细胞培养资料

1、常用设备一.准备室的设备：单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品规（放置消毒过的物品）、包装台。配液室的设备：扭力天平和电子天平（称量药品）、PH 计（测量培养用液 PH 值）、磁力搅拌器（配置溶液时搅拌溶液）。二.培养室的设备：液氮罐、储品柜（存放杂物）、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱（-80）、空调、二氧化碳缸瓶、边台（书写实验记录）。必须放在无菌间的设备：离心机（收集细胞）、超净工作台、倒置显微镜、CO2 孵箱（孵育培养物）、水浴锅、三氧消毒杀菌机、4。

2、1856年，实现红豆杉细胞培养生产紫杉醇的突破。1885年，Roux温生理盐水培育鸡胚组织；1887年，培养皿（英文：Petri dish）由在德国生物学家罗伯特 科赫手下工作的细菌学家朱利斯理查德 佩特里（Julius Richard Petri，18521921）于1887年 设计，故也称 为“佩特里皿” 。是一种用于 细胞培养的实验室器皿，由一个平面圆盘状的底和一个盖组成，一般用玻璃或塑料制成。1902年，植物细胞培养是在植物组织培养技术基础上发展起来的。 1902年 Haberlandt确定了植物的 单个细胞内存在其生命体的全部能力( 全能性)，使成为植物组织培养的开端。 。

3、培养基的配置：基础培养基 500ml+胎牛血清 50ml+双抗 5ml冻存液的配置：DMSO18ml+胎牛血清 2ml。依次比例酌量配置。超净工作台常规配置移液器 1 套（2.5l、20l、200l、1ml） ，酒精灯 1 盏，液器 1 台，斜架 1 台，酒精喷壶 1 个，酒精棉球缸 1 个，污缸 1 个，常规耗材：培养瓶（50 2） ，定量移液管（5ml、10ml） ，枪头（1ml、200l 、10l ） ，培养皿， 6/24/48/96 孔板，医用脱脂棉球，保种管所需试剂：gibco 高糖培养基，胎牛血清，双抗，DMSO，胰酶，苯扎溴氨，75%酒精实验前准备：所需的各项高压后的耗材放于超净工作台内，用酒精。

4、成骨诱导液：地塞米松，-磷酸甘油，维生素 C， OB或 3T3-E1：-MEM+10%FBS+50ug/ml ascorbic acid+10mM -glycerophosphatePG(磷酸甘油)和 Vc配好放四度，Vc尽量分装保存，减少与空气接触，三种分开配，不能配一起，培养液也是现用现配成骨细胞分离培养：无菌条件下取出新生鼠的颅盖骨，置入冷 PBS中，剔除附着的结缔组织。用 PBS液清洗 3次，将其置入盛有 DMEM培养基的培养皿中，剪成 0.5 mm0.5 mm大小碎块，约 30块，加入 0.25%胰蛋白酶 5 mL，置入孵箱中消化 20 min，血清终止消化，弃上清液，加入 1.0 g/L 型胶原酶 10 mL，置于孵箱中消。

5、A549 细胞的培养A549 细胞为人肺腺癌细胞，属于传代细胞系，可稳定地传代培养。一般用胰酶消化后，加入生长液稀释，以 1：21：3 传代培养都是可行的。一、 所需溶液1， 细胞冲洗液：磷酸盐缓冲液(PBS)无 Ca、MgNACL 8.00g；KCL 0.20g;KH2PO4 0.20g;Na2HPO4 .。 12H2O 1.15g加水至 1 000mL,将 PH 调至 7.4，高压灭菌。2， 消化液（1） 胰酶-PBS结晶胰酶 2.5g;高压灭菌后的 PBS 1000ml用磁力搅拌器搅拌均匀，使其完全溶解，通过 0.22m 的滤膜过滤除菌，分装备用，放置20保存。（2） 胰酶EDTA:结晶胰酶 0.5g;EDTA 盐溶液 0.2g无 Ca、Mg PBS 1。

6、一、细胞培养基础和步骤细胞培养基大全：http:/www.biomart.cn/experiment/430/488/490/491/140812.htm细胞原代培养步骤：http:/www.biomart.cn/experiment/451.htm细胞传代培养步骤：http:/www.biomart.cn/experiment/505.htm更多细胞培养实验：http:/www.biomart.cn/experiment/allExperiment.htm二、细胞培养常见问答1、加到培养基中的血清 必须灭活吗？答：不是必须的，看做什么实验了。2、四季青胎牛血清灭活是 56 30 分钟吗？答：如果用于培养大多数的肿瘤细胞，血清一般是不需要灭活的，这样可以有效保存血清中的生长因子 。但是如。

