1、分类号 单位代码: 学 号: 硕 士 学 位 论 文题 目： BRCA1 基因 rs799917 多态性与肺癌易感性Single-nucleotide polymorphism of BRCA1 rs799917 associated with susceptibility of lung cancer研 究 生： 导 师： 学科专业： 肿瘤放射治疗学 论文课题起止时间： 论文完成时间： 目 录一、摘要中文论著摘要1英文论著摘要3二、英文缩略语6三、论文前言7实验方法.8结果11讨论16结论19四、本研究创新性的自我评价20五、参考文献21六、附录综述.24在学期间科研成绩.31致谢.32个人
2、简介.33中文论著摘要BRCA1 基因 rs799917 多态性与肺癌易感性目 的探讨 BRCA1 基因编码区 rs799917 位点单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism, SNP）与中国辽宁地区汉族人群肺癌易感性的关系。方 法研究对象为辽宁地区汉族人群，并且相互之间无血缘关系。在签署知情同意书后，留取外周血标本，同时完成流行病学调查。采用病例对照研究原则，病例组来自中国医科大学附属第一和第四医院、沈阳军区总医院和辽宁省肿瘤医院的 682 例有明确病理诊断的原发性肺癌患者，其中包括鳞癌 254 例、腺癌226 例、小细胞癌 202 例；对照组来自沈阳军区
3、总医院体检中心的 682 例健康体检人群。所有病例和对照均为 2009 年 9 月至 2012 年 12 月期间收集。参与研究的个体外周血标本采集使用枸橼酸钠抗凝试管，每人采血约5ml，用酚- 氯仿法提取基因组 DNA。采用 Taqman real-time PCR 方法及SDS（美国应用生物系统公司）软件程序进行 SNP 的基因分型。在每个 96 孔检测单元中分别设立阴性对照和重复标本作为质量控制；阴性对照中不加模板DNA，而以蒸馏水代替，用于检验是否存在 PCR 污染。每个 SNP 的信号强度需在两个尺度上满足形成三个明显的簇，随机选择 10%的样本进行盲法重复测量。PCR 反应体系共 5
4、l ，含有 DNA 样本 1.00 l ，2X Taqman Master Mix 2.5l ，20X 引物与探针混合物 0.25l ，蒸馏水 1.25l 。PCR 扩增：95预变性 10min；92变性 30 秒，60退火以及延伸 1 分钟；共 47 个循环。以SDS 软件 Allelic Discrimination 程序进行终点分析，判断待测样本的多态性基因型。 利用 SPSS17.0 软件进行数据整理分析，所有的统计检验均以 p0.05 为有统计学显著性差异。以 2 检验比较病例组与对照组的一般特征；用拟合优度 2检验检验病例组及对照组各基因型是否符合 Hardy-Weinberg 分
5、布平衡情况；以单因素和多因素 logistic 回归计算比值比（odds ratio，OR ）及 95%可信区间（confidence interval，CI） 。结 果BRCA1 rs799917 有三种单体型：G/G、A/G、A/A。其三种基因型分布频率在病例组分别是 47.4 40.7 11.9。在对照组分别是 39.8 46.0 14.2。均符合 Handy-Weinberg 遗传平衡定律（p=0.078, 2=3.090; p=0.66, 2=0.194）。两组行 Logistic 回归计算 p 值、OR 和 95%CI 后发现，携带有A/G、A/A 基因型人群较携带有 G/G 基因
6、型人群患肺癌的风险明显降低（p=0.011, OR=0.745; p=0.036 ,OR=0.699），校正性别、年龄及吸烟状态后，差异仍有意义（p=0.021, OR=0.741; p=0.011, OR=0.610）。合并 A/G、A/A 后，病例组及对照组间差异更加明显（p=0.005, OR=0.734），校正性别、年龄及吸烟状态后，仍有差异（p=0.005, OR=0.709）。将病例按病理类型分层分析发现：鳞癌组在校正吸烟、性别、年龄后，A/A 基因型较 G/G 基因型患肺癌风险降低（p=0.012, OR=0.481），A/G 基因型较 G/G 基因型患肺癌风险降低，但差异无统计
7、学意义（p=0.055 ）。合并 A/G、A/A 后，两组间差异仍明显（p=0.012, OR=0.648）。结 论BRCA1 基因 rs799917 位点多态性与肺癌易感性相关，携带 A 等位基因的个体患肺癌发病风险降低，在鳞癌中这种保护作用更为明显。关键词BRCA1； rs799917；单核苷酸多态性；肺癌英文论著摘要Single-nucleotide polymorphisms of BRCA1 associated with susceptibility of lung cancerObjectiveTo evaluate the association between single
8、nucleotide polymorphism (SNP) of BRCA1 rs799917 and susceptibility of lung cancer of ethnic Han Chinese in Liaoning Province. MethodsAll subjects were Han population in Liaoning Province without any relationship to each other. Each patient signed the informed consent in writing to undergo the diagno
9、stic and therapeutic procedures at the time of hospitalization. The peripheral blood samples were collected right after the signing of the informed consent, and completed epidemiological investigation at the same time. A case control principle was complied in the study. In this study, we recruited a
