流式细胞术讲义

1、第十一章 流式细胞技术与流式细胞仪,本章内容提要,概述,流式细胞仪的定义,流式细胞术的定义,生物学颗粒的内容,流式细胞仪的发展史,概述,流式细胞仪的定义:流式细胞仪是以激光为光源，集流体力学技术、电子物理技术、光电测量技术、计算机技术以及细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的新型高科技仪器。,概述,流式细胞术的定义:应用流式细胞仪对于处在快速直线流动状态中的细胞或生物颗粒进行快速的、多参数的定量分析和分选的技术称为流式细胞术。,概述,生物学颗粒包括大的免疫复合物、DNA、RNA、蛋白质、病毒颗粒、脂质体、细胞器、。

2、1流式细胞术检测细胞周期流式细胞术在许多题中常用到，但对其结果的分析却不是很清楚。在此收集点相关资料并以实验中的一张图片为例，大家共同学习。图中白色箭头及尾部 G1,G2,S 是我用 PS 加上去的，方便讨论。首先来认识下图： 1. 纵坐标 Cell Number：即计数到的有效细胞数；2. 横坐标 DNA Content：即 DNA 量，为什么用 DNA 量来区别各周期我们等下再讲；3. G1、G2、S 三期在上图已经用箭头标示；4. 右侧数字含义：Mean G1=195.4 即 G1 期 DNA 含量平均值为195.4；%G1=73.6 即 G1 期细胞数占总数的 73.6%；以此类推2下面从细胞周期的。

3、 1第一章 流式细胞仪的结构和原理 第 1 节 流式细胞术发展史 纵观历史，几乎没有哪一门科学技术象流式细胞术这样凝结了众多不同学术背景、不同科研领域科学家的心血。从流式细胞术的发明、改进、革新，到今天在各个领域应用的拓展，每一步都是诸如生物学、生物技术、计算机科学、流体力学、激光技术、高等数学、临床医学、分子生物学、有机化学和生物物理学等学科知识综合运用的结晶。现代流式细胞术更是由于结合了单克隆抗体技术、定量细胞化学技术和定量荧光细胞化学，使其在生物学、临床医学、药物学等等众多研究领域中的应用有了更加。

4、流式细胞术免疫标记应用简介,2009-12-03,流式细胞术系列讲座之免疫标记,上次流式细胞术讲座内容（概述）,流式细胞术的一般介绍 流式细胞术在临床检测和科研中的应用,流式细胞仪可检测的细胞参数,细胞结构 细胞大小 细胞颗粒性程度 细胞表面面积 核浆比例 DNA含量与细胞周期 RNA含量,细胞功能 细胞表面蛋白抗原 细胞胞浆内蛋白性抗原 细胞内细胞因子 细胞增殖 细胞内钙离子浓度,免疫标记技术,免疫标记技术（immunolabelling technique）:是指用荧光素、放射性同位素、酶、发光剂或电子致密物质等作为示踪剂，标记抗体或抗原进行的抗原抗体。

5、四种常见流式实验讲解,林奕婷 2013年8月14日,Guava流式细胞常见应用分析,1. Guava easycyte 8HT 操作流程 2. 四种常见流式细胞术,细胞凋亡的检测与分析DNA含量检测与细胞周期分析胞内活性氧水平的检测与分析细胞表面分子的检测与分析组合实验,1. Guava easycyte 8HT 操作流程 Incyte模块,1.1 开机-清洗 （原则：先开仪器后开软件，开机必清洗）1.2 采集样本1.3 分析1.4 关机 （原则：先关软件后关仪器，关机前必清洗）1.5 日常维护,1.1 清洗,1.2 样本采集,1.3 分析见具体实验的分析。1.4 关机,1.5 日常维护,保持空气干燥，会使激光器的使。

