1、生物制品化学规定规程本规程载人的化学检定项目，如采用其他方法测定，其结果与本规程所列应无显著差异。如遇制品质量存在疑问时，其最后判定应以本规程所列方法测定结果为准。标准液的配制与标定方法参看最新版中国药典 。PH 值测定（电位法）1 仪器校准（定位）用标准缓冲溶液应使用分析纯标准缓冲物质配制。1.1 0.05mol/L 邻苯二甲酸氢钾溶液称取于1155干燥23小时的邻苯二甲酸氢钾（KHC8H4O4 ）10.120.01g，溶于蒸馏水，并稀释至1000ml。1.20.025mol/L 磷酸氢二钠和0.025mol/L 磷酸二氢钾混合溶液分别称取在1155干燥23小时的磷酸氢二钠（Na2HPO4
2、）3.530.01g 和磷酸二氢钾（KH2PO4）3.390.01g，溶于预先煮沸过1530分钟并迅速冷却的蒸馏水中，并稀释至1000ml。1.30.01mol/L 硼砂溶液称取硼砂（Na2B4O710H2O）3.800.01g（注意：不能烘！） ，溶于预先煮沸过1530分钟并迅速冷却的蒸馏水中，并稀释至1000ml。置聚乙烯塑料瓶中密闭保存。标准缓冲溶液于050的标准 pH 值温度() 0.05mol/L 邻苯二甲酸氢钾 0.025mol/L 混合磷酸盐 0.01mol/L 硼砂0 4.01 6.98 9.465 4.00 6.95 9.3910 4.00 6.92 9.3315 4.00
3、6.90 9.2820 4.00 6.88 9.2325 4.00 6.86 9.1830 4.01 6.85 9.1435 4.02 6.84 9.1040 4.03 6.84 9.0745 4.04 6.83 9.0450 4.06 6.83 9.022 操作使用玻璃电极酸度计测定，操作方法按仪器说明书进行。用两种标准缓冲溶液校正或核对，相差不得超过0.05。固体总量测定甲、105干烤法1 操作精确量取一定体积样品于干燥至恒重的扁称量瓶中，置105烤箱中烘至恒重。2 计算烘干后样品重量样品固体总量%（g/ml）= 100样品 ml 数乙、50干烤法1 操作精确量取1mlA 群脑膜炎球菌多糖
4、 菌苗半成品原液于已干燥至恒重的称量瓶（22.5cm）中，置50干燥箱中，干燥至恒重。2 计算同105干烤法。半微量定氮法1 试剂1.1 硫酸化学纯，比重1.84。1.2 消化剂硫酸铜（CuSO45H2O）1份与硫酸钾（K2SO4）10份共同研细混匀即成。1.3 12.5mol/L 氢氧化钠液取氢氧化钠500g，加蒸馏水至1000ml，摇匀。1.4 2%硼酸吸收液硼酸20g 加蒸馏水使溶解成1000ml，加混合指标剂10ml，摇匀。1.5 混合指示剂0.2%（g/ml）溴甲酚绿酒精溶液5份与0.1% （g/ml）甲基红酒精溶液2份混合配成。1.6 标准0.01mol/L 盐酸或0.005mol
5、/L 硫酸溶液。2 操作2.1 消化准确量取一定体积样品（含氮量在12mg 左右）于凯氏定氮瓶中，加消化剂约0.3g，浓硫酸1.0ml 进行消化，至澄明蓝绿色，继续消化约60分钟，同时做空白。2.2 蒸馏与滴定取10ml 硼酸吸收液于100ml 三角瓶内，将凯氏蒸馏器冷凝管末端浸入硼酸吸收液内，将消化好的样品移入凯氏蒸馏器内，用蒸馏水洗定氮瓶34次，洗液亦移入蒸馏器内，再加5ml 12.5mol/L 氢氧化钠溶液，然后进行蒸馏，待接收液总体积约3550ml, 将冷凝管末端取出液面，让蒸汽冲洗约1分钟，再用少量蒸馏水冲洗冷凝管末端，接收液用标准0.01mol/L 盐酸或0.005mol/L 硫酸
6、进行滴定，至溶液显著变色。3 计算（样品滴定数 空白滴定数）标准盐酸 mol/L14样品总氮含量(mg/ml)样品 ml 数附注1.蒸馏前应蒸洗蒸馏器15分钟。2.蒸汽发生瓶内应加数滴硫酸及甲基红指示剂至呈明显红色。蛋白质含量测定甲、钨酸沉淀法1 试剂1.110%钨酸钠溶液取钨酸钠10g，加蒸馏水使溶解成100ml。1.2 0.33mol/L 硫酸溶液量取化学纯硫酸1.86ml，缓缓注入适量的蒸馏水中，待冷加水稀释至 100ml。1.3 0.145mol/L 氯化钠溶液取氯化钠9g，加蒸馏水使溶解成1000ml。2 操作2.1 钨酸除蛋白质精确量取样品2ml 加蒸馏水14ml，加10%钨酸钠2