10、 total of 682 lung cancer patients from The Departments of Radiotherapy of the First Affiliated Hospital of China Medical University, The General Hospital of Shenyang Military Region of Liaoning Province (Shenyang), and The Liaoning Cancer Hospital, from September 2009 to December 2012. All subjects
11、 were histopathologically diagnosed including squamous cell carcinoma (SCC), adenocarcinoma (AD) and small cell lung cancer (SCLC). A total of 694 cancer-free controls were selected from cancer-free population during the same period of The General Hospital of Shenyang Military Region. About 5 mL of
12、blood sample was collected from each patient. DNA was extracted by phenol-chloroform method. We applied the Taqman real-time PCR method and SDS software program to genotype the single nucleotide polymorphism. The TaqMan universal PCR master mix and predesigned SNP-genotyping assay mix which were pur
13、chased from ABI contains PCR primers and probes. In order to ensure the accuracy of genotype results, we contained three positive controls and two negative controls in each 96-well plate. Meanwhile, randomly extracted 10% samples to double-blind repeat test with the meaning of verifying the results,
14、 and obtained the same result. The reaction mix included 2.5 master mix (Applied Biosystems), 1.00 l DNA, 0.25 l probe, and 1.25 l sterile water. PCR conditions consist of an initial denaturing step at 95 for 10 min, then followed by 47 cycles of 92 for 30 sec, 60 for 60 sec eventually with a final
15、extension at 60 for 60 sec. PCR plates were read on an ABI PRIS 7900 instrument (Applied Biosystems).We used SPSS version 17.0 for data analysis, and the criterion for significance was set at p 0.05.The characteristics between cases and controls were assessed by the 2 test ; Hardy-Weinberg equilibri
16、um (HWE) was tested by a goodness-of-fit 2 test; Associations between genotypes and the risk of lung cancer were estimated with computing odds ratio (OR) and 95 % confidence interval (CI) using logistic regression analysis with adjustments for age, gender, and smoking status.ResultThere were three g
17、enotypes in the BRCA1 rs799917 of all participants, and they are respectively wild homozygous G/G, heterozygous A/G and mutant homozygous A/A. Genotypes in the two groups were all in accordance with Hardy-Weinberg equilibrium (p=0.078, 2=3.090; p=0.66, 2=0.194). The distribution frequencies of the B
18、RCA1 rs799917 genotypes were 47.4 for G/G, 40.7for A/G, and 11.9for A/A in the cases, while 39.8for G/G, 46.0 for A/G, and 14.2 for A/A in the controls. Data of the cases and controls were calculated by logistic regression, the frequencies of BRCA1 rs799917 A/G versus G/G and A/A versus G/G among ca
19、ses were significantly different from those among controls (p=0.011, OR=0.745; p= 0.036, OR=0.699). After adjustment for gender, age, and smoking status, the differences were also obvious (p=0.021, OR=0.741; p=0.011, OR=0.610). A/G+A/A genotypes group had even much lower risk than those of G/G (p=0.