7、动物细胞培养综述 摘要：动物细胞培养是指在体外培养动物细胞的技术，即在无菌条件下，从机体中取出组织或细胞，或利用已经建立的动物细胞系，模拟机体内的正常生理状态下生存的基本条件，让细胞在培养容器中生存、生长和繁殖的方法。 动物细胞培养开始于本世纪初，到 1962 年规模开始扩大，发展至今已成为生物、医学研究和应用中广泛采用的技术方法，利用动物细胞培养生产具有重要医用价值的酶、生长因子、疫苗和单抗等，已成为医药生物高技术产业的重要部分。由于动物细胞体外培养的生物学特性、相关产品结构的复杂性和质量以及一致性的。

8、细胞培养基本方法(一)准备和安装过滤器 (二)合成培养基的配制 (三)小牛血清的处理 (四)生长培养基的配制(五)冻存细胞的复苏 (六)传代 (七)冻存 (八)注意事项 (一)准备和安装过滤器 清洗好过滤器，干燥，放入一张孔径 0.22m 的微孔滤膜，用布包装好，15 磅 20 min 进行高压灭菌处理。 在超净台内打开过滤器架好，胶管一端接入滤泵再插入待除菌的液体中，出口端胶管深入到已消毒好的瓶子中。用泵过滤，过滤后要检查滤膜是否完好无损。 (二)合成培养基的配制1、根据细胞目录中的说明，按下表选择合适品牌及货号的培养基干粉，用适量超纯水充。

9、巨噬细胞培养巨噬细胞属免疫细胞，有多种功能，是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象。巨噬细胞容易获得，便于培养，并可进行纯化。巨噬细胞属不繁殖细胞群，在条件适宜下可生活 23 周，多用做原代培养，难以长期生存。巨噬细胞也建有无限细胞系，大多来自小鼠，如 P331、S774A.1、RAW309Cr.l等，均获恶性，培养中呈巨噬细胞形态和吞噬功能，易于传代和瓶壁分离，但难以建株。 培养巨噬细胞可用各样方法和各种来源来获取细胞，以小鼠腹腔取材法最为实用，其法如下： 1实验前三天，向每只小鼠腹腔内注入无菌硫羟乙酸肉汤 1ml（。

10、细胞体外培养实验流程 一、 细胞复苏 1. 准备：紫外照台30min，准备好高压灭菌好的吸管、移液管、离心管、废液缸、培养瓶、培养基（含FBS），水浴箱开启到37，75%乙醇清洗双手，培养基用前37温育20min，酒精擦拭后放入无菌操作台，点燃酒精灯。 2. 灼烧离心管管口、塞子和滴管，用滴管取5mL培养基加入离心管中。 3. 戴好防护用具，从液氮中取出冻存管后立即放入37水浴箱中，轻轻摇晃。

11、1细胞培养1.1 培养基的配置： 将一袋培养基全部倒入一容器中，用少量注射用水将袋内残留培养基洗下，并入容器。加注射用水（水温 2030）到 950 毫升，轻微搅拌溶解。 加入 2.438 克碳酸氢钠。 轻微搅拌溶解，加注射用水至 1 升。 用 1mol / L 氢氧化钠溶液或 1mol / L 盐酸溶液调 pH 至 6.8-6.9。 用 0.2m 滤膜正压过滤除菌。 溶液应在 28 下避光保存。 1.2 胎牛血清的处理：没有灭活的血清中含有补体成分，需要将血清在 60条件下灭活 30 min。在水浴锅内进行，灭活的过程中，要不停的摇晃，是受热均匀，防止沉淀析出来。灭活后的胎牛血清。

12、细胞培养技术（一） 一. 细胞培养的基本原理 二. 细胞培养的基本设备与用品 三. 细胞培养用品的清洗与消毒灭菌 清 洗 1. 常用玻璃器皿清洗 2. 橡胶制品的清洗 3. G6 除菌滤器的清洗 4. 正压除菌滤器的清洗 5. 塑料制品的清洗 6. 清洗液的配制 消毒灭菌 1. 湿热消毒 2. 干热消毒 3. 紫外线消毒 4. 滤过消毒 5. 消毒剂 6. 塑料器皿消毒 7. 电离辐射消毒 四. 细胞培养用液的配制与除菌 1. 蒸馏水的制备 2. 平衡盐溶液(balanced salt solution，BSS)的配制 3. 天然培养基 4. 合成培养基 5. 血清细胞培养基 6. 无血清细胞培养基 7. 消化液 8. p。

13、细胞培养前需要准备的物品提前开启 37水浴锅和超净台的紫外灯；灭菌吸头、1.5mL 的离心管、空玻璃瓶；无菌的 15mL、50mL 离心管；无菌的 10cm 培养皿、16 孔板、32 孔板、96 孔板、培养瓶等。5mL、10mL 的移液管；橡胶手套、普通移液器、电子移液器、装有 99.9%-100%CO2钢瓶70%酒精、 DMEM 培养基（37提前温浴） 、FBS 血清、二抗生素（10,000Unit/mL penicillin 和 10,000ug/mL Streptomycin 混合液） 、0.05% typsin-EDTA（上述培养细胞所用试剂都用 GIBCO 的产品，国产的产品没有办法保证质量）细胞培养步骤1. 取一瓶液体 DMEM 培养液。