7、ml，0.33mol/L 硫酸2ml ，摇匀，静置30分钟过滤。2.2 精确量取样品1ml，用0.145mol/L 氯化钠溶液准确稀释至每 ml 含氮量1mg 左右。2.3 精确量取稀释液1ml 及除蛋白质滤液5ml，分别移入凯氏定氮瓶中，用半微量定氮法测定样品的总氮及非蛋白氮含量。3 计算样品总氮含量(mg/ml)=（样品滴定数-空白滴定数）标准盐酸 mol/L14稀释倍数样品非蛋白氮含量(mg/ml)=（样品滴定数-空白滴定数）标准盐酸 mol/L1412样品蛋白质含量(g/ml)=（总氮 -非蛋白氮）6.251/10附注1.样品蛋白质含量如超过10%(g/ml)，除蛋白质时应适当加大样品
8、稀释倍数，10%钨酸钠及0.33mol/L 硫酸用量相应地按比例增加，使溶液钨酸浓度仍保持 1%。2.总氮与非蛋白氮可用同一空白。乙、三氯醋酸沉淀法1 2%三氯醋酸溶液取三氯醋酸12g，加蒸馏水溶解至100ml。2 操作精确量取一定体积的样品（含蛋白质612mg 左右，于10ml 尖底离心管中，加等体积的12%三氯醋酸混匀，放置半小时后3000r/min 离心30分钟，倾净上清，沉淀用蒸馏水约3ml（分数次）洗入凯氏烧瓶，按半数量定氮法测定氮含量。3 计算（样品滴定数 空白滴定数）标准盐酸 mol/L14样品蛋白质含量(mg/ml)6.25样品 ml 数丙、微量法（Lowry 法）1.试剂1.
9、1 4%碳酸钠溶液取4g 碳酸钠，加蒸馏水溶解成100ml。1.2 0.2mol/L 氢氧化钠溶液取0.8g 氢氧化钠加蒸馏水，溶解成100ml。1.3 0.04mol/L 硫酸铜溶液取1gCuSO45H2O 加蒸馏水溶解成100ml。1.42%酒石酸钾（或0.1mol/L 酒石酸钠）取2g 酒石酸钾（或酒石酸钠） ，加蒸馏水溶解成100ml 。1.5 碱性铜液临用前取试剂1.1和1.2各25ml，试剂1.3和1.3各0.5ml 混匀配制而成。1.6 酚试剂称取100g 钨酸钠(Na2WO42H2O),25g 钼酸钠(Na2MoO42H2O) ，置1500ml 烧瓶中，加入700ml 蒸馏水，
10、50ml 85%磷酸及100ml 浓盐酸，上联回流管（使用木塞或锡纸包裹的橡皮塞）微沸加流10小时，取下回流管，加入150g 硫酸锂，50ml 蒸馏水，几滴溴液，煮沸约15分钟，驱除过量的溴。冷却，加蒸馏水稀释至1000ml，过滤，为酚试剂贮备液。酚试剂贮备液经标准氢氧化钠液滴定，测定酸浓度，而后用蒸馏水稀释至相当1mol/L盐酸浓度，即为酚试剂。1.7 标准蛋白质溶液取牛血清白蛋白标准品（由检定所统一标定发给） ，准确稀释至1mg/ml( 含0.02%NaN3)，为标准蛋白质贮备液。精确量取标准蛋白质贮备液2.5ml 于25ml 容量瓶中，用含0.02%NaN3的蒸馏水稀释至刻度，为标准蛋白
11、质溶液（100g/ml） 。2 操作2.1 样品精确量取一定体积样品（含蛋白质50g 左右）于试管中，加5ml 碱性铜液，混匀，于室温放置10分钟，快速加入0.5ml 酚试剂，摇匀，于室温放置 30分钟，用650nm 波长或红色滤光片比色（呈色后，如发现混浊，经3000r/min 离心15分钟后再比色） 。2.2 标准曲线精确量取标准蛋白质溶液（100g/ml）0、0.2、0.4、 0.6、0.8、1.0ml ，分别置于试管中，加蒸馏水补至1ml，其余操作同样品，可得一标准曲线。3 计算从标准曲线查出样品相当标准蛋白质溶液之 ml 数 A；A0.01%样品蛋白质含量（g/ml）= 样品 ml
12、数附注检测 A 群脑膜炎多糖抗原半成品原液可取 1ml（含抗原310mg ） 。硫酸铵含量测定1 试剂1.1 1mol/L 氢氧化钠液取化学纯氢氧化钠20g，加蒸馏水溶解成500ml。2 操作2.1 除蛋白质方法同蛋白质含量测定。2.2 蒸馏精确量取除蛋白质滤液10ml 于凯氏蒸馏器内，加1mol/L 氢氧化钠1ml ，加少量蒸馏水，按半微量定氮法进行蒸馏、滴定。3 计算样品硫酸铵含量%（g/ml ）= （样品滴定数-空白滴定数）标准盐酸mol/L144.7151/10氯化钠含量测定1 试剂1.1 0.1mol/L 硝酸银溶液取硝酸银17g，加蒸馏水溶解成1000ml。1.2 标准0.05mo
