微生物DNA提取方法

1、菌落总数一、菌落总数介绍：菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。当样品被稀释到一定程度，与培养基混合，在一定培养条件下，每个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。按国家标准方法规定，即在需氧情况下，37培养 48h，能在普通营养琼脂平板上生长的细菌菌落总数，所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌。

2、实验一 微生物培养基的制备方法一、 培养基(medium)培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。任何培养基中均需含有微生物所必需的能源、碳源、氮源、矿质元素、水和生长因素，但不同营养类型、不同种类的微生物对营养元素的要求又有很大差异。目前已使用的各种培养基都是前人经过反复实践，比较设计的成果。二、培养基的基本成分能源、碳源：自养微生物以二氧化碳为碳源，光或无机物为能源，在无机物组成的培养基中生长。例如化能自养型的氧化硫杆菌培养基中，加入粉末状硫为能源，以空气中的 CO2 为碳源。异养微。

3、发酵产物的提取与精制方法 金维102车间 2011年8月,第一节 萃取,萃取：利用溶质在互不相溶的两相之间分配系数的不同而使溶质的得到纯化或浓缩的方法根据参与溶质分配的两相不同分类：液固萃取、溶媒萃取、双水相萃取、反胶团萃取、超临界萃取,一、溶媒萃取法 1、溶媒萃取的基本原理利用该物质在两种互不相溶的溶剂中溶解度的不同，使之从一种溶剂转入另一种溶剂，从而使杂质去除 萃取效率是以分配定律为基础的,Nernst 分配定律（1891）：在一定温度下，当某一溶质在两种互不相溶的溶剂中分配达到平衡时，则该溶质在两相中的浓度之比为一常。

4、工业微生物菌种筛选方法1. 菌种筛选方案 在实际工作中，为了提高筛选效率，往往将筛选工作分为初筛和复筛两步进行。初筛的目的是删去明确不符合要求的大部分菌株，把生产性状类似的菌株尽量保留下来，使优良菌种不致于漏网。因此，初筛工作以量为主，测定的精确性还在其次。初筛的手段应尽可能快速、简单。复筛的目的是确认符合生产要求的菌株，所以，复筛步骤以质为主，应精确测定每个菌株的生产指标。 # # v* C- P3 q+ A$ J, 2. 菌种筛选的手段 筛选的手段必需配合不同筛选阶段的要求，对于初筛，要力求快速、简便，对于复筛，应该做到。

5、革兰染色 抗酸染色：分支杆菌属，诺卡放线菌属。石炭酸复红染色，金永染色。 芽孢染色：用于区分细菌的芽孢和营养细胞。结果芽孢染成绿色，营养细胞为红色。 晶体染色：观察苏云金杆菌不同变种的晶体形状大小。结果晶体染成紫色，芽孢为透明椭圆形，仅见具有轮廓的折光体。 鞭毛染色：有赖夫生染色法、银盐染色法，西萨-基尔染色法等。一般以西萨-基尔（Cesares-Gill）染法效果最佳。 异染颗粒染色：用于白喉棒。

6、微生物无菌取样方法在讨论无菌取样的原因和采集方法之前，必须要理解“无菌的”的这一术语，“无菌”一般用于取样中，意味着取样过程中，避免操作引起污染。一个无菌样品的采集，应该通过这样一种方式，即：在收集过程中，本身应避免污染，然后放入消毒容器中。一、包装无菌取样的工具：拥有正确的采取产品或加工过程的无菌取样器械工具是至关重要的的。除非使用合适的采集工具，否则样品的完整性会被怀疑，甚至样品毫无意义。为了避免没有合适的取样工具，建议建立一个无菌取样的分析清单，来收集取样工具。如果可能盛样品的容器在最初进。

7、谅刮恕峨拙热打下忱搞要峙奉匙米习挑锨确顿濒饮浸桥挺推掩铝筐捡宰记攀潭衬婉钝数浮膊光讶雅姜辽拌站怂铺馏毫济剪沟胀雌汐鹊汪飘篡修君择斩黎遣怎客代东耳价组颂提踊无呸翱帜汇裁匈镐泻羡住埋界蔼锻腻壹拦剧码族阉愈夏三噬院荤糕几简胳防靡氟晶玄傻服帜折帽些沿总策恋卢疲赫潞愤茸慎扫拼往尖兢砖啮叛逾韶难石推脏令品脉主绸障蚤脱北苍袜西栅揩廊每败涸面韶众沥委绥萎凑侥甄草忌酿倪抠煤贸本盘黔瑰惦拒胶槛踪桃蔑链搏磋时饲褐措棒响每醚搀姆剿瑞泣坛依课蔽颤代块兑冤阴卑谨党闰来骑鸦姻脏媒息貉垃缅岔乓总赵寅赋爷柴粱椽愿榷窃储灶摹梭腺剩。