20、005, OR=0.734). After adjustment for gender, age, and smoking status, the differences were also obvious (p=0.005, OR=0.709). Analyses were stratified according to pathological type, we found that in squamous cell carcinoma subgroup, the genotype of A/A had the lower risk of lung cancer than those of
21、 G/G (p=0.012, OR=0.481), the genotype of A/G also had the lower risk than G/G, but the difference was not statistically significant (p=0.055). A/G+A/A genotypes group also has the lower risk (p=0.012, OR=0.648). ConclusionThe A allele of rs799917 in BRCA1 was associated with the lower risk of lung
22、cancer of ethnic Han Chinese in Liaoning Province, especially those with squamous cell carcinoma, which identified the A allele as a protective factor for lung cancer.Key wordsBRCA1; rs799917; single-nucleotide polymorphism; lung cancer英文缩略语英文缩写 英文全称 中文全称BRCA1 Breast Cancer Susceptibility Gene 1 人类乳
23、腺癌易感基因 1SNP Single Nucleotide Polymorphism 单核苷酸多态性DNA Deoxyribonucleic acid 脱氧核糖核酸SCC Squamous Cell Carcinoma 鳞状细胞癌AD Adenocarcinoma 腺癌SCLC Small Cell Lung Cancer 小细胞肺癌NSCLC Non-small Cell Lung Cancer 非小细胞肺癌PCR Polymerase Chain Reaction 聚合酶链式反应OR Odds Ratio 比值比CI Confidence Interal 可信区间HRR Homologou
24、s Recombination Repair 同源重组修复NHEJ Non-homologous End Joining 非同源末端连接修复NER Nucleotide Excision Repair 核苷酸切除修复BER Base Excision Repair 碱基切除修复MMR Mismatch Repair 错配修复论文BRCA1 基因 rs799917 多态性与肺癌易感性前 言肺癌作为全球头号癌症杀手，严重影响着人类的生命及健康。最新全球癌症统计显示，肺癌的发病率和死亡率均居首位。2012 年，全球肺癌新增病例约180 万，同期肺癌导致的死亡病例超过 160 万 1。我国是肺癌高发国
25、家，其发病率和死亡率一直呈上升趋势，排在癌症死亡病因第一位。已有流行病学研究明确指出，吸烟和空气污染是造成肺癌发生的重要因素 2,3。因个体间存在差异，致使不同个体对烟草和致癌物的敏感性不同，因而造成肺癌易感性的差异，这种遗传易感性主要表现为单核甘酸多态性（Single Nucleotide Polymorphism，SNP）。研究显示 4,5，SNPs 通过改变人体肿瘤细胞代谢过程，参与细胞增殖、细胞周期控制及凋亡，最终导致肿瘤发生。多种基因 SNPs 位点与肺癌发生相关 68，这进一步证实遗传易感性可不同程度的影响肺癌的发生。人类乳腺癌易感基因 1（breast cancer suscep
26、tibility gene 1,BRCA1）作为一种抑癌基因，参与包括细胞周期调控、基因转录调节、DNA 损伤修复、诱导细胞凋亡、维持基因和蛋白稳定、核转录活性调节等多种生物学功能 912。早期有研究提示 BRCA1 rs799917 位点与乳腺癌及卵巢癌的易感性相关 13,14，但结果并未完全一致 15。近期关于该基因位点与肿瘤发生的关系涉及到多种肿瘤，但对于其与中国人群肺癌易感性的研究甚少。本研究针对中国辽宁地区人群，采用病例-对照研究设计，探讨 BRCA1 基因编码区 rs799917 位点 SNP 与肺癌发病风险的关联，以期寻找人群中肺癌发病可能的遗传病因，为肺癌的一级预防提供科学依据
