1、毕业论文题目：阿司匹林联合氯吡格雷抑制兔动脉粥样2硬化目录一、中文摘要 。 4二、英文摘要 。 4三、正文 。 531 材料 。 52 实验方法 。 52.1 动物分组与建模 。 52.2 血清血脂与 CRP 的含量测定 。 52.3 病理形学观察 。 62.4 免疫组织化学检查 。 62.5 统计学处理 。 63 结果 。 63.1 各组血脂变化 。 73.2 各组 CRP 浓度的变化 。 73.3 病理形态学改变 。 73.4 免疫组织化学分析 。 84 实验结果讨论 。 8四、参考文献 。 94五、综述 。 9阿司匹林联合氯吡格雷抑制兔动脉粥样硬化 。 9综述参考文献 。 12六、致谢.
2、阿司匹林联合氯吡格雷抑制兔动脉粥样硬化中文摘要摘要：目的 研究阿司匹林和氯吡格雷两药连用对兔的动脉粥样硬化的治疗作用。方法 将 5 只体重相近，健康的雄鼠随机分为 5 组，分别是空白对照组（9 只），模型对照组（10），阿司匹林组（10只），氯吡格雷组（10 只），两药联用组（10 只）。后面四组给予高胆固醇饲料喂养，对照组给予等量普通饲料喂养。测定血清血脂和 C 反应蛋白（CPR）的浓度,观察主动脉组织病历形态并定量分析病变的程度。用免疫组织化学的方法测定斑块组织巨噬细胞的含量。实验结果表明，阿司匹林和氯吡格雷都能够减低总胆固醇，甘油三酯含量，从而减轻兔动脉粥样硬化的症状，减低巨噬阳性细胞的
3、百分含量，而两者联合用药抑制动脉粥样硬化作用明显增强（P0.05)。实验结论，阿司匹林和氯吡格雷联合用药对抑制兔动脉粥样硬化具有很好的疗效。 关键词：阿司匹林、氯吡格雷、粥样动脉硬化 5Aspirin combined with clopidogrel inhibits atherosclerosis in rabbits Abstract:Objective To study the effects of the combination of aspirin and clopidogrel on the progress of aortic atherosclerosis.Methods 5
4、 similar weight,healthy male rabbits were randomlydivided in to 5 groups:Blank control group(9 rabbits) 、no drug therapy group(10 rabbits)、aspirin group(10 rabbits)、clopidogrel group(10 rabbits)、the two drug combination group(10 rabbits).last four groups were given high cholesterol diet ,the blank c
5、ontrol goup were treated with normal diet.Detecting blood lipids and C serum C-reactive protein(CPR) concentration,The morphology of aortic tissue was observed and the degree of pathological changes was 6analyzed quantitatively.Immunohistochemical method was used to determine the content of macoroph