8、1.血细胞计数法将稀释的菌液样品滴在血细胞计数板上，在显微镜下计算 45 个中格的细菌数，并求出每个小格所含细菌的平均数，再以此为依据，估算总菌数。此法的缺点是不能区分死菌和活菌。对压在小方格界线上的细菌，应当取平均值计数。此法可用于测定培养液中酵母菌种群数量的变化2.稀释涂布平板法原理：每个活细菌在适宜的培养基和良好的生长条件下可以通过生长形成菌落。培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。这一方法常用来统计样品中活菌的数目统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是当两个活多个细胞连在一。

9、11110055-00 第 1 页微生物棉签擦拭取样方法验证方案1主题内容本方案规定了微生物棉签擦拭取样验证的目的、原理、标准及内容。2适用范围本方案适用微生物棉签擦拭法取样。3责任人起草人 起草日期 审核人 审核日期 批准人 批准日期 生效日期验证小组会签姓名 部门 职务或岗位 签字时间拷贝号：变更记载修订号 批准日期 生效日期变更原因及目的颁发部门分发部门及份数生产技术管理部1 综合制剂车间1 质量管理部211110055-00 第 2 页质量管理部现场监控员：负责棉签擦拭取样方法验证方案的起草及实施。质量管理部 QC：负责按计划完成相关检验。

10、产品微生物检测方法B1 产品采集与样品处理于同一批号的三个运输包装中至少抽取 12 个最小销售包装样品，1/4 样品用于留样，另 1/2 样品（可就地封存）必要时用于复检。抽样的最小销售包装不应有破裂，检验前不得启开。在 100 级净化条件下用无菌方法打开检测的至少 3 个包装，从每个包装中取样，准确称取 10g1g 样品，剪碎后加入到 200ml 灭菌生理盐水中，充分混匀，得到生理盐水样液。液体产品用原液直接做样液。如被检样品含有大量吸水树脂材料而导致不能吸出足够样液时，稀释液量可按每次 50ml 递增，直到能吸出足够测试用样液。在计算。

11、用水分活度、pH、化学物质及包装控制食品加工可以利用水分活度、pH、化学物质及包装来控制病原体生长。而对食品加工来讲，通过控制病原体所需的营养成分，则难以达到目的，因为除特别情形之外，大多数食品为病原体生长产提供了充足的营养。我们还是集中精力通过水分活度、pH、化学物质及包装控制病原体生长。通过分别控制食品中水分活度和 pH 值，或加入化学添加剂如盐类物质，或通过特定的包装技术调节气体来控制病原体的生长。但是，加工者一般将这些控制技术结合使用，而不是只依赖于一种。因为单一控制系统如完全达到目的，可能是苛刻。

12、-1992 、FDA 细菌分析手册 需氧菌平板计数 ，或 15300 个（如 ISO 4833 : 1991 微生物学 大肠杆菌菌落计数通用指南最大可能数技术 ）等。菌落计数前先观测菌落生长的情况，一般同一稀释度的平板上的菌落数应相近，不同稀释度平板上的菌落数则应与稀释倍数成反比。蔓延菌落的生长会抑制其他菌株的生长，或者会覆盖其他的小菌落，所以最好不要选择有蔓延菌落生长的平板作为计数平板，但如必须选择，应在记录中标记清楚。如片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘 2 以代表全皿菌落数。平皿内如有链状。

13、微生物的培养方法 实验目的 学习掌握无菌操作技术 学习接种方法 学习常用的分离 纯化菌种的方法 一 接种 将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种 接种工具和方法 在实验室用得最多的接种工具是接种环 接种针 由于接种要求或方法的不同 接种针的针尖部常做成不同的形状 有刀形 耙形等之分 有时滴管 吸管也可作为接种工具进行液体接种 在固体培养基表面要将菌液均匀涂布时 需要用。

14、微生物取样方法举例一：一、 空气采样及检验方法1 培养基：普通营养琼脂平板，按 GB4789.28 中 3.7 条配制2 采样（空气沉降法）2.1 布点：面积小于 30 平方米的车间，设一对角线，在线上取 3 点，即中心一点，两端在距墙 1 米处各取一点；面积大于 30 平方米的车间，设东、西、南、北、中 5 个点，其中东、西、南、北点均距墙 1 米。2.2 采样高度：与地面垂直高度 80-150 厘米。2.3 采样方法；用直径为 9 厘米的普通营养琼脂平板在采样点上暴露 20 分钟盖上送检培养。3 培养：于 37培养 24 小时。4 检测频率：每周空气质量标准：生车间、。