13、l/L 硫氰酸铵溶液1.3 5.5mol/L 硝酸1.4 8% 硫酸铁铵指示液取8g 硫酸铁铵，加蒸馏水溶解成100ml。1.5 饱和高锰酸钾取高锰酸钾6.5g，加蒸馏水溶解成100ml。2 操作2.1 精确吸取样品1ml，准确加入0.1mol/L 硝酸银溶液5ml ，混匀（蛋白质含量高者加2ml 饱和高锰酸钾） ，加10ml 硝酸 (5.5mol/L) ，直接加热消化至溶液澄清为止。待冷，加蒸馏水50ml,8%硫酸铁铵指示液1ml,用标准 0.05mol/L 硫氰酸铵溶液滴定至溶液呈淡棕红色，振摇匀仍不退色，即为终点。2.2 空白试验准确量陬0.1mol/L 硝酸银溶液 5ml，加硝酸 (5
14、.5mol/L)10ml，可不消化，其余操作同样品。3 计算样品氯化钠含量%(g/ml)（空白滴定数样品滴定数）硫氰酸铵 mol/L5.845钠离子含量测定（火焰光度法）1 试剂标准钠溶液：精确称取于110干燥至恒重的 NaCl2.9227g,用双蒸水溶解并稀释至1000ml, 为500mmol/L 标准钠溶液。2 操作2.1 样品精确量取样品0.5ml 于 50ml 容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，于火焰光度计， 589nm波长（或黄色滤光片）测其透光度。2.2 标准曲线精确量取标准钠溶液0.9、1.1、1.3、1.5、1.7ml 于50ml 容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，钠含量分别为0.9、
15、1.1、1.3、1.5、1.7mmol/L ，其余操作同样品。3 计算由标准曲线上查出稀释后样品钠含量为 a mmol/L 。样品钠含量(mmol/L)=A100钾离子含量测定（火焰光度法1 试剂标准钾溶液：精确称取于110干燥至恒重的 KCl 0.3728g，用双蒸水溶解并稀释至500ml ，为10mmol/L 标准钾溶液。2 操作2.1 样品精确量取样品2ml 于50ml 容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，于火焰光度计 769nm 波长（或红色滤光片）测其透光度。2.2 标准曲线精确量取标准钾溶液0.15、0.30、0.45、0.60、0.75ml 于50ml 容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，钾
16、含量分别为0.03、0.06、0.09、0.12、0.15mmol/L，其余操作同样品。3 计算由标准曲线上查出稀释后样品钾含量为 Ammol/L 。样品钾含量(mmol/L)=A25枸橼酸离子含量测定1 试剂1.1 标准枸橼酸钠浓溶液精确称取枸橼酸钠(Na3C6H 标准5O72H2O)0.5882g, 加蒸馏水溶解，并准确稀释至100ml ，为20mmol/L 枸橼酸钠液。1.2 标准枸橼酸钠溶液精密量取标准枸橼酸钠浓溶液5ml，用5%三氯醋酸准确稀释至50ml ，为2mmol/L 枸橼酸钠标准液。1.310%三氯醋酸：称取三氯醋酸 10g，用蒸馏水稀释至100ml。1.45%三氯醋酸：称取
17、三氯醋酸 5g，用蒸馏水稀释至100ml。1.5 砒啶(AR) 。1.6 醋酸酐(AR) 。2 操作2.1 样品精确量取0.5ml 样品，加 4.5ml 蒸馏水，加5ml10% 三氯醋酸，混匀，置60 水浴 5分钟，离心去沉淀。精确量取1ml 上清液于25ml 玻塞试管中，加1.3ml 吡啶，混匀，加5.7ml 醋酸酐，立即混匀并置于31水浴，准确培育35分钟后，于 425nm 波长下测 OD 值，同时做空白试验：取1ml 5%三氯醋酸代替1ml 去蛋白后样品上清液，其余操作同样品。2.2 标准曲线精确量取标准枸橼酸钠溶液0.0、0.25、0.50、0.75、1.0ml, 分别加5% 三氯醋酸
