分光光度法

1、分光光度法测铁,化学实验教学中心,一、 实验目的,掌握用磺基水杨酸显色法测铁的原理和方法。 掌握分光光度计的使用方法。,二、实验原理,在 pH=911.5 的 NH3.H2O-NH4Cl 溶液中，Fe3+与磺基水杨酸反应生成组成比1:3的黄色稳定配合物。,该配合物在碱性溶液中的最大吸收波长为 420 nm，可在此波长下测量吸光度，由朗伯-比耳定律计算铁含量。,四、实验步骤,取系列50 mL容量瓶并编号，按下表配制系列溶液。以试剂空白作参比溶液，在420 nm波长下测定各溶液的吸光度。,以吸光度为纵坐标, 铁含量为横坐标, 绘制工作曲线。由工作曲线确定待测溶液的。

2、导数分光光度法,卢泽辉(04081051) 涂海涛(04081056),把吸收光谱写成波长的函数，那么它的导函数图像就是导数光谱,导数吸光光度法测定应用步骤,吸收曲线的绘制,测定波长的确定,回收率实验,样品测定,标准曲线的测定,实验数据来自于 吴京平导数分光光度测定中的计算机图形分析,如何从光谱中读取定量数据？,导数吸光光度法如何消除背景干扰？,如何绘制导数吸光光谱,在300190nm波长范围内，以2nm波长间隔，水为溶剂，测定盐酸黄碱和干扰组分尼泊金乙酯的吸收值(A)，并绘出吸收光谱一阶导数光谱和二阶导数光谱,选取待测组分导数曲线上振幅较大的。

3、十 分光光度法 考试内容 分光光度法概述 吸收定律 显色反应 分光光度计及测定方法 考试要求 1 了解分光光度法的基本原理 1 物质对光的选择性吸收 光是一种电磁波 具有波粒二象性 物质的颜色是由于物质对不同波长的光具有选择性吸收作用而产生的 当一束光照射到某物质或某溶液上时 只有入射光中光子的能量h 与被照射物质粒子的基态和激发态之间的能级差 E相等的那部分波长的光 才会被物质或其溶液所吸收 不。

4、红外分光光度法1 简述化合物受红外辐射照射后，使分子的振动和转动运动由较低能级向较高能级跃迁从而导致对特定频率红外辐射的选择性吸收，形成特征性很强的红外吸收光谱，红外光谱又称振-转光谱。红外光谱是鉴别物质和分析物质化学结构的有效手段，已被广泛应用于物质的定性鉴别、物相分析和定量测定，并用于研究分子间和分子内部的相互作用。习惯上，往往把红外区分为 3 个区域，即近红外区（128004000 -1cm，0.782.5um） ，中红外区（4000400 -1cm，2.525um）和远红外区（40010 -1cm，251000um） 。其中中红外区是药物分析中最常用的区。

5、分光光度法测甲醛含量一简介分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸光度或发光强度，对该物质进行定性和定量分析的方法。在分光光度计中，将不同波长的光连续地照射到一定浓度的样品溶液时，便可得到与不同波长相对应的吸收强度。如以波长（ ）为横坐标，吸收强度（A ）为纵坐标，就可绘出该物质的吸收光谱曲线。利用该曲线进行物质定性、定量的分析方法，称为分光光度法，也称为吸收光谱法。用紫外光源测定无色物质的方法，称为紫外分光光度法；用可见光光源测定有色物质的方法，称为可见光光度法。它们与比色。

6、200第 20 章 吸光光度法思 考 题1. 什么叫单色光？复色光？哪一种光适用于朗伯比耳定律？答：仅具有单一波长的光叫单色光。由不同波长的光所组成光称为复合光。朗伯-比耳定律应适用于单色光。2. 什么叫互补色？与物质的颜色有何关系？答：如果两种适当的单色光按一定的强度比例混合后形成白光，这两种光称为互补色光。当混合光照射物质分子时，分子选择性地吸收一定波长的光，而其它波长的光则透过，物质呈现透过光的颜色，透过光与吸收光就是互补色光。3. 何谓透光率和吸光度？ 两者有何关系？答：透光率是指透射光强和入射光强之比，用 。

