1、不通透的染色方法: 封闭液:3%BSA 用 PBS 配制不加吐温-20,一抗,二抗用封闭液配制.1. 4% PFA（多聚甲醛）室温 固定 15min。2. 1xPBS 洗三次，每次 5min。3. 3%BSA（不加吐温-20）封闭 1hr。 4. 一抗 4 度过夜5. 1xPBS 洗三次，每次 5min。6. 二抗 37 度 2hr。 7. 1xPBS 洗三次，每次 5min。8. DAPI 染色 5min。9. 1xPBS 洗三次，每次 5min。蔺红方法染色：蔺红用的方法封闭液里不加土温 20 。我们模拟这个方法封闭液里加了土温 20。1. 4% PFA（多聚甲醛） 固定 15min。2.
2、 1xPBS 洗三次，每次 5min。3. 0.2% tritonX-100 通透 15min。4. 1xPBS 洗三次，每次 5min。5. 3%BSA 封闭 0.5hr。6. 一抗 4 度过夜。7. 1xPBS 洗三次，每次 5min。8. 二抗 37 度 1hr。9. 1xPBS 洗三次，每次 5min。10. DAPI 染色 5min。11. 1xPBS 洗三次，每次 5min。12. 封片。通透的染色方法: 封闭液: :3%BSA 用 PBS 配制，加千分之一吐温-20一抗，二抗用封闭液配制。1、 细胞铺板，处理2、 弃上清，甲醇-20固定 10min3、 预冷的 1X PBS 冲洗两遍4、 0.2% NP40(PBS 配)室温通透 8min5、 1X PBS 洗 5min X 3 次6、 1%BSA(PBS+1 千分之一的土温 20 配) 室温封闭 40min7、 一抗 4（1%BSA 配制）孵育过夜8、 1X PBS 洗 5min X 3 次9、 二抗（1%BSA 配制）室温避光孵育 1h10、 1X PBS 洗 5min X 3 次，拍照