18、1.0、0.75、0.5、0.25、0.0ml （其相应的枸橼酸钠离子含量为0、0.5、1.0、1.5、2.0mmol/l ） ，其余操作从加1.3ml 吡啶开始同样品。可得一标准曲线。3 计算由标准曲线查得样品稀释液相当标准枸橼酸离子 Ammol/L。样品枸橼酸离子含量(mmol/L)=A20亚硫酸氢钠含量测定1 试剂1.1 0.1mmol/L 碘液1.2 标准0.1mmol/L 硫代 硫酸钠液1.3 0.5%淀粉指示剂取可溶性淀粉0.5g，加蒸馏水 5ml 搅匀后，缓缓倾入100ml 沸蒸馏水中，随加随搅拌，煮沸，至适成稀薄的半透明液，放置使沉淀，倾取上层清液（配制时可加适当的防腐剂） 。
19、1.4 6mol/L 盐酸2 操作精确量取脑炎疫苗5 10ml 或一定体积亚硫酸氢钠液（含亚硫酸氢钠2.5mg 左右）于碘瓶中，精确加入0.1mol/L 碘液20ml，放置 5分钟，沿瓶壁加6 mol/L 盐酸2ml ，摇匀，用标准0.1 mol/L 硫代硫酸钠液滴定至溶液呈浅黄色，加0.5% 淀粉指示剂约0.5ml，滴定至蓝色消失，同时做空白。(空白滴定数 -样品滴定数)硫代硫酸钠 mol/L5.203样品亚硫酸氢钠含量%（g/ml ）=样品 ml 数附注如测定样品为亚硫酸氢钠液，只需根据其浓度和取样量，在测定时适当增加0.1mol/L 碘液的用量即可。氢氧化铝（或磷酸铝）含量测定甲、滴定法
20、1 试剂1.1 0.05 mol/L EDTA 标准液。1.2 标准0.025 mol/L 锌液。取标准0.05mol/L 锌液稀释。1.3 Ph4.5醋酸铵缓冲液称取醋酸铵77.1g，溶于适量的蒸馏水中，加冰醋酸58ml, 稀释至1000ml 。1.40.1%二甲酚橙指示剂。1.5 0.95 mol/L 磷酸量取磷酸6ml，稀释至 100ml。2 操作精确量取吸附精制类毒素适量（含铝110mg ） ，置 250ml 三角瓶中，加 0.95mol/L 磷酸1.5ml，使完全溶解。必要时于水浴加温（难于溶解时尚可适当增加磷酸量） 。加0.05 mol/L EDTA10ml, Ph4.5 醋酸铵缓
21、冲液10ml，于沸水浴中加热10 分钟，冷至室温加0.1% 二甲酚橙 1ml，用 0.025 mol/L 锌标准液进行滴定，当溶液由亮黄转变为橙色，即为终点。同时做空白试验。3 计算(空白滴定数 -样品滴定数)标准锌液 mol/L78.01样品氢氧化铝含量(mg/ml)=样品 ml 数(空白滴定数 -样品滴定数) 标准锌液 mol/L121.95样品磷酸铝含量(mg/ml)= 样品 ml 数(空白滴定数-样品滴定数) 标准锌液 mol/L26.98样品铝含量(mg/ml)= 样品 ml 数乙、比色法1 试剂1.1 0.95mol/L 磷酸取磷酸6ml ，稀释至100ml。1.2 1.5mol/
22、L 盐酸1.31.2mol/L 盐酸1.4 0.2%铝试剂溶液1.51.3mol/L 醋酸铵溶液1.6 标准铝溶液精确称取钾明矾KAl(SO4)212H2O0.3518g, 加1.5mol/L HCl 8ml ，加蒸馏水到1000ml，为含铝20g/ml 的标准液。2 操作2.1 样品精密量取吸附制品 1ml (含铝0.51mg)于50ml 容量瓶中，加0.95mol/L 磷酸1.5ml, 使完全溶解（必要时于水浴加温） ，用水稀释至刻度。取稀释样品1ml 于 25ml 带塞刻度试管中，加1.2mol/L 盐酸1ml, 加水15ml,0.2% 铝试剂1ml，摇匀，加1.3mol/L 醋酸铵溶液
23、5ml,加水至25ml, 摇匀，放置15 分钟，用530nm 波长比色。2.2 标准曲线取标准铝溶液0、0.25、0.5、0.75、1.0、1.25ml 于25ml 带塞刻度试管中，铝含量分别为0、5、10、15、20、25g，其余操作同样品管。绘制标准曲线。3 计算由标准曲线查出铝含量为 Ag。Al(OH)3(mg/ml)=A2.891850/1000Al(PO4)(mg/ml)=A4.5250/1000附注边缘制品以滴定法为准。游离甲醛测定1 试剂1.1 复红亚硫酸试剂1.1.1 取碱性复红4.5g 于3000ml 三角瓶中加蒸馏水 1500ml,振摇或加温使复红全部溶解，待冷后，加10g