7、1紫 外 -可 见 分 光 光 度 法 习题精选一、选择题（其中 110 题为单选，1524 题为多选）1.符合朗伯特-比耳定律的有色溶液稀释时，其最大吸收峰的波长位置（C. ）A. 向短波方向移动 B. 向长波方向移动 C. 不移动，且吸光度值降低D. 不移动，且吸光度值升高2双波长分光光度计与单波长分光光度计的主要区别在于（B ）A. 光源的种类及个数 B. 单色器的个数C. 吸收池的个数 D. 检测器的个数3.在符合朗伯特-比尔定律的范围内，溶液的浓度、最大吸收波长、吸光度三者的关系是（ B）A. 增加、增加、增加 B. 减小、不变、减小C. 减小、增加、减小 。

8、1第十三章 可见分光光度法和紫外分光光度法1 基本要求 TOP 1.1 掌握分光光度法的基本原理，LambertBeer 定律以及透光率、吸光度、摩尔吸光系数等基本概念及相互关系。1.2 熟悉物质对光的选择性吸收，吸收光谱的意义；可见分光光度法的测定方法标准曲线法和标准对照法。1.3 了解光的基本性质，光的加和性；分光光度计的基本构造；比吸光系数比较法、差示分光光度法和双波长法的测定方法；提高测量灵敏度和准确度的方法；紫外分光光度法的一般概念。2 重点难点 TOP2.1 重点分光光度法原理Lambert-Beer 定律。2.2 难点提高测量灵敏度和准确度。

9、红外分光光度法附录 C. 红外分光光度法1.仪器及其校正，可使用傅里叶变换红外光谱仪或色散型红外分光光度计。用聚苯乙烯薄膜（厚度约为 0.05mm)校正仪器，绘制其光谱，用 2851cm、 1601cm、1028cm、907cm处的吸收峰对仪器的波数进行校正。在 2000400cm区间允许相差4cm以内,在 40002000cm区间允许相差8cm以内。仪器的分辨率要求在 31102850cm范围内应能清晰地分辨出 7 个峰,2924cm与 2851cm吸收带的分辨深度不小于 18透光率，1601cm与 1583cm吸收带的分辨深度不小于 8透光率。仪器的标称分辨率，除另有规定外，应不低于是 2cm。2.试样的制。

10、1基本概念透光率（T）：透过样品的光与入射光强度之比。T=It/I0吸光度（A）：透光率的负对数。A=lgT=lg(I 0/It)吸光系数（E）：吸光物质在单位浓度及单位厚度时的吸光度。根据浓度单位的不同，常有摩尔吸光系数 和百分吸光系数 之分。电子跃迁类型：（1）- * 跃迁：处于 成键轨道上的电子吸收光能后跃迁到 * 反键轨道。饱和烃中电子跃迁均为此种类型，吸收波长小于 150nm。（2）- * 跃迁：处于 成键轨道上的电子吸收光能后跃迁到 * 反键轨道上，所需的能量小于 - * 跃迁所需的能量。孤立的 - * 跃迁吸收波长一般在 200nm左右，共轭的 - * 。

11、荧光分光光度法,简介,1.和UV异同点2.荧光分析法主要应用范围与常用方法 3.优势,1.与UV异同点 1)构造与UV很相似. 属于分光光度法,光源.单色器等 2)组件的布置稍有不同 荧光采用激发光和发射光 成直角的直角光路., 3)原理也不一样.这在后面介绍,2.荧光分析法主要应用范围1）生物技术的分析,免疫技术的分析,如DNA、抗体、抗原等; 2）痕量元素的分析，如70多种无机元素； 3）间接测定众多的有机物，包括药物。,荧光分析一般分为三种：,1.X射线荧光分析（X射线） 2.原子荧光分析（激光） 3.分子荧光分析（汞弧灯）,3.优势 1）灵敏度高：比UV高2。