27、。实验方法一、研究对象所有研究对象为相互间无血缘关系的辽宁地区汉族人群。在签署知情同意书后，留取外周血标本，同时完成流行病学调查。采用病例对照原则，病例组为来自中国医科大学附属第一和第四医院、沈阳军区总医院和辽宁省肿瘤医院的 682 例有明确病理诊断的原发性肺癌患者，其中鳞癌 254 例、腺癌 226 例、小细胞肺癌 202 例。同期收集沈阳军区总医院体检健康人群 694 例，无肺癌病史，无肺癌家族史和其他肿瘤病史。所有病例和对照人群均为 2009 年 9 月至2012 年 12 月期间所收集。二、研究方法（一）调查方法采用统一制定的调查表，由两名培训的调查员对病例及对照组进行流行病学调查，调
28、查内容包括每个研究对象详细的人口学资料、性别、发病年龄、吸烟史、家族患癌史、职业史、组织类型。非吸烟者指终生吸烟少于 100 支的个体。所有调查资料经过反复检查、核对和编码后，用 Excel 软件进行数据录入。所有参与研究的个体外周血标本采集使用枸橼酸钠抗凝试管，每人采血约5ml，在-80的冰箱中冻存。（二）实验方法基因组 DNA 提取采用酚-氯仿法，提取后测 OD 值确定 DNA 的原始浓度，再倍比稀释到 30100ng/l 的终浓度备用。采用 Taqman real-time PCR 方法进行SNP 的基因分型。1、主要试剂和仪器红细胞裂解液（3.85g NH4Cl+0.42g NaHCO
29、3 加双蒸水至 500ml） ；核悬浮液(75mM NaCI 、24mM pH8.0 EDTA)；TE 缓冲液(l0mM pH7.5 Tris-HCI 、lmM pH8.0 EDTA)；PCR Taqman 探针及引物(美国应用生物系统公司)；Taqman Master Mix(美国应用生物系统公司)；Eppendorf BioPhotometer 核酸蛋白测定仪(德国 Eppendoff 公司)；低温离心机(德国 Sigma 公司)；移液器(法国 Gilson 公司)；96 孔板及盖膜(美国应用生物系统公司)；ABI 7500 荧光定量 PCR 仪 (美国应用生物系统公司)。2、酚-氯仿法提
30、取基因组 DNA 步骤1ml抗凝血加4倍体积红细胞裂解液，震荡，静置30min2500rpm离心10min，弃上清加2ml红细胞裂解液，震荡，静置30min2500rpm离心10min，弃上清在沉淀中加入lml含0.5%SDS 的核悬浮液和10l 20mg/ml蛋白酶K，混匀后 37水浴震荡过夜（至白细胞团块消失、透明）取出加入lml平衡酚，缓慢震荡10min，3000rpm离心10min，取上清液，重复1次上清液中加等体积氯仿与异戊醇混合液(24:l)，缓慢震荡 10min，3000rpm离心10min，取上清，重复1次上清液中加入4M氯化钠10l ，再加入2倍体积的冷无水乙醇， 12000
31、rpm离心2min，弃上清加入75%乙醇约200l清洗 30分钟，12000rpm离心10min，弃上清，重复3次弃上清后自然干燥干燥后产物加入TE 缓冲液100l 溶解，测定浓度和纯度， -80保存3、SNP Taqman基因分型（1）探针信息：表 1，所测 SNP 的探针引物标记及序列信息BRCA1 标记 Rs799917 5dye 3dye 等位基因 引物序列探针 1 VIC MGB A探针 2 FAM G引物 TTCTGCATTTCCTGGATTTGAAAACA/GGAGCAAATGACTGGCGCTTTGAAAC（2）PCR 反应体系（5l real-time PCR 体系）：表 2
32、，PCR 反应体系内容2X Taqman Master Mix 2.5l 20X 引物与探针混合物 0.25l 蒸馏水 1.25l DNA 样本 1.00l 总计 5.00l （3）PCR 扩增：在 ABI 7500 荧光定量 PCR 仪上进行 PCR 反应及荧光信号读取。扩增条件为： 95预变性 10min；92变性 30 秒，60退火以及延伸 1 分钟；共 47 个循环。（4）基因型鉴定：以 SDS（美国应用生物系统公司）软件 Allelic Discrimination 程序进行终点分析，通过检测不同等位基因所标记的 FAM 和 VIC 荧光强度，判断待测样本的多态性基因型。4、质量控制