6、age in plaque tissue.the results of experiment Show that both aspirin and clopidogrel can reduce total cholesterol and triglyceride levels,thereby reducing the symptoms of atherosclerosis in rabbits .Reduce macrophage percentage of positive cells ,while the combination of the two drugs inhibit ather
7、osclerosis inceased significantly(P0.05）.The experimental results show that the combination of aspirin and clopidogrel has a good effect on inhibiting atherosclerosisi in rabbits.Key words:aspirin、clopidogrel、atherosclerosis冠状动脉发生粥样硬化时，斑块组织破裂，胶原蛋白流出，血小板被激活而聚集粘黏，进而形成血栓 1。阿司匹林和氯吡格雷是临床上常见的抗血小板药物，是治疗缺血性
8、脑卒的常用治疗药物 2。氯吡格雷作为急性冠脉综合征支架术后重要药物,可降低血管壁的厚度，减轻炎症，降低心血管疾病 3。以往临床上常常采用单药如阿司匹林或者氯吡格雷等抗血小板药物治疗，有研究报道表明，阿司匹林与氯吡格雷联合使用治疗缺血性脑血管病比单剂使用某一抗血小板药的疗效要好 4。随着研究的深入，采用两种不同的抗血小板药物联合使用治疗动脉粥样硬化病症越来越受到研究者的关注 5。本研究旨在研究阿司匹林与氯吡格雷联用对抑制兔动脉粥样硬化的疗效。1材料7胆固醇（上海晶纯实业有限公司），甘油氯吡格雷（武汉大华伟业医药化工集团），阿司匹林（无锡阿斯特拉公司），血脂测定试剂盒（上海名典生物工程公司），血清
9、 C 反应蛋白（CRP）测定试剂盒（Sigma 公司），巨噬细胞单克隆抗体 RAM11（Denmark 公司），大鼠平滑肌肌动蛋白单克隆抗体1A4（sigma 公司），免疫组织化学 Power VisionTM-PV6002 试剂盒（Power Vision,USA）,牛血清蛋白（中国科学院新疆化学所生化试剂厂）。2 实验方法2.1动物分组与建模49 只雄性新西兰白兔（约两个月大，体重约 1.8-2.4kg,湖北中医药大学实验动物中心提供），将兔子分为五组：（1）空白对照组（9 只），（2）模型对照组（10 只），（3）阿司匹林组（10 只，12mg/(kg.d），（4）氯吡格雷组（10只，4
10、mg/(kg.d)）（5）联合用药组（10 只,氯吡格雷 4mg/(kg.d)和阿司匹林12mg/(kg.d)）。注意：阿司匹林和氯吡格雷都通过灌胃给药，第一组和第二组则用等量的蒸馏水灌胃。第一组喂养普通饲料，后四组每只兔子均用高胆固醇饲料(基础饲料+3%甘油+2%胆固醇)喂养，每只 100g 连续喂养 12 周。喂养 2 天后，以 240mg/kg 静脉注射 9.5%的牛血清蛋白，每周一次，注射三次。每周测定一次体重，共测定 12 次。2.2血清血脂和 CRP的含量测定分别在实验前（第 0 周）、处死动物前（第 12 周）经兔子耳缘静脉腹腔取血。用酶学法分别测定血清总胆固醇（TC）、甘油三酯
11、（TG）和高密度蛋白脂胆固醇（HDLC）的浓度。采用 Friedewald 公式 ”低密度脂蛋白胆固醇LDLC(mmol/L)=TC-HDLC-TG/2.2” 从而算出 LDLC 的浓度。在第 20 周末，取静脉血利用固相酶联免疫吸附法测定测定血清 CRP 含量。2.3病理形态学观察在 12 周末用气体栓塞法处死兔子，并且在无菌条件下取出动物的主动脉，剥离主动脉外模，用 10%甲醛溶液浸泡固定后用苏丹 III 染色，用”天地病理、细胞图像分析系统(Version1.0)”测定斑块面积和内膜总面积，计算斑块/内膜面积比。将动脉粥样硬化最明显的部分用常规石蜡包埋，将主动脉分为 5 段，分别制成 5
