌粗多糖6。1.4 发酵条件的考察按 L9( 34) 正交试验因素设计发酵实验 , 因素为 :A 接种量 ( % ) 、 B 加糖量 ( g ) 、 C 发酵时间 ( h ) 和桦褐孔菌水提物 ( mg/ml ) 如表 1 , 流程如下 :合格的鲜牛乳脱脂
6、、 预热 、 均质 、 过滤净化标准化6%10% 加糖混料85 90 水浴 10 15min杀菌 冷却43 45 接种3%5% 母发酵剂发 酵40 , 4 6h冷 藏 后 熟冷却至 10 冷藏 0 4 , 12 24h检 验理化指标 、 微生物指标检验成品试验报告与理论研究 Experimental Reports yoghurt ; rate of receptor rosetteisoflavone puerarinantioxidant properties and effects on rat liver CYP-catalysed drug metabolismJ. Life Sci
7、ences , 2000 , 67 ( 24 ) : 2997.8 王 坚 , 陈 敏 , 曹 宜 , 等 . 葛根素 、 银杏黄酮对蛋白质非酶糖化的影响 J. 中医药理与临床 , 2000 , 16 ( 1 ) : 13.9 朱庆磊 , 何爱霞 , 吕欣然 . 葛根素对氧自由基的清除和抗氧化性损伤作用 J. 解放军药学学报 , 2001 , 17 ( 1 ) : 1.10 王 娟 , 沈 平 , 沈永嘉 . 葛根中有效成分的微波辅助萃取研究 J.中国医药工业杂志 , 2002 , 33 ( 8 ) : 382.Determination of puerarin in beverages by
8、 HPLCZHANG Han- jun , WU Bo(Hubei Key Lab for Processing and Transformation of Agricultural Products , Wuhan Polytechnic University , Wuhan 430023 ,Hubei , China)Abstract: The method of determining puerarin in beverages by HPLC was established. The samples were separated on a C18col-umn (4.0 mm 250.
9、0 mm , 5 m) with a mobile phase of methanol- 0.2% H3PO4solution (30 70 v/v). The flow rate was 0.6ml/min, the wavelength was 254 nm , and the column temperature 40 . The calibration curve was linear in the range of 40 g/ml200 g/ml puerarin (r = 0.9983) . The recoveries were 101.9% , 98.4% and 90.6% , RSD 2% (n = 5). Being simple, accurateand rapid , the method is suitable for determination of puerarin in beverages.Key words: beverage ; puerarin ; HPLC!Detection & Analysis检 测 与 分 析3 4