33、流行病学调查质量控制：所有调查员都接受为期一周的的标准化培训：使用统一的简明易懂的调查表；流行病学学科专家监督指导；随机抽取 10%的样本二重调查，并与原始记录核对；随机抽取 10%的病历，检查其完整性和准确性；编制编码手册，以检验调查表编码情况并评价数据录入工作；记录调查过程中遇到的所有问题；为减少误差，对病例和对照的调查工作在报告后 2 个月内完成；编制包含详细的收集、分析、保存和运输等内容的手册。实验室质量控制：在每个 96 孔检测单元中分别设立阴性对照和重复标本作为质量控制；阴性对照中不加模板 DNA，而以双蒸水代替，用于检验是否存在PCR 污染。每个 SNP 的信号强度需在两个尺度上
34、满足形成三个明显的簇，由美国应用生物系统公司的 SDS 软件完成。进行基因分型时实验者对于标本的病例或对照状态未知。随机选择 10%的样本进行盲法重复测量。5、统计学分析利用SPSS17.0软件进行数据整理分析，所有的统计检验均以p0.05为有统计学显著性差异。以 2检验检查比较人口学特征、相关危险因素暴露及SNP基因型在病例与对照之间分布的差异；以拟合优度 2检验检查Hardy-Weinberg分布平衡情况；以单因素和多因素logistic回归计算比值比（odds ratio，OR ）及95%可信区间（confidence interval，CI） 。为了减少环境因素的可能干扰，p值，OR值
35、和95%CI用多因素logistic回归计算。结 果一、ABI 7500 real-time PCR 基因型检测结果图1，三种不同基因型经Taqman PCR扩增的结果图1显示的是纯合子VIC、纯合子FAM和杂合子所代表的基因型经PCR扩增后的扩增曲线。绿色扩增曲线为VIC标记的纯合子基因型，蓝色扩增曲线为FAM标记的纯合子基因型，蓝绿色扩增曲线为杂合子基因型。图2显示的是经SDS软件分析后的分型结果：纵坐标代表G，横坐标为A，左上部分蓝色小点显示G/G纯合子个体，右下部分红色小点为 A/A纯合子个体，中间部分绿色小点为A/G杂合子个体，左下脚黑方块为阴性对照，黑色小叉表示分型失败的标本。图
36、2，96 孔 Taqman 基因型检测结果显示二、研究病例和对照组的一般特征本研究中病例组与对照组的一般特征见表 3。列入研究共 682 例肺癌患者，其中鳞癌 254 例（37.3%） 、腺癌 226 例（33.1%） 、小细胞癌 202 例（29.6%） ，以及 694 例健康对照。病例组平均年龄为 58.96 岁，与对照组平均年龄 58.54 岁无明显统计学差异(p=0.462) ，但在性别及吸烟状态上，两组间差异明显（p0.001） ，病例组男性占 71.8%，明显高于对照组男性比例；病例组吸烟占58.4% ，亦明显高于对照组吸烟状态。这种分布符合肺癌的流行病学分布规律。表 3，病例组和
37、对照组的一般特征特征 病例（n=682） 对照（n=694） p 平均年龄标准差 58.9610.064 58.5410.881 0.462性别 0.001男性（%）女性（%）490（71.8）192（28.2）375（54.0）319（46.0）吸烟状态 0.001吸烟（%） 398（58.4） 106（15.3）非吸烟（%） 284（41.6） 588（84.7）病理类型 鳞癌（%） 254（37.3）腺癌（%） 226（33.1）小细胞癌（%） 202（29.6）计算 p 值用 2 检验；三、BRCA1基因多态性与肺癌发病风险1、BRCA1基因rs799917SNP在病例组与对照组的基因
38、分布BRCA1基因rs799917SNP基因型分布频率见表4。G/G、A/G、A/A基因型分布频率在病例组分别是47.4 40.7 11.9，在对照组分别是39.8 46.0 14.2。均符合Handy-Weinberg遗传平衡定律（ p =0.078, 2=3.090; p =0.66, 2 =0.194) 。两组行Logistic回归计算 p值、OR和95%CI后发现，携带有A/G、A/A基因型人群较携带有G/G基因型人群患肺癌的风险明显降低（ p =0.011, OR=0.745; p=0.036, OR=0.699），校正性别、年龄及吸烟状态后，差异仍有意义（ p =0.021 , O
39、R=0.741; p =0.011, OR=0.610）。合并A/G、A/A后，病例组及对照组间差异更加明显（ p=0.005, OR=0.734），校正性别、年龄及吸烟状态后，差异仍非常明显（ p=0.005, OR=0.709）。表 4，BRCA1- rs799917 基因多态性与肺癌易感性基因分型 病例组n(%)对照组n(%)OR(95%CI)p OR(95%CI)apa2、BRCA1基因rs799917 SNP在不同的肺癌病理类型间分布将病例按病理类型进行分层分析并调整年龄、性别及吸烟状态后发现（表5），鳞癌组中，A/A基因型较G/G基因型患肺癌风险降低（ p=0.012, OR=0.
