1、分光光度法目录第一节 基本原理第二节 仪器结构第三节 显色与测量条件的选择第四节 723N 型分光光度计操作维护第一节 基本原理在光谱分析中，依据物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法称为吸光光度法,主要有:红外吸收光谱：分子振动光谱，吸收光波长范围 2.51000 m ,主要用于有机化合物结构鉴定。紫外吸收光谱：电子跃迁光谱，吸收光波长范围 200400 nm（近紫外区） ，可用于结构鉴定和定量分析。可见吸收光谱：电子跃迁光谱，吸收光波长范围 400750 nm ，主要用于有色物质的定量分析。光的吸收定律1.朗伯比耳定律布格(Bouguer)和朗伯(Lambert)先后于 1729 年和
2、1760 年阐明了光的吸收程度和吸收层厚度成正比：Ab1852 年比耳(Beer) 又提出了光的吸收程度和吸收物浓度之间也具有成正比的关系：A c二者的结合称为朗伯比耳定律：当一束平行的单色光通过均匀、非散射的稀溶液时，溶液对光的吸收程度与溶液的浓度及液层厚度的乘积成正比。朗伯比耳定律朗伯 比耳定律是吸光光度法的理论基础和定量测定的依据。应用于各种光度法的吸收测量。它不仅适用于可见光，也适用于紫外光和红外光；不仅适用于均匀非散射的液体，也适用于固体和气体。朗伯比耳定律，数学表达式其数学表达式为式中 A：吸光度；描述溶液对光的吸收程度b：液层厚度(光程长度)，通常以 cm 为单位；c：溶液的摩尔
3、浓度，单位 mol/L； ：摩尔吸光系数，单位 L/mol/cm； 摩尔吸光系数 的讨论 摩尔吸光系数 在数值上等于浓度为 1 mol/L、液层厚度为 1cm 时,该溶液在某一波长下的吸光度；摩尔吸光系数 的讨论（1）摩尔吸光系数是吸收物质在一定波长和溶剂条件下的特征常数；（2）不随浓度 c 和光程长度 b 的改变而改变。在温度和波长等条件一定时， 仅与吸收物质本身的性质有关，与待测物浓度无关； （3）可作为定性鉴定的参数； （4）同一吸收物质在不同波长下的 值是不同的。在最大吸收波长 max 处的摩尔吸光系数，常以 max 表示。 max 表明了该吸收物质最大限度的吸光能力，也反映了光度法测
4、定该物质可能达到的最大灵敏度。 摩尔吸光系数 的讨论（5） max 越大表明该物质的吸光能力越强，用光度法测定该物质的灵敏度越高。 105 ： 超高灵敏； =(610）10 4 ：高灵敏； 10 4；（3）有色化合物 ML 要稳定，不分解； （4） ML 的组成要一定 （只 ML 无 MLn） ；（5） ML 与 L 颜色差别大 ,吸收峰波长差：60nm. 选择合适的参比溶液为什么需要使用参比溶液？测得的的吸光度真正反映待测溶液吸光强度。 参比溶液的选择一般遵循以下原则：参比溶液的选择1M 、L 均无色，可用蒸馏水作参比。 2. L 无色，M 有色，可用不加显色剂的被测试液作参比溶液。 3.
5、L 有色，M 无色，可选择不加试样溶液的试剂空白作参比溶液。 4L、M 均有色，可将一份试液加入适当掩蔽剂，将被测组分掩蔽起来，使之不再与显色剂作用，而显色剂及其他试剂均按试液测定方法加入，以此作为参比溶液。 5 改变加入试剂的顺序，使被测组分不发生显色反应，可以此溶液作为参比溶液消除于扰。第四节 723N 型分光光度计操作维护开机操作1、 开启主机电源，仪器自动完成初始化，显示主菜单。2 、仪器预热 30 分钟。（要不要打开样品室盖子？）停机操作 1、分析完毕，按“菜单” 键，返回主菜单。（是否一定要返回主菜单，才能关电源？）2、按电源开关键，关闭仪器，切断电源。3、 检查样品室是否有溢出的溶液。清扫仪器内外卫生，作好仪器使用登记，罩上防尘罩。日常维护6.1.1 每次使用后应检查样品室是否积存有溢出溶液，经常擦拭样品室，以防废液对部件或光路系统的腐蚀。6.1.2 仪器使用完毕后，应盖好防尘罩，可在样品室及光源室内放置硅胶袋防潮，但开机时一定要取出。6.1.3 长期不用仪器时，尤其要关注环境的温度、湿度，定期更换硅胶。 常见故障和处理