24、 亚硫酸钠，摇匀，静置510分钟，再加入40ml 3mol/L 硫酸，摇匀，以橡皮塞塞紧瓶口，放置过夜，如有颜色，加骨炭510g 迅速摇匀，以布氏漏斗快速抽滤。1.1.2 试剂之 SO2含量可控制在2848mmol/L(SO2含量过多可通空气驱除之，过少可通入 SO2)。SO2含量测定：吸取复红亚硫酸试剂10ml 于三角瓶内。加蒸馏水 20ml，0.5%淀粉指示剂5ml，用0.1mol/L 碘液滴定至呈浅蓝色。计算：SO2mmol/L=50碘液 ml 数碘液 mmol/L1.2 混合酸量取蒸馏水783ml 于烧杯内，缓缓注入42ml 盐酸，175ml 硫酸，混匀。1.3 标准甲醛溶液为0.00
25、5%(g/ml)甲醛溶液。精确量取已标定的甲醛溶液 Vml，于500ml 容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，临用时10倍稀释。5000.05V= 标定甲醛溶液含量%（g/ml ）2 操作2.1 样品精确量取样品1ml，用蒸馏水稀释至甲醛含量在0.003%(g/ml)左右。取稀释液2ml 于50ml比色管中加蒸馏水到5ml，加10ml 复红试剂，10ml 混合酸，摇匀，在25放置3小时，用590nm 波长比色。2.2 标准曲线精确量取0.005%(g/ml)标准甲醛溶液0、0.5、1.0、1.5、2.0ml，分别置于50ml 比色管中，加蒸馏水至总体积为5ml，其余操作同样品。可得一标准曲线。
26、3 计算从标准曲线查出样品相当标准甲醛溶液之 ml 数 A。样品游离甲醛含量%（g/ml ）=A0.005 稀释倍数附注1.标准液和样品与复红试剂的显色时间，有时不一致，测定时，显色慢者应酌情早加复红试剂。2.样品中如含有酚红，标准管中应予以校正。3.可做限度测定。苯酚含量测定1 试剂1.1 0.02mol/L 溴液取0.56g 溴酸钾，加3g 溴化钾，加蒸馏水溶解成1000ml 。1.2 25%碘化钾溶液取碘化钾25g，加蒸馏水溶解成100ml。1.3 标准0.02mol/L 硫代硫酸钠溶液取标准0.1mol/L 硫代硫酸钠溶液准确稀释5倍。1.4 6 mol/L 盐酸溶液1.5 淀粉指示剂
27、取可溶性淀粉0.5g，加蒸馏水5ml，搅匀后，缓缓倾入 100ml 的沸水中，随加随搅拌，煮沸，至适成稀薄的半透明液，放置，俟沉淀，倾取上层清液（配制时可加适当的防腐剂） 。1.6 0.17 mol/L 硫酸锌溶液取硫酸锌5g 加蒸馏水溶解成100ml。 1.7 饱和氢氧化钡溶液取氢氧化钡Ba(OH)28H2O5.6g，加蒸馏水溶解成100ml。1.8 0.5%酚酞指示剂取酚酞0.5g，加乙醇100ml,使溶解即得。2 操作2.1 菌苗类样品精确量取样品1ml 于碘瓶中，加入蒸馏水约50ml，精确加入0.02mol/L 溴液1525ml（样品含苯酚量0.3%0.5% 加25ml，小于0.3%则
28、加15ml ） ，沿瓶壁加入盐酸（6mol/L）10ml，摇匀，密塞，在暗处置30分钟后，加25%碘化钾2ml 于碘瓶颈口，稍启瓶塞，使流下，密塞，摇匀。以少量蒸馏水洗瓶颈，用标准0.02mol/L 硫代硫酸钠溶液滴定至溶液呈浅黄色，加淀粉指示剂约0.5ml，滴定至蓝色消失。同时做空白试验。2.2 人胎盘血丙种球蛋白及疫苗类样品精密量取除蛋白（方法同蛋白含量测定钨酸除蛋白法）后滤液5ml 于碘瓶中，其余操作同2.1项。2.3 人胎盘组织液精确量取样品5ml 于50ml 容量瓶内，加适量蒸馏水，加0.5%酚酞指示剂2滴，加5% 硫酸锌溶液2ml，饱和氢氧化钡溶液约2.5ml（加至溶液呈粉红色）
