1、分光光度法,第五章,第一节 紫外-可见分光光度法,根据物质对波长为200760 nm波长范围的光吸收特性所建立的一种定性、定量和结构分析的方法。,紫外-可见吸收光谱,分子的价电子吸收了光的能量，由低能量的基态跃迁到高能量的激发态，在相应波长位置出现吸收带形成的光谱，称为紫外-可见吸收光谱,一、基本原理,（一） Lambert -Beer定律,物质对单色光吸收特性与浓度、液层厚度关系定律,摩尔吸收系数,百分吸收系数,二、紫外-可见分光光度计 1、光源 紫外区 氢灯或氘灯 可见区 钨灯或卤钨灯 2、单色器 棱镜或光栅 3、吸收池 石英或玻璃 4、检测器 光电池、光电管、光电 倍增管、光二极管阵列检
2、测器,紫外-可见分光光度计的校正 波长 汞灯、氘灯、钬玻璃 吸收度 重铬酸钾的硫酸溶液 杂散光 碘化钠和亚硝酸钠溶液 吸收池误差,三、紫外-可见吸收光谱与结构的关系,（一） 紫外-可见吸收光谱,以波长为横坐标，以吸收度为纵坐标所绘制的曲线,特征参数,（1）最大吸收波长（max）,（2）最大吸收波长处的吸收系数,（3）最小吸收波长（ min）,（4）末端吸收,（二）电子跃迁与吸收带,四、吸收度的测定方法,（一）对溶剂的要求 A尽量小,（二）空白对照试验 清零,（三）测定波长确证 2nm,（四）供试液的浓度 A=0.30.7,（五）狭缝宽度,五、应用,（一）鉴别,吸收光谱,（1） 结构完全相同的化
3、合物应有 完全相同的吸收光谱,注意,（2） 吸收光谱完全相同的化合物 不一定是同一个化合物,*利用药物与杂质吸收光谱的明显差别，进行杂质检查,（二）杂质检查中的应用,*在一定波长处测定A，规定A,（三）在含量测定中的应用,1. 对照品比较法,2. 吸收系数法,3. 计算分光光度法（多组分的测定）,双波长分光光度法三波长分光光度法导数光谱法解联立方程法,95：121125受影响的物理常数 A、吸收系数 B、比旋度 C、两者均可 D、两者均不可121、受温度影响122、受光线波长影响123、受供试品浓度影响124、受时间影响125、受溶剂种类影响,B,C,D,D,A,95：138、紫外分光光度计应
4、定期检查 A、波长精度 B、吸收度准确性 C、狭缝宽度 D、溶剂吸收 E、杂散光,97：76、某药物的摩尔吸收系数（）很 大，则表示A、光通过该物质溶液的光程长B、该物质溶液的浓度很大C、该物质对某波长的光吸收能力很强D、该物质对某波长的光透光率很高E、测定该物质的灵敏度低,97：127、紫外分光光度法中，用对照品比 较法测定药物含量时A、需已知药物的吸收系数B、供试品溶液和对照品溶液的浓度应接近C、供试品溶液和对照品溶液应在相同的条 件下测定D、可以在任何波长处测定E、是中国药典规定的方法之一,97：131、用紫外分光光度法鉴别药物 时，常采用核对吸收波长的方 法，影响本法试验结果的有 A、
5、仪器波长的准确度 B、供试品溶液的浓度 C、溶剂的种类 D、吸收池的厚度 E、供试品的纯度,99：133、紫外分光光度计是由以下部 件组成的 A、氘灯 B、光栅 C、石英吸收池 D、光电管 E、真空热电偶,01：78、含有某一发色团的药物，最大吸收波长为230nm，其跃迁类型为 A、* B、* C、 n * D、 n * E、以上跃迁类型都可能,例1、摩尔吸收系数的表示符号是 A、 B、 C、 D、 n E、 Ka,例2、可见一紫外分光光度法测定的药 物分子具有吸收特性的电磁波范 围是 A、10400nm B、400800nm C、800400nm D、400 m1m E、200760nm,例
6、3、分光光度法（吸收光度法）所依 据的基本定律是 A、Beer定律 B、Lambert定律 C、Nernst公式 D、Van Deemter方程 E、Beer-Lambert定律,第二节 荧光分析法,一、基本原理,荧光 处于第一激发态的分子， 跃迁回基态时发射的光称为荧光，其 能量小于激发光，波长长于激发光； 除去激发光源，荧光立即熄灭,荧光为发射光。利用荧光的物理特性进行定性与定量测定的方法称为荧光分析法。 荧光法最主要的优点是测定灵敏度高，选择性好。,荧光激发光谱（激发光谱） 横坐标 激发光波长 纵坐标 荧光强度,荧光发射光谱（荧光光谱） 横坐标 荧光发射光波长 纵坐标 荧光强度,定量测定
7、原理,当激发光强度、波长、所用溶剂及温度等条件一定时，在较稀浓度范围内药物的荧光强度与溶液中该物质的浓度成正比,二、荧光光度计,1、光源 汞灯或氙灯2、单色器 滤光片或光栅（两个） 第二个位于激发光源垂直方向3、吸收池 低荧光玻璃或石英池 四面透明4、检测器 光电倍增管 在与激发光源垂直方向检测,五、应用,1. 鉴别,2. 含量测定 对照品比较法,95：72、在测量药物荧光强度时，要在与入射光成直角方向上进行测定，这是由于 A、荧光的波长比入射光的波长长 B、荧光强度比透射光强度小 C、荧光强度比透射光强度大 D、只在入射光成直角方向上才有荧光 E、荧光是向多方向发射的，为了减少 透射光影响,