12、m 切片，用苏木素-伊红（HE）和 Weigert 氏弹力-Van Gieson 氏（ET+VG）染色，用相同的图像分析软件测定内膜厚度、中膜厚度，计算内膜/中膜厚度比。将最后两段组主动脉组织的数据算出平均值，每组随机取两个动8物主动脉上端组织放入 6%的戊二醛溶液中固定，利用扫描和透视电镜（日本）观察主动脉组织的超微结构并判断出结构的改变。2.4免疫组织化学检查取主动脉弓远端主动脉 5mm 标本连续切片，每个标本取切片三张，总厚度为4m，采用 EnVision 法进行免疫组织化学染色，苏木精复染，中性树胶封片。细胞类型的鉴定用小鼠抗兔-巨噬细胞单克隆抗体（RAM11，稀释度为 1:25），小
13、鼠平滑肌肌动蛋白单克隆抗体（1A4 稀释度为 1:300），设 PBS 代替一抗作为阴性对照，用抗-鼠 COX-2 多克隆抗体（稀释度 1:400）来检测 COX-2 的表达，棕黄色产物为阳性染色。在 200 倍镜下随机取 4-6 个视野，采用天地病理、细胞图像分析系统 TD2000(version1.0),算出阳性细胞百分率，重复操作两次，最后结果取平均值。2.5统计学处理采用 SPSS10.0 软件包建立数据库进行分析，计量数据都以均数 标准差卤（xs ）表示，多组间比较用方差分析两组间比较用 t 检验， P0.05），组 5 与组 3，组 4 相比，有使血清中 CRP 浓度进一步降低的趋
14、势。3.3病理形态学改变通过光镜观察发现，空白对照组的主动脉内膜光滑完整，无脂紋，泡沫细胞和斑块，形态完整。模型对照组内膜增厚最明显，可见很明显的脂质浸润和斑块形成，大部分斑块粗厚，有许多泡沫细胞，且主动脉内膜呈间断性丘状或新月型隆起，严重者内膜下层泡沫细胞聚沉，内弹力板和中膜弹力板变性崩解，即为动脉粥样硬化的标志。阿司匹林组合氯吡格雷组的斑块有所减轻，泡沫细胞数量也减少了。两药联用组的症状最轻泡沫细胞的数量和斑块的形成明显减轻，上述形态学的改变明显减少。后三组的斑块与内膜面积比、内膜厚度（P0.05）.4 实验结果讨论 实验通过建立相同的高胆固醇饮食合并免疫损伤诱导兔动脉粥样硬化模型6，选用
15、环氧化酶抑制剂阿司匹林和二磷酸腺苷受体拮抗剂氯吡格雷作为实验的抗血小板药物，因为阿司匹林治疗动脉粥样硬化可能与能减轻斑块的炎症有关 7，而且唐熠达 8等研究不同剂量阿司匹林对兔动脉粥样硬化斑块抑制作用时发现中剂量的阿司匹林（12mg/(kg.d)）治疗的性价比最高。动另外氯吡格雷对血管壁内皮具有保护作用 10，故本研究以有无抗血小板药物治疗以及抗血小板药物的联合用药治疗作为多重对比来探究抗血小板药物治疗动脉粥硬化的疗效研究，因此实验探究阿司匹林与氯吡格合用对动脉粥样硬化的抑制作用是否较两种药单独使用效果要好。 11实验结果对比观察显示，氯吡格雷与等量的阿司匹林减小斑块面积，抑制内膜增生的作用相
16、当，但两药联用后对这些病理形态学症状明显减轻了，免疫组织化学结果显示，阿司匹林、氯吡格雷及两药联用都能使斑块中巨噬细胞减少，说明抗血小板药物通过抑制巨噬细胞转移与增值来减轻局部炎症反应 11。并且根据研究表明，抗血小板药物治疗动脉粥样硬化疾病的机制可能与抑制血小板的增殖与扩散、减轻斑块的局部炎症等作用有关 12。而从表 1 的数据可知，氯吡格雷组、阿司匹林组及两药联用组与空白对照组在相同时间血清TG、TC、LDLC 的数值均差不多，因此说明阿司匹林与氯吡格雷抑制动脉粥样硬化的机制与血脂的水平无关。本实验结果也显示，阿司匹林与氯吡格雷都能使CRP 浓度减低，且两药联用能使 CRP 浓度进一步降低