29、，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置30分钟，过滤。精确量取滤液5ml 于碘瓶中，其余操作同 2.1项。3 计算3.1 菌苗类样品苯酚含量%（g/ml）=（空白滴定数 -样品滴定数）硫代硫酸钠 mol/L1.5693.2 人胎盘血丙种球蛋白（或人胎盘组织液）及疫苗类样品苯酚含量%（g/ml）=（空白滴定数 -样品滴定数）硫代硫酸钠 mol/L1.5692附注1.蛋白类制品由于除蛋白后滤液仍含有小分子物质，对苯酚含量测定有干扰，使结果偏高，边缘制品可用蒸馏法，取除蛋白滤液5ml 于凯氏蒸馏器内，接受液为 0.02mol/L 溴液1525ml，蒸馏约20分钟后其余操作同上。2.可做限度测定。硫柳汞及硝
30、酸汞苯含量测定1 试剂1.1 0.05%双硫腙浓溶液称取纯净双硫腙50mg，溶于 100ml 氯仿中，保存于冷暗处。1.2 0.00125%双硫腙滴定液临用时取0.05%双硫腙浓溶液 2.5ml，用四氯化碳稀释至100ml 。1.3 浓硫酸1.48.0mol/L 硝酸溶液1.5 20%盐酸羟胺溶液1.6 标准汞浓溶液精确称取于 H2SO4干燥器干至恒重的氯化高汞（HgCl2分析纯）0.1354g，用0.5mol/L H2SO4溶解并准确稀释至100ml ，为1mg 汞/ml 溶液。1.7 标准汞溶液（50g 汞/ml）精确量取标准汞浓溶液5ml，用0.5mol/L H2SO4准确稀释至100m
31、l。2 操作2.1 消化精确量取样品（含汞约50g）于150ml 圆底磨口烧瓶（附长40cm 回流管）中，加浓硫酸2ml，5.5mol/L 硝酸0.5ml，电炉上加热回流15分钟（或于 324cm 试管中，加盖，于85 90水浴加热 1小时） ，冷却后加蒸馏水40ml，加20% 盐酸羟胺5ml 。2.2 滴定将上述样品用40ml 水分数次冲洗入125ml 分液漏斗中，用0.00125%双硫腙滴定液滴定，开始时每次可加入2ml 左右，以后逐渐减少，至每次0.5ml，最后还可少至0.2ml。每次加入滴定液后，振摇10秒钟，静置分层，弃去四氯化碳层，继续滴定，直至双硫腙液的绿色不变，即为终点。抗毒素
32、及丙种球蛋白样品用水浴消化法滴定时会出现少量絮状物，但不影响结果。2.3 双硫腙滴定液的标化精确量取标准汞溶液1ml 于125ml 分液漏斗中，加浓硫酸2ml，加蒸馏水80ml，20%盐酸羟胺5ml，用双硫腙滴定液滴定，操作同上。3 计算0.0502.04 100硫柳汞含量%（g/ml）=样品滴定数 标准汞液滴定数 样品 ml 数10000.0501.58 100硫酸汞苯含量%（g/ml）=样品滴定数 标准汞液滴定数 样品 ml 数1000附注可做限度测定氯仿含量测定1 试剂1.1 乙醚不应含过氧化物，否则应加硫酸亚铁蒸馏。1.2 20%氢氧化钠溶液取氢氧化钠100g，加蒸馏水至500ml。1
33、.3 碱性吡啶20%氢氧化钠溶液2份，加吡淀 5份，振摇至呈硷性，放置分层，取上层液（此液需临时配制，如显红色，吡啶需重蒸馏） 。1.4 95%乙醇1.5 标准氯仿液精密量取氯仿1ml 于100ml 容量瓶中，用乙醇稀释至刻度，为1%氯仿溶液。临用前用蒸馏水准确稀释10倍，为0.1%(ml/ml)氯仿标准液。2 操作2.1 样品精确量取样品1ml 加蒸馏水4ml。精确量取样品稀释液0.5ml 于玻塞试管中，加乙醚18ml，猛烈振摇3分钟，静置。于刻度玻塞试管中加5ml 碱性吡啶。加5ml 乙醚提取液，混匀，置80水浴中加热 8分钟，取出后用水冷却，加蒸馏水至12ml ，充分振摇，静置分层，倾去
34、上层液，用绿色滤光片比色。2.2 标准曲线精确量取0.1%氯仿标准液 0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml，各管加蒸馏水至0.5ml ，其余操作同样品，可得一标准曲线。3 计算由标准曲线查得样品稀释液相当标准氯仿液之 ml 数 A。样品氯仿含量=A%（ml/ml）附注1.配制碱性吡啶的氢氧化钠须不含碳酸钠，否则有混浊现象。2.可做限度测定费休（K.Fischer）氏水分测定法1 试剂1.1 无水吡啶取吡啶200ml，置干燥的蒸馏瓶中，加苯40ml，加热蒸馏，收集114116蒸馏出的吡啶，含水量应在0.1%以下。1.2 无水甲醇取甲醇1000ml，于干燥蒸馏瓶中，加金属镁约15g 与二氯化