6、流式细胞术及其应用,第 一 部 分 流式细胞术的一般介绍,概念,流式细胞术（Flow Cytometry，FCM或 FACS） 利用流式细胞仪对处在快速、直线、流动状态中的单 细胞或生物颗粒进行多参数、快速定量分析，同时对特 定群体加以分选的现代细胞分析技术。流式细胞仪（Flow Cytometer) 集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、电子计算 机技术、细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的 一种新型高科技仪器。,流式细胞仪特点,单细胞悬液或生物颗粒,分析速度高,多参数,精度高,当代最先进的细胞定量分析技术,FACSCalibur,特点： 光路调节系统固定。

7、流式细胞术原理及应用,一、什么是流式细胞术？流式细胞仪的构造 二、怎样设计流式实验？ 三、流式实验中涉及到的关键步骤 四、常见流式细胞术应用,一、流式细胞术基本概念,流式细胞术（Flow Cytometry）是对于处在快速直线流动中的细胞和生物颗粒进行多参数、快速的定量分析和分选技术. 研究对象为生物颗粒，如各种细胞、微生物及人工合成微球等。 对生物颗粒的物理参数及生物学特性进行定性和定量分析。,流式细胞仪构造图,流式细胞仪五大系统,流动室与液流驱动系统 激光光源及光束成形系统 光学系统 信号检测与分析系统 细胞分选系统,流。

8、细胞凋亡的流式细胞术检测,细胞凋亡与细胞坏死,1,细胞凋亡的流式检测方法,2,流式检测细胞凋亡面临的问题,3,目 录,1.1 细胞凋亡,细胞凋亡(Apoptosis)是指细胞基因调控的一种自主性的自杀现象。或者说在一定的生理或病理条件下，细胞遵循自身的程序，自我结束生命的死亡方式。 程序性细胞死亡(Programmed Cell Death, PCD)细胞凋亡同细胞分裂、细胞分化一样，是机体生存和发育离不开的最基本生物现象，通过凋亡可以平衡机体内细胞的数目，清除衰老、过剩、有害的细胞。,与细胞凋亡有关的疾病,细胞凋亡的形态特征,凋亡的起始：微绒毛消失，细。

9、流式细胞术及其应用,分子生物学研究中心 贾宇臣,第 一 部 分 流式细胞术的一般介绍,概念,流式细胞术（Flow Cytometry，FCM） 利用流式细胞仪对处在快速、直线、流动状态中的单 细胞或生物颗粒进行多参数、快速定量分析，同时对特 定群体加以分选的现代细胞分析技术。流式细胞仪（Flow Cytometer) 集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、电子计算 机技术、细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的 一种新型高科技仪器。,流式细胞仪特点,单细胞悬液或生物颗粒,分析速度高,多参数,精度高,当代最先进的细胞定量分析技术,FACSCalibur,特点。

10、流 式 细 胞 术 苏 黎 北京大学医药卫生分析中心 细胞分析室 联 系 电 话： 82805034 82802437 2 流式细胞仪内部结构 光学系统 激光光源 光收集系统 液流系统 流动室 液流驱动系统 电子系统 光电转换器 数据处理系统 细胞分选系统 喷嘴 电偏转板 样品收集器 3 流式细胞仪 与 血细胞 检测仪 的共同特点：对液体中的各种细胞及其多种特性进行定量分析。 教学参考书 流式细胞术的原理和应用。宋平根，李素文主编。 北京师范大学出版社。 1992.3 实用流式细胞术彩色图谱。王书奎，周振英主编。 上海第二军医大学出版社。 2004.4 临床流式细胞。

11、利用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡1. 细胞按每孔 4215;105 个的密度接种于 60 mm 细胞培养皿内，培养过夜后，用相应药物处理细胞。设置实验组和对照组，实验组依辛伐他汀浓度分为 3 组，2molL5molL10molL 辛伐他汀组。