17、。综上实验，阿司匹林与氯吡格雷可分别通过影响花生四烯酸和 ADP 的代谢来抑制血小板的聚集两者联合应用可以起到双重疗效，加强抑制斑炎症的作用。因此由实验研究表明，阿司匹林与氯吡格雷的连用为更好的治疗动脉粥样硬化疾病提供了新的思路，不仅克服了单剂用药的缺点，同时在治疗上具有更高疗效，临床治疗安全性的优点。12参考文献 1 HuoYQ,SchoberA,Forlow13SB.etal.Circulatingactivatedplateletse14xacerbateatherosclerosisinmicedefic15ientinapolipoproteinEJ.NatMed,2003,9(1)
18、:1661-67.2 中华医学会神经病学分会脑血管脑血管病学组缺血性脑卒中二级预防指17南撰写组.中国缺血性脑卒中和短暂性脑缺血发作二级预防指南2010J.中华神经科杂志182010,43（2）:154-160.3 Larsson PT,Hallerstam S,Rosfors S,et al.Circulating markers of in flammation related to carotid artery atheroscierosisJ.Int Angiol,2005,24(1):43-51.4 曹立梅，陈旭，董志强.缺血性脑血管病二级预防19抗栓药物分析J.中华老年心血管病杂志
19、，2010,12（9）：823-825.5 王宝，李20玉骞，高波氯，等.氯吡格雷联合阿司匹林治疗急性脑梗死的用药方法及疗效J.中国实用神经疾21病杂志，2013,16(19):59-60.6刘毅，李志樑，雷霄，等.兔腹主动脉粥样硬化模型的建立22及评估方式J.南方医科大学学报，2009,29（9）:1874-1877.7 姜昕，左彦23方，王启章，等.阿司匹林对兔动脉粥样硬化及其炎症过程的影响J.华中科技大学学报，2008,424（486）:487-489.8 唐熠达，阮英茆，陈纪林，等.不同剂量阿司匹林对兔动脉粥样25硬化斑块进展的抑制作用J.中华心血管病杂志，2003,31（8）:609
20、-618.9 26周游，孙伏喜，吴伟.氯吡格雷对动脉粥样硬化兔血管内皮细胞功能的影响J.航空航天医药，202709,20（12）:34-35.10 张峻，陈纪林，顾晴，等.抗血小板药物抑制动脉粥样硬化进28展及机制研究J.中国循环杂志，2005,20（6）:463-468.11 马双喜，郑智慧，郭莉莉.阿司匹林联合氯吡格雷治疗缺血性脑血管病的疗效及安全性J.黑龙江医学，2016,40（1）:46-47.12 唐熠达，陈纪林，阮英茆，等.阿司匹林抑制动脉粥样硬化炎症反应、斑块进展及内膜增生作用.中国循环杂志，2002,17 增刊:40-43.29综述 阿司匹林联合氯吡格雷抑制动脉粥样硬化摘要：动
21、脉粥样硬化疾病是人们密切关注常见疾病之一，血小板在其中发挥着重要的作用，因此治疗动脉粥样硬化的前提和基础是如何发挥抗血小板的作用。目前抗血小板药物的种类非常多，其中阿司匹林和氯吡格雷是常用的抗血小板药物，效果也不错，但是单剂的抗血小板药物使用时总有一些缺点，比如有些患者产生阿司匹林抵抗的现象。为了提高疗效，许多研究者将几种不同的抗血小板药物联用从而弥补单剂的不足，其中由于阿司匹林与氯吡格雷联用治疗动脉粥样硬化的疗效非常好，且降低了心血管疾病的复发率，因此成为了成了研究人员关注的焦点。因此本文就阿司匹林与氯吡格雷联用治疗动脉粥样硬化的研究就以综述。关键词：阿司匹林；氯吡格雷；动脉粥样硬化口服的抗
