1、实验六 稀释平板计数及霉菌、酵母菌的分离与鉴定,一、目的要求学习了解稀释平板计数法的作用、原理和方法，并结合测定酱油中微生物总数和葡萄、面包中霉菌的分离计数。强调微生物的无菌操作技术及无菌室的无菌的检测方法。 二、基本原理单个微生物细胞于适宜的条件下能在固体培养基上形成一个肉眼可见的子细胞群体即菌落，一般来说，一个独立的菌落是由一个单细胞微生物繁殖而成。该实验就是根据这一生理特性而设计的。三、器具材料（见教材P62）,四、操作方法1. 样本稀释液的制备 （选择适当的稀释度）2. 平板接种培养（1）平板混合培养法（测定酱油中细菌总数，稀释度采用10-1、 10-2、 10-3 ）；（2）平板涂抹
2、计数法（分离或计算霉米中霉菌数，稀释度采用10-1、 10-2、 10-3）。3. 结果计算 （1） 每毫升中菌落形成单位（cfu）=同一稀释度 3 次重复的平均菌落数X稀释倍数 （2） 每毫升中菌落形成单位（cfu）=同一稀释度 3 次重复的平均菌落数X稀释倍数 X10 4. 无菌操作技术及无菌室的无菌的检测和空气中微生物的检测 （每种培养基每人一皿）,25g/mL 样品,225mL无菌生理盐水,每管9mL无菌生理盐水,琼脂培养基,每皿15mL,-2,-3,-4,-5,-6,-6,-6,-6,1mL,1mL,1mL,1mL,1mL,1mL,混合平板培养法,-1,37培养48h观察结果,25g
3、/mL 样品,225mL无菌生理盐水,每管9mL无菌生理盐水,琼脂培养基,每皿20mL,-2,-3,-4,-5,-6,1mL,1mL,1mL,1mL,1mL,0.1mL,0.1mL,涂抹平板计数法,-1,28培养3d 观察结果,无菌室和实验室空气污染情况的检验,将牛肉膏琼脂和马铃薯蔗糖琼脂倒平板,冷却待用(每人每种一个)。 无菌室内进行空气中杂菌的检验，可在使用前或使用后进行，方法是：取牛肉膏琼脂和马铃薯蔗糖琼脂两种培养基的斜面和平板各3个，于无菌室使用前(或使用后)，在无菌室内揭开皿盖放置台面上，半小时后重新盖上，另一皿不打开作对照。两者同时放30下培养，48h后检验平皿培养基表面有无菌生长及菌落数量，根据检验结果采取措施。 将2种培养基的各12个平板分别置于被测环境的室内和室外或其它需监测的的地方，打开皿盖各暴露于空气5min和10min。加皿盖，倒置于28、37培养， 细菌2d，霉菌3-4d，放线菌5-7d，计数。观察菌落形态和颜色。,