40、481），A/G基因型较G/G基因型患肺癌风险有降低趋势，但差异无统计学意义（ p=0.055）。合并A/G、A/A后，两组间差异仍明显（ p=0.012, OR=0.648）。其他病理类型各基因型间未发现明显差异。G/G 323(47.4) 276(39.8) 1.0(ref.) 1.0(ref.)A/G 278(40.7) 319(46.0) 0.745(0.5930.935)0.011 0.741(0.5750.956)0.021A/A 81(11.9) 99(14.2) 0.699(0.5000.977)0.036 0.610(0.4180.892)0.011A/G+A/A 359(5
41、2.6) 418(60.2) 0.734(0.5930.909)0.005 0.709(0.5580.901)0.005计算 p 值、OR 值及 95%CI 用 Logictic 回归;a 调整年龄、性别及吸烟状态。表 5，不同病理类型基因型频率与肺癌易感性的关系病理 Casesn(%) controlsn(%) OR(95%CI)a pa鳞癌G/G 125(49.2) 276(39.8) 1.0 (ref.)A/G 105(41.3) 319(46.0) 0.702(0.8022.503) 0.055A/A 24(9.5) 99(14.2) 0.481(0.2720.849) 0.012A/
42、G+A/A 129(50.8) 418(60.2) 0.648(0.4610.911) 0.012腺癌G/G 104(46.0) 276(39.8) 1.0 (ref.)A/G 91(40.3) 319(46.0) 0.811(0.5771.141) 0.229A/A 31(13.7) 99(14.2) 0.801(0.4911.304) 0.371A/G+G/G 122(54.0) 418(60.2) 0.809(0.5881.112) 0.191小细胞癌讨 论BRCA1(breast cancer susceptibility gene 1)全称人类乳腺癌易感基因1，为一种抑癌基因。199
43、0 年 Hall 研究组通过基因连锁分析将其定位在 17q12-21 区,1992 年该基因被命名为 BRCA116。1994 年 Miki 等采用定位克隆的方法首次将其分离出来，并发表了该基因的全部序列 17。BRCA1 基因定位于第 17染色体 q21 上，全长为 117 kb，含 24 个外显子， 22 个内含子，在这 24 个外显子中 22 个为编码的外显子，外显子 1 和 4 为非编码序列 1823。BRCA1 基因编码一个含 1863 个氨基酸，分子量为 220 kDa 的大分子功能蛋白 24。研究发现，BRCA1 基因参与多种生物学功能，同时作为肿瘤抑制基因，BRCA1 从多层次
44、、多水平上通过多条信号转导途径，在肿瘤的发生、发展、转移和放化疗中都起着重要的调节作用 912。BRCA1 通过其的转录调节、磷酸化、泛素化等功能，与Cyclin B、 P21、GADD45、Chk2、Rb、Chk1、14-3-3 等分子作用来调控细胞周期进程；DNA 损伤修复包括基因同源重组修复(HRR)、非同源末端连接修复(NHEJ)、核苷酸切除修复（NER)、碱基切除修复(BER)和错配修复(MMR)。研究表明,BRCA1 通过与其 DNA 损伤相关基因如ATM、ATR、RAD51、RAD50、MRE11、NBS1、BRCA2 等相互作用在 HRR、NHEJ 和NER 中都发挥着十分重要