14、细胞培养 （普通混合培养）一、 常规必备：1. 溶液1) PDL: Sigma, Cat. No.: P-0899 避光用超纯水配制好后过滤，200ul 或 400ul/tube 分装, -20 度储存。 母液浓度为5mg/ml，工作液浓度为 0.1mg/ml(或 PLL：Sigma, Cat. No.: P-9404)2) HBSS: 1LNaCl 8.4gKCl 0.224gHEPES 2.38g青霉素钠 50 万单位硫酸卡那霉素 50 万单位用 1M NaOH 将 PH 值调至 7.1-7.2 左右,再用超纯水将渗透压调至 29010，过滤，-4 度储存。3）Trypsin Solution0.125% Trypsin (Gibco BRL (1:250), Cat. No.: 27250-042)0.02% EDTA先用尽可能少量 HBSS 溶解 EDTA（用 1。

15、原代仪器、材料及试剂 仪器：培养箱（调整至 37） ，培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸 管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱（37）镊子 材料：动物组织块 试剂：1640 培养基（含 20%小牛血清） ，0.25%胰酶，Hanks 液，碘酒 PBS 传代培养材料和试剂 1. 细胞：贴壁细胞株 2. 试剂：0.25胰酶、1640 培养基（含 10小牛血清） 3. 仪器和器材：倒置显微镜，培养箱、培养瓶、吸管（ 2ml 3 只以上、5ml 3 只以上） 、废液缸、酒精灯、酒精、纸、封口膜、枪及枪头、标记笔等准备事项：1. 紫外灯照射细胞室 30 分钟,风机。

16、1. 器材与试剂：干粉型培养基、胰蛋白酶，青霉素、链霉素.纯净水系统、电子天平、PH 计、磁力搅拌器。具体步骤：1.1 水的制备：细胞培养用水必须非常纯净，不含有离子和其他的杂质。需要用新鲜的双蒸水、三蒸水或纯净水.1.2 PBS 的制备与消毒(也可用于其它 BSS，如：Hanks，D-Hanks 液的配制)：1.2.1 溶解定容：将药品（NaCl8.0g，KCl0.2g，Na2HPO4H2O1.56g，KH2PO40.2g ）倒入盛有双蒸水的烧杯中，玻璃棒搅动，充分溶解，然后把溶液倒入容量瓶中准确定容至 1000ml，摇匀即成新配制的 PBS溶液。1.2.2 移入溶液瓶内待消毒：将 PBS 倒入溶液。

17、细胞培养使用胶原包被细胞培养皿细胞培养使用胶原包被细胞培养皿2011年11月23 日使用胶原包被细胞培养皿 胶原是支持细胞和组织生长的重要胞外基质蛋白，其形成的胞外环境有利于多种细胞的粘附、生长、迁移和分化。I型胶原可促进正常细胞和转染细胞的贴壁和增殖。胶原主要包括I型胶原，型胶原，型胶原，型胶原，型胶原，型胶原几种。 1、I型胶原最常见的胶原蛋白，促进细胞的贴壁和增殖，用于内皮细胞，肝细胞，肌细胞等的培养。 I型胶原是组织和器官中最常见的胶原蛋白，在皮肤、肌腱和骨骼中含量丰富。I型胶原能促进细胞的贴壁和增殖，特。

18、MDCK 细胞培养MEM 细胞生长液配制500ml MEM 液+5ml 双抗（青霉素+链霉素）+5ml L-谷氨酰胺+7.5ml 碳酸氢钠+50ml 小牛血清90%MEM 液 1%双抗 1% L-谷氨酰胺 1.5%碳酸氢钠 10%小牛血清0.25%EDTA 胰酶（从冰箱取出后放入培养箱中待用） （1）细胞传代将细胞瓶中的生长液倒去，加入 MEM 液（大概 6ml 左右）清洗，倒去;加入 EDTA-胰酶（根据细胞消化情况而加量） ，倒去;再加入 EDTA-胰酶，放置培养箱，进行消化（大概 10 分钟左右） ，待其细胞开始脱落后（在细胞瓶中呈毛玻璃）;吸干 EDTA-胰酶倒去，放置培养箱一段时间（细胞呈逐个完整） ，。

19、第一章 细胞培养的基本原理与技术 现代生物技术一般认为包括基因工程技术、细胞工程技术、酶工程技术和发酵工程技术，而这些技术的发展几乎都与细胞培养有密切关系，特别是在医药领域的发展，细胞培养更具有特殊的作用和价值。比如基因工程药物或疫苗在研究生产过程中很多是通过细胞培养来实现的。基因工程乙肝疫苗很多是以 CHO 细胞作为载体；细胞工程中更是离不细胞培养，杂交瘤单克隆抗体，完全是通过细胞培养来实现的，既使是现在飞速发展的基因工程抗体也离不开细胞培养。正在倍受重视的基因治疗、体细胞治疗也要经过细胞培养过程才。