12、流式细胞术,流式细胞术(flow cytometry, FCM)是以流式细胞仪为检测手段的一项能快速、精确的对单个细胞理化特性进行多参数定量分析和分选的新技术。,流式细胞术最大的特点是能在保持细胞及细胞器或微粒的结构及功能不被破坏的状态下，通过荧光探针的协助，从分子水平上获取多种信号对细胞进行定量分析或纯化分选。,细胞不被破坏，测量快速、大量、准确、灵敏、定量,流式细胞术的特点,流式细胞仪是测量染色细胞标记物荧光强度的细胞分析仪，是在单个细胞分析和分选基础上发展起来的对细胞的物理或化学性质（如大小、内部结构、DNA、RNA、蛋。

13、流式细胞术及其应用,分子生物学研究中心 贾宇臣,第 一 部 分 流式细胞术的一般介绍,概念,流式细胞术（Flow Cytometry，FCM） 利用流式细胞仪对处在快速、直线、流动状态中的单 细胞或生物颗粒进行多参数、快速定量分析，同时对特 定群体加以分选的现代细胞分析技术。流式细胞仪（Flow Cytometer) 集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、电子计算 机技术、细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的 一种新型高科技仪器。,流式细胞仪特点,单细胞悬液或生物颗粒,分析速度高,多参数,精度高,当代最先进的细胞定量分析技术,FACSCalibur,特点。

14、流式细胞术,09-09-21,流式细胞术简介 流式细胞仪简介 流式细胞术应用 样品的准备 结果分析,流式细胞术简介,流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)是七十年代发展起来的高科学技术,它集计算机技术、激光技术、流体力学、细胞化学、细胞免疫学于一体, 同时具有分析和分选细胞功能。它不仅可测量细胞大小、内部颗粒的性状,还可检测细胞表面和细胞浆抗原、细胞内DNA、RNA含量等,在血液学、免疫学、肿瘤学、药物学、分子生物学等学科广泛应用。,流式细胞仪简介,流式细胞仪（Flow Cytometer 简称FCM）是一项集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、。

15、流式细胞术 之 流式细胞仪的结构与原理,韦俊 2013.08,技术专题,概念,流式细胞仪(flow cytometer ,FCM)是集现代物理电子技术、激光技术、计算机技术于一体的先进科学技术设备，是生命科学研究领域中先进的仪器之一。 流式细胞术(flow cytometry)就是利用利用流式细胞仪对处于快速直线流动状态中的单列细胞或生物颗粒进行逐个、多参数、快速的定性、定量分析或分选的技术。,流式细胞仪的发展历史,起源: 1934年- Moldvan毛细管细胞计数仪 雏形: 1947年- Coulter细胞计数器 1953年-第一台流式细胞分析仪Coulter Counter Model A 1974年世界上。

16、流式细胞术,检验科,临床检验诊断学研究生课程,参考书,实用流式细胞术 北京大学医学部出版社 刘艳荣 主编临床流式细胞分析 上海科学技术出版社 王建中 主编,教学目的,掌握流式细胞术的基本工作原理熟悉流式细胞术的临床及科研应用了解流式细胞术的质量控制,流式细胞术定义,流式细胞术(flow cytometry, FCM)是以流式细胞仪为检测手段的一项能快速、精确的对单个细胞理化特性进行多参数定量分析和分选的新技术。,流式细胞术特点,流式细胞术最大的特点是能在保持细胞及细胞器或微粒的结构及功能不被破坏的状态下，通过荧光探针的协助，从分子。

17、流式细胞术的血液学应用,北京协和医院血液科 汪 玄,流式细胞术的概念,流式细胞术（Flow cytometry；FCM）是集计算机技术、激光技术、电子技术、流体力学、细胞化学、细胞免疫学等多门高新技术与方法为一体的现代细胞分析技术，它以流式细胞仪（Flow cytometer）为工具，在单细胞水平上对大量细胞进行高速（每秒计数可达100010000个细胞）、准确、多参数的定量分析或分选（纯度可达99%以上），已成为现代骨髓血细胞学研究中最先进的分析技术。,流式细胞术与PNH的诊断,原 理,阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）是一种获得性基因突变所致的克隆。