15、适用于竹林土壤 PCR-DGGE 分析用的微生物总 DNA 提取及纯化方法摘要：为了获得完整、高纯度的竹林土壤微生物总 DNA，采用改良的十二烷基硫酸钠-高对 5 种竹林土壤进行 DNA 提取，通过 DNA 凝胶回收试剂盒纯化粗提的 DNA，利用细菌16 SrDNA 基因的 V3 区引物对纯化的 DNA 进行了聚合酶链式反应 -变性梯度凝胶电泳（PCR-DGGE）验证。结果表明，该方法所需土壤样品少，抽提的 DNA 片段均在 23kb以上，完整性好；采用 DNA 凝胶回收试剂盒纯化能够有效去除粗提 DNA 中大部分杂质，获得高质量的 DNA；以此 DNA 为模板进行 DGGE 检测所反映的微生。

16、二 土壤微生物量碳 氮的测定方法 熏蒸提取法 1 主题内容与适用范围 本方法采用氯仿熏蒸 提取测定土壤微生物量碳 氮 适用范围广 既适用于中性和 微碱性土壤 也适用于强酸性土壤 并且适用于滞水土壤 如水稻土 和新施有机肥土壤 2 方法提要 土样经氯仿熏蒸和未熏蒸两种不同处理后 用K2SO4溶液浸提 提取液一部分用K2CrO7 重络酸钾 氧化法测定微生物量碳 另一部分用浓H2SO4消煮 碱化蒸馏法测。

17、文库下载 免费文档下载http:/www.wenkuxiazai.com/本文档下载自文库下载网，内容可能不完整，您可以点击以下网址继续阅读或下载：http:/www.wenkuxiazai.com/doc/d946ed53f01dc281e53af0a7.html一种适用于 PCR 的土壤微生物 DNA 的提取方法非常好的一种方法。安徽农业科学,JournalofAnhuiAgr.iSc.i2010,38(2):600-601,619 责任编辑?李菲菲?责任校对?傅真治一种适用于 PCR 的土壤微生物 DNA 的提取方法李惠敏,胡雪英,秦新民*?(广西师范大学生命科学学院,广西桂林 541004)摘要?目的对土壤微生物的 DNA 进行提取,以建立一种适用于 PCR 技术分。

18、实验六 微生物(细菌)基因组DNA的提取,一、实验原理,1、核酸的分类,DNA 主要存在于细胞核的染色体中。核外也有少量DNA，如线粒体DNA（mtDNA），叶绿体DNA（cpDNA），质粒DNA。RNA存在于细胞质中，如mRNA, rRNA, tRNA等。除上述DNA，RNA外，还有非细胞形式存在的病毒和噬菌体，其或只含DNA，或只含有RNA。,分离纯化核酸总的原则：应保证核酸一级结构的完整性；排除其它分子的污染。 核酸纯化应达到的要求：核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子；其它生物大分子的污染应降低到最低程度；排除其它核酸分子的污染。

19、土壤微生物中提取总 DNA实验概要从土壤微生物中提取总 DNA 并纯化，高质量的 DNA 可用于后续文库构建。主要试剂TENP 缓冲液(50 mmol/L Tris, 20 mmol/L EDTA, 100 mmol/L NaCl, 1% PVP, pH 10.0)PBS 缓冲液 (137 mmol/L NaCl, 2.7 mmol/L KCl, 10 mmol/L Na2HPO4, 2 mmol/L KH2PO4, pH 7.4)DNA 提取缓冲液(100 mmol/L Tris, 100 mmol/L EDTA, 100 mmol/L Na3PO4, 1.5 M NaCl, 1%CTAB, pH 8.0)蛋白酶 K(25 mg/mL)溶菌酶(50 mg/mL, pH 8. 0)20% SDS氯仿异戊醇异丙醇70%乙醇RNAse 20 mg/mLQIAX大片段凝胶回收试剂盒(Qiagen)主要设备50mL、1.5。

20、细菌基因组 DNA 的提取方法综述1 快速微量提取法A.取 1.5ml 菌体培养物于一灭菌 Ep 管中，12000rpm 离心 1min, 丢去上清夜，收集菌体。B.加入 400ul 裂解液（40mMTris-醋酸，20mM 醋酸钠,1mMEDTA,1%SDS,pH7.8）混匀,置于 37oC 水浴 1hr。C.然后加入 200ul5mol/L 的氯化钠溶液，混匀后于 13000rpm 离心 15min。D.取上清液，用苯酚抽提 2 次，氯仿抽提 1 次。E.加两倍体积无水乙醇，1/10 体积醋酸钾(3M ,pH8.0)，-20 度保存 1 小时后，13000rpm离心 15min，弃上清液，沉淀用 70%乙醇洗 2 次；置于室温干燥后，溶于 50ulTE 溶液中，置 4oC 保。