1、细胞免疫荧光技术,实验目的,掌握免疫荧光技术的基本原理 熟悉细胞免疫荧光技术的方法 了解在免疫细胞化学技术中如何获得好的实验结果,实验原理,原位检测 抗原抗体特异反应 间接法,间接荧光抗体染色法示意图,Hela细胞,Vinculin,实验用品,试剂： 固定液：4%PFA 细胞通透：0.2%TritonX 封闭试剂：10%正常山羊血清 一抗：小鼠源抗Vinculin单克隆抗体 二抗:Alexa Fluor555标记的山羊抗小鼠IgG DAPI（4,6-二脒基-2-苯基吲哚） PBS洗涤缓冲液：PH7.4,材料： Hela细胞 细胞培养皿仪器： 荧光显微镜,实验步骤,一，细胞制备和细胞固定,实验步
2、骤,二，细胞免疫荧光ICC染色,0.2% TritonX 处理5min,封闭 室温30min,4过夜,371-2小时,375-10min,荧光显微镜观察,实验结果,三，观察,human HeLa cells,实验中应注意的问题,细胞不要铺的过密:60-70%防止细胞污染固定时间不要太长,一般10-30minTrionX处理时间不宜过长，膜蛋白可不必处理选择合适的封闭液二抗孵育后,一定要洗干净必要时用恒温摇床摇洗,1. 免疫荧光技术2. 免疫酶技术3. 免疫亲和技术4. 胶体金技术,标记物使抗体或抗原 抗体复合物在各种显微镜下可见的物质,免疫细胞化学技术,免疫细胞化学技术注意事项,选择合适的方法材料要留好选择抗体选择标记酶封闭液的选择设定对照实验,思考题,检测Hela细胞中蛋白A定位情况，思考应选择什么方法， 用什么仪器观察？,疑难解答,一，缺乏染色,二，高背景,三，细胞/组织的形态被破坏,四，染色不正确,