35、汞 0.4g（或碘0.5g）回流24小时，然后蒸馏（蒸馏仪器均需干燥） ，收集6465蒸馏出的甲醇，含水量应在0.05%以下。1.3 二氧化硫工业用，如无二氧化硫可用硫酸及亚硫酸钠配制。Na2SO3+H2SO4Na2SO4+H2SO3H2SO3H2O+SO2按此反应根据 SO2之需要量计算亚硫酸钠及硫酸之用量，将亚硫酸钠置于瓶中，加少量水，缓缓加入硫酸，将生成之二氧化硫通过浓硫酸洗气瓶，再通入费休氏试剂瓶中。1.4 费休氏试剂取干燥的1000ml 玻璃容器，加入碘42.33g 与无水吡啶 133.3ml，加塞，振摇至碘全部溶解后，加无水甲醇333.3ml，称定重量，将此瓶置冰浴中，用密闭装置导
36、入经浓硫酸洗气瓶脱水的二氧化硫直至重量增加32g 为止，密封避光保存。1.5 标准水的制备与标化1.5.1 制备于干燥无水的50ml 容量瓶中，精密称取0.4g 左右双蒸水，用无水甲醇稀释至刻度，密封保存。1.5.2 标化精密量取标准水1ml 与制备标准水用的无水甲醇5ml 分别置于干燥带塞的玻瓶中，用费休氏试剂滴定至溶液呈棕黄色。1.5.3 计算称取水重为 Amg。1ml 标准水所需费休氏试剂为 Bml。5ml 无水甲醇所需费休氏试剂为 Cml。每 ml 费休氏试剂相当于水的 mg 数为 N=A/50 / B-C/51ml 标准水之含水量（mg）=NB2 操作 2.1 精密称取干燥制品0.1
37、0.5g 于干燥带塞的玻瓶中，加无水甲醇5ml （按取样量情况可酌情减少甲醇加量） ，不断振摇，用费休氏试剂滴定至棕黄色，经振摇1分钟不退色，即为终点。同时取无水甲醇5ml 作空白试验。2.2 费休氏试剂标化精密量取标准水1ml 于干燥带塞的玻瓶中，用费休氏试剂滴定至终点。1ml 标准水含水量（mg）费休氏试剂效价 N= 费休氏试剂滴定数3 计算（样品滴定数-空白滴定数）N 1样品水分含量%（g/g）= 样品重量 10附注1配制试剂及测定样品用的全部仪器均应干燥至无水。2布氏菌病活菌苗及鼠疫活菌苗等制品能在费休氏试剂中溶解，可不用加无水甲醇提取。3空气中湿度大，对水分测定有影响，取样时应备有防
38、湿装置。相对湿度应30%以下。4有条件可采用卡氏水分测定仪测定。5如样品中含有干扰物质，可采用五氧化二磷真空低温干燥法测定。5.1 试剂五氧化二磷（工业用） 。5.2 操作取制品0.21.0g 置于已干燥至恒重的称量瓶中，加盖，精确称定重量（称量瓶中样品厚度应在5mm 以下） ，放入五氧化二磷干燥器中，打开瓶盖，于 60将干燥器抽真空至133Pa 以下，干燥至恒重。干燥完毕应缓慢通入经浓硫酸脱水的干燥空气。53 计算样品水分含量%（g/g）=干燥失重/样品重量100人白蛋白吸收度测定1 仪器11 分光光度计（有403nm 波长） 。12 径长1cm 的吸收池。2 操作精确量取样品1.0ml，用
39、蒸馏水或0.15mol/L 氯化钠准确稀释至1%蛋白质溶液，置吸收池中，在光路1cm，波长403nm 处用分光光度计测定。人白蛋白残留铝离子会计师测定（铝试剂法）1 试剂1.1 盐酸（19）10ml 浓盐酸加90ml 蒸馏水。1.2 0.2%铝试剂溶液0.2g 铝试剂加100ml 蒸馏水溶解。1.3 10%醋酸铵溶液称取10g 醋酸铵（AR） ，加蒸馏水溶解并稀释至100ml 。1.4 准铝溶液（10g 铝/ml）精密称取明矾KAl（SO4）212H2O（AR，无风化）0.3518g，加1.5mol/l HCl8ml，加蒸馏水到500ml，为40g 铝/ml 的标准浓溶液。临用时精确量取2.5
40、ml 标准铝浓溶液于10ml容量瓶，用蒸馏水稀释至刻度，为10g 铝/ml 标准液。1.5 4mol /L NaOH 溶液称取40g NaOH(A.R)，加蒸馏水溶解并稀释至250ml。1.60.5mol /L NaOH 溶液取50ml 4mol /L NaOH 加蒸馏水至 400ml。1.70.1mol /L HCl 溶液1ml 浓 HCl（A.R）加蒸馏水至120ml。取溴麝香草酚蓝0.1g,加0.05mol/L NaOH3.2ml,溶解，再加水衡稀释至200m。2 操作2.1样品精密量取1ml 样品于凯氏消化瓶内，加1ml 浓 H2SO4于电炉上消化。从浓的白烟生成到白烟基本消除，再继续