45、的作用 25,26。BRCA1 还可以通过与 MAPK4、c-Jun、Fas、Caspase-9 等作用来调节细胞凋亡。BRCA1 可与微管蛋白相互作用而定位在中心体上，这表明 BRCA1 在有丝分裂复制的染色体精确分离的过程中起着直接的作用，从而在细胞周期检验点的调控中起着重要的作用 27。BRCA1 还通过与其他 DNA 修复因子之间直接的相互作用,或通过调控通路中其它基因的表达水平来介导 DNA 损伤修复28。另外，BRCA1 还可以通过调节血管形成素-1（angiopoietin-1, ANG1） 、碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast G/G 94(46.5) 2
46、76(39.8) 1.0 (ref.)A/G 82(40.6) 319(46.0) 0.775(0.5301.133) 0.188A/A 26(12.9) 99(14.2) 0.618(0.3531.080) 0.091A/G+A/A 108(53.5) 418(60.2) 0.733(0.5141.047) 0.088计算 p 值、OR 值及 95%CI 用 Logictic 回归;a 调整年龄、性别及吸烟状态。growth factor, GF） 、雌激素受体（estrogen receptor, ER）等参与血管形成的调节。有研究发现，BRCA1 蛋白 BRCT 结构域突变，使其结合其他
47、磷酸化蛋白能力丧失，引起了基因组失稳，进而最终导致了肿瘤形成 29。有关 BRCAl 与肺癌关系的研究多集中在 mRNA 的表达对肺癌化疗及预后等的影响，研究报道 BRCAl 基因的高表达可能预示着铂类疗效差或耐药 30,31。2004年 Miquel Taron32等在非小细胞肺癌(NSCLC)中首次报道 BRCA1 低表达者对吉西他滨/顺铂化疗较为敏感,中位生存期(37.8 个月)长,而高表达者对铂类化疗的敏感性较差,进而提出 BRCA1 高表达是 NSCLC 预后差的标志。姜然 28在研究BRCA1 在非小细胞肺癌中的表达情况时发现，BRCA1 在非小细胞肺癌组织中的表达明显高于癌旁组织
48、。2011 年张慧文 33等采用脂质转染实验，首次发现 BRCA1表达水平与肺癌细胞的放射敏感性有着密切的关系，改变 BRCA1 的表达水平可以明显影响肺癌细胞的放射治疗敏感性。研究显示 6,7，SNPs 通过改变人体肿瘤细胞代谢过程，参与细胞增殖、细胞周期控制及凋亡，最终导致肿瘤发生。多种基因 SNPs 位点与肺癌发生相关810，这进一步证实遗传易感性可不同程度的影响肺癌的发生。BRCA1 基因编码区的 rs799917 多态性位点存在非同义氨基酸改变，等位基因 C 变为 T 后可导致第 871 位氨基酸由脯氨酸转变为亮氨酸 34，可能会引起相应生理功能的改变,但具体机制及功能变化目前并未明确。早期有研究提示 BRCA1 基因 rs799917 多态性位点与乳腺癌及卵巢癌的易感性相关 13,14，但结果并未完全一致 15。近期关于该位点的研究涉及到多种肿瘤，Xiaoyi Zhou35等研究该位点与中国女性宫颈癌易感性时发现，TT 基因型较 CT/CC 基因型患病风险降低。Jeffrey S Chang34等在研究该位点与白种人多形性胶质细胞瘤易感性时发现，TT 基因型较 CC 基因型患病风险降低。Xiaojiao Zhang36等在研究中国食管鳞癌易感性时发现，rs799917 位点 CC 基因型较 TT 基因型患病风险增加，且与 m