12、分光光度法目录第一节 基本原理第二节 仪器结构第三节 显色与测量条件的选择第四节 723N 型分光光度计操作维护第一节 基本原理在光谱分析中，依据物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法称为吸光光度法,主要有:红外吸收光谱：分子振动光谱，吸收光波长范围 2.51000 m ,主要用于有机化合物结构鉴定。紫外吸收光谱：电子跃迁光谱，吸收光波长范围 200400 nm（近紫外区） ，可用于结构鉴定和定量分析。可见吸收光谱：电子跃迁光谱，吸收光波长范围 400750 nm ，主要用于有色物质的定量分析。光的吸收定律1.朗伯比耳定律布格(Bouguer)和朗。

13、第六章 紫外吸收光谱分析,第一节 光的基本性质,一、光学分析法 （一）光学分析法 依据物质发射的电磁辐射或物质与电磁辐射相互作用而建立起来的各种分析法的统称。,（二）分类：1光谱法：利用物质与电磁辐射作用时，物质内部发生量子化能级跃迁而产生的吸收、发射或散射 、 辐射等电磁辐射的强度随波长变化的定性、定量分析方法按能量交换方向分 吸收光谱法发射光谱法按作用结果不同分 原子光谱线状光谱分子光谱带状光谱,2非光谱法：利用物质与电磁辐射的相互作用测定电磁辐射的反射、折射、干涉、衍射和偏振等基本性质变化的分析方法分类。

14、1,第四章 红外分光光度法,Infrared Spectrophotometry,2,又称红外光谱法 Infrared Spectrometry(IR)是基于分子对红外光的吸收而建立起来的吸收光谱方法。 红外光谱是物质受红外辐射照射，使分子振（转）能级跃迁所产生的吸收光谱。红外吸收光谱Infrared Absorption Spectrum 其光谱区：波数130033cm-1波长0.75300 m,3,红外吸收光谱主要在4000400 cm-1 （2.525m）的“中红外区” 即分子的振动光谱(Vibrational Spectrum)红外吸收光谱法的应用：分子结构的研究化学组成的分析,4,红外光谱的发展历史,1892年利用岩盐棱镜和测热幅射计测定了20。

15、分光光度法分析复习题一、填空：1.双波长分光光度计在仪器设计上通常采用_一_个光源,_两_个单色器和_一_个吸收池. 2.某溶液用 2cm 吸收池测量时 T=60%,则 A=_0.222 ,若改用 1cm 和 3cm 吸收池则 A 分别为_0.111_和_0.333_。3.在分光光度计中，常因波长范围不同而选用不同的光源，下面两种光源，各适用的光区为：(1)钨灯用于 可见光区_；(2)氘灯用于_紫外光区_。4.分光光度法的灵敏度是由物质 在最大吸收波长 max 处的摩尔吸收系数 表示,其数学表达式是 A/(bc)(Lmol 1 cm1 ） 。5.分光光度法用于多组分体系测定的前提是_体系各组分间互相不。

16、项目二,分光光度法,Spectrophotometry,第一节 物质的吸收光谱,一、基本概念,复色光：不同波长组成的光 单色光：单一波长的光 可见光：380 780 nm 紫外光：200 380 nm 互补色光：按适当的强度比例混合可成白光的两种颜色的光,白光,蓝,黄,红,青,橙,紫,青蓝,绿,物质的吸收光谱,互补色光示意图,二、物质对光具有选择性吸收,若溶液选择性吸收某种颜色的光，则溶液呈吸收光的互补色光。,如硫酸铜溶液选择吸收黄色光，故溶液呈蓝色,物质的吸收光谱,M(基态）h,M*(激发态),选择性吸收：E= h,光子h=hc/,E,不同物质， E不同，选择吸收光子能量也不 同。

17、分光光度法,第五章,第一节 紫外-可见分光光度法,根据物质对波长为200760 nm波长范围的光吸收特性所建立的一种定性、定量和结构分析的方法。,紫外-可见吸收光谱,分子的价电子吸收了光的能量，由低能量的基态跃迁到高能量的激发态，在相应波长位置出现吸收带形成的光谱，称为紫外-可见吸收光谱,一、基本原理,（一） Lambert -Beer定律,物质对单色光吸收特性与浓度、液层厚度关系定律,摩尔吸收系数,百分吸收系数,二、紫外-可见分光光度计 1、光源 紫外区 氢灯或氘灯 可见区 钨灯或卤钨灯 2、单色器 棱镜或光栅 3、吸收池 石英或玻璃 4、检测。