22、血小板药物是治疗动脉粥样硬化疾病的重要，其中阿司匹林和氯吡格是临床上常见的抗血小板药物，为了提高抑制动脉粥样硬化的疗效，常常将不同的抗血小板药物联用，有研究表明阿司匹林联合氯吡格雷的使用呢能够显著降低心血管疾病发生的概率与风险 1。近些年来一系列研究表明联合使用不同抗血小板药物疗效比单独使用一种抗血小板药物要高的多，虽然阿司匹林对急性缺血疾病的效果很好，但是单剂使用时阿司匹林出现抵抗现象是该药的一个重要不良反应 2。有研究表明就算不断加阿司匹林的剂量，阿司匹林抵抗的现象依然会在三分之一的患者身上出现 3。因此许多研究人员就研究阿司匹林与氯吡格雷的联用其疗效是否优于单独使用抗血小板药物。1动脉粥
23、样硬化形成的病因 由于给动物喂食高胆固醇的食物可引起动物内皮细胞的损伤，使内皮细胞产生的 NO 含量降低，血管舒张能力受阻，加快了血小板的凝聚，从而促进了斑块组织的形成。 研究表明，动脉粥样硬化斑块组织的形成与炎症的发展有密切的联系 4.动脉粥样化的病理表现为炎症部位的炎性细胞浸润和组织细胞的大量增生。绝大部分炎性细胞是巨噬细胞，巨噬细胞粘黏在损伤部位的内膜并吞噬脂质，形成泡沫细胞 5。促进血小板与白细胞聚集能促使动脉粥样硬化的恶化，因此动脉粥样硬化是一种涉及循环血小板，白细胞与血管壁上各种细胞相互作用的一种疾病 6。当血管内皮的结构与生理功能健全时，能够很好地抵御局部30炎症因子以及血栓的形
24、成，而高血脂、高血压、感染等疾病因素能够导致血管内皮的损伤，进而内皮组织破裂暴露，使血管舒张障碍，从而血小板开始活化，进一步粘黏聚集，而聚集额血小板可以损伤血管壁，从而导致炎症的形成 7。动脉粥样硬化是一个逐渐加重的过程，由于动脉血管内膜下脂质聚沉，形成脂肪条纹，进而纤维组织增生，形成纤维斑块。因此内膜壁增厚，内腔半径减少，内膜皮层受损发生炎症，临床上即出现心绞痛、短暂性缺血等一系列症状8。2抗血小板药物抑制动脉粥样硬化的作用机制随着人们对血小板影响动脉粥样硬化的机制研究的深入，抗血小板药物治疗动脉粥样硬化有多种不同的作用机制，如抑制血小板凝聚，减轻和稳定斑块，抑制血栓的形成等，以下就将常用的
25、几种不同抗血小板药物简单介绍。2.1影响花生四烯酸代谢的药物阿司匹林是非选择性的环氧化酶抑制剂，是一种十分传统并且常见的抗血小板药物，阿司匹林在体内存在环氧化酶-1（COX-1）和环氧化酶-2(COX-2)两种类型的酶，其中 COX-1 分布于血小板中，而 COX-2 则广泛分布于血管内皮细胞、血小板、平滑肌细胞等部位 9。两者均能不可逆抑制前列腺素环氧化酶来抑制血小板内血栓素 A2(TXA2)的合成与分泌，从而抑制血小板的聚集功能，发挥抗血栓，抗血小板活化的作用 10，但是由于阿司匹林对 COX-1 的抑制作用是COX-2 的 170 倍，因此阿司匹林的抗血小板作用主要是取决于环氧化酶-1。
26、2.2影响血小板膜的药物阿司匹林和氯吡格雷都是常用的抗血小板聚集药物但两种药的抗凝机制不同。氯吡格雷是噻吩吡啶类抗血小板药物，它的抗血小板机理是氯吡格雷与血小板膜表面的二磷酸腺苷结合(ADP),通过选择性抑制血小板受体与 ADP 结合,以及抑制继发的 ADP 介导的糖蛋白 GPIIb/IIIa 复合物的活化，从而有效的抗血小板的聚集 11。同时也有研究表明，氯吡格雷能够一直炎症组织斑块，减缓动脉粥样硬化形成的过程 12。2.3影响血小板核苷代谢药物潘丁生是比较早的一种抗血小板药物，实验研究表明潘丁生能够抑制血小板磷酸二脂酶，抑制血小板吸收腺苷，从而起到抑制血小板凝聚的作用。3阿司匹林与氯吡格雷的联用综上所述，阿司匹林、氯吡格雷等抗血小板药物都具有良好的抗炎和稳定斑块的作用，能够减轻血管硬化、从而减轻动脉粥样硬化的症状。 两种药抗凝机