8、96：74、荧光是指当用一定波长的紫外光或可见光照射某一物质时，此物质会在短时间内发射出 A、波长较照射光波长为短的光 B、波长较照射光波长为长的光 C、波长与照射光波长相等的光 D、波长较磷光波长为长的光 E、波长与磷光波长相等的光,00：77、光电荧光计中采用的第二块 滤光片是为了 A、获得一定的激发光波长 B、获得一定的吸收光波长 C、获得较纯的荧光 D、滤去非平行光 E、滤去荧光,例、荧光分析法和紫外分光法的不同点 A、测定药物特性 B、原理 C、光源和检测器的位置 D、样品池 E、单色器,第三节 红外分光光度法,红外吸收光谱是由分子的振动及 转动能级的跃迁而引起的,将分子吸收红外光的
9、情况用仪器记录下来，就是红外光谱图,红外吸收光谱又称为分子的振-转光谱,红外分光光度法是利用物质分子吸收波数在4000400cm-1范围的红外光而产生的吸收光谱进行分析的方法，由分子的振动、转动能级跃迁引起,一、基本原理,纵坐标 透光率（T%）,横坐标 波数或波长,二、红外分光光度计,1、光源 硅碳棒、Nernst灯2、吸收池 KBr岩盐窗池(液、气) 片剂框（KBr压片）3、单色器 光栅4、检测器 真空热电偶 高莱池（Golay）,红外分光光度计的校正 以聚苯乙烯薄膜为测试样品，绘制其红外光谱图，对仪器进行校正，以确保测定波长的准确性和仪器的分辨率,三、红外光谱与物质结构的关系,分子中每个基
10、团一般都有相应的吸收峰。药物分子的组成、结构、官能团不同时，其红外光谱也不同。药物的红外光谱能反映药物分子的结构特点，具有专属性强、准确度高的特点，是验证已知药物的有效方法。,指纹区 1300400cm-1密，高度敏感,特征区 4000 1300cm-1疏，易辨认,37503000 33003000 30002700 OH 羟基 三CH炔基 CH 甲基 NH 氨基 CH 苯环 亚甲基 次甲基 CHO 醛基,24002100 19001650 16701500 C三C 乙炔基 CO 羰基 CC苯环 C三N 腈基,13001000 1000650 C-O 醚 CH 苯(单取代) 酯,四、应用,（一
11、）已知化合物的鉴别 1、对照品法（USP） 2、对照图谱法（ChP）,用本法鉴别药物时，中国药典要求按指定条件绘制供试品的红外光吸收图谱，与药品红外光谱集中的相应标准图谱对比，如果峰位、峰形、相对强度都一致时，即为同一种药物,阿司匹林,羟基：OH 33002300,羰基：CO 1760、1695,苯环：CC 1610、1580,酯基：CO 1310、1190,邻位取代苯环：NH750,盐酸普鲁卡因,氨基： 3315、3200 2585 N-H 1645羰基：C=O 1692苯环：C=C 1604、1520酯基：C-O 1271、1170、1115,（二）药品的纯度检查,用于药物中无效或低效晶型
12、的检查,如 甲苯咪唑中A晶型的检查 无味氯霉素中A晶型的检查,（三）未知化合物的研究（四）含量测定,95：137、乙酰水杨酸与水杨酸的红外 吸收光谱的主要区别是 A、1610cm1 B、1460cm1 C、1755cm1 D、1420cm1 E、3230cm1,96：71、有一种含氮的药物，如用红 外光谱判断它是否为腈类物质时， 主要依据的谱带范围为 A、33003000cm1 B、30002700cm1 C、24002100cm1 D、19001650cm1 E、15001300cm1,97：136、有一不饱和烃，如用红外光 谱判断它是否为芳香烃，主要依 据的谱带范围是 A、31003000
13、cm1 B、30002700cm1 C、19501650cm1 D、16701500cm1 E、1000650cm1,98：72、红外光谱图中16501900cm1 处具有强吸收峰的基团是 A、甲基 B、羰基 C、羟基 D、氰基 E、苯环,00：116120 A紫外可见光谱 B红外光谱 C两者均是 D两者均不是 116. 由振动能级跃迁引起的 117. 由n *跃迁引起的 118. 通过振动弛豫回到第一激发态，再 跃迁回基态所引起的 119. 符合Beer-Lambert定律 120. 采用真空热电偶作检测器,B,A,D,A,B,01：83、红外分光光度法在药物的杂 质检查中主要用来检查 A、合成反应中间体 B、无紫外吸收的杂质 C、具有挥发性的杂质 D、金属的氧化物或盐 E、无效或低效的晶型,01：133.苯乙酮的红外图谱上有特征吸 收峰的区域是 A、19001650cm-1 B、 33003000cm-1 C、 16001580cm-1 D、 24002100cm-1 E、 1180950cm-1,例1、中国药典（2000年版）规定校正 红外分光光度计用 A、氖灯 B、硅碳棒 C、聚苯乙烯 D、聚乙醇 E、聚苯乙烯薄膜,