41、消化15分钟，稍冷，向消化瓶中另入适量 H2O2，于电炉上继续消化至无气泡生成，消化液呈无色透明。待冷后，用4mol/LNaOH 中和消化液（10%白蛋白加5ml4mol/LNaOH） 。然后将消化液转移至10ml 容量瓶中，并用蒸馏水稀释至刻度。取2ml 稀释液于25ml 带塞比色管中（取2管） 。另取2ml 稀释液于50ml 三角烧瓶中，向三解烧瓶中加2滴 BTB 指示剂，如变蓝，用 0.1mol/LHCl 滴定至黄绿色；如为黄色就用0.5mol/LNaOH 滴定至黄绿色或浅蓝色。用此方法将2ml 样品或对照稀释液的 pH 值调至5.58.5，按此量将比色管内的稀释液 pH 值调至5.58
42、.5。加1mlHCl(19)，加蒸馏水使其总体积不超过17ml，加0.2%铝试剂1ml、10% 醋酸铵溶液5ml，加蒸馏水至25ml 。加塞摇匀。放置20分钟后，用530nm 波长测其吸收度（ OD 值） 。同时做空白对照，用1ml 蒸馏水代替1ml 样品，其余操作同样品。2.2 标准曲线精密量取标准铝溶液（10g 铝/ml）0、0.2、0.4、0.6 、0.8、1.0ml 于25ml 带塞比色管中，铝含量分别为0、2、4、6、8、10g，从加1mlHCl（19）起同样品管。3 计算3.1 由标准曲线查出，或从标准计算出的直线回归方程中求出对照管和样品管的铝含量（A） 。3.2 根据中和用去的
43、碱量计算出2ml 样品和对照稀释液中含 4mol/LNaOH 的 ml 数。3.3 根据2ml 对照稀释液含的4mol/l NaOH 量和含铝量，计算出每 ml4mol/l NaOH 含铝量。3.4 根据每 ml4mol/l NaOH 含铝量和2ml 样品稀释液中含 4mol/l NaOH 的 ml 数，计算出2ml 样品稀释液中，中和用的4mol/l NaOH 含铝量（B ） 。3.5 计算样品中含铝量样品中含铝量（g/g 蛋白）=（AB ）210蛋白含量（g/ml）附注1铝试剂不仅能与某些金属离子形成有色的络合物，同时也会由于溶液中 H+浓度的改变而产生颜色的变化。因此测定时，要严格控制溶
44、液的 pH 值在5.0左右，样品和标准的 pH值一致。2铝试剂避光保存。人白蛋白（或丙种球蛋白）纯度测定（醋酸纤维素薄膜电泳法）1 试剂1.1 巴比妥缓冲液（Ph8.6）取巴比妥2.76g，巴比妥钠15.45g，加蒸馏水溶解成1000ml 。1.20.5%氨基黑染色液取氨基黑10B0.5g，溶于甲醇 50ml、冰醋酸10ml 及蒸馏水 40ml 的混合液中。1.3漂洗液取乙醇45ml，冰醋酸5ml 及蒸馏水50ml，混匀。1.40.2mol /L 氢氧化钠取8g 氢氧化钠，加蒸馏水溶解成1000ml。1.5透明液取冰醋酸25ml，加无水乙醇75ml，混匀。2 操作2.1 电泳将膜条（28cm）
45、粗糙面向下，浸入巴比妥缓冲液中，待完全浸透，取出用滤纸吸去多余的缓冲液，将膜条粗糙面向上，加于电泳支架上的滤纸桥上（或桥下） ，于膜上距负极端2cm 处，直线状滴加蛋白质含量约5%的样品23l，通电，电流控制在0.40.6mA/cm总电流量=生产要膜的宽度（cm）膜条数 ，同时取新鲜人血清作对照，电泳时间以白蛋白与丙种球蛋白之间的电泳展开距离达34cm 为宜。2.2 染色电泳完毕，将膜条取下浸于染色液中，23分钟后，用漂洗液反复漂洗至底色完全脱净。2.3 透明将漂净并完全干后的膜条浸于透明液至全部浸透为止，取出平铺于洁净的玻璃板上，干后即成透明薄膜，可供扫描法测定样品纯度和作为标本长期保存用。
46、2.4 纯度测定2.4.1 洗脱法：将漂洗净的膜条用滤纸吸干，与正常人血清的电泳图谱作对照，剪下白（或丙种球蛋白）带 A 及其他杂蛋白质区带 B，分别浸于5ml0.2mol/L 氢氧化钠溶液中，振摇数次，至色泽完全浸出后，于620nm 波长下测其 OD 值，以相同条件下，无蛋白质部分的膜条（其长度分别同 A 及 B）作空白对照。样品中白蛋白（或丙种球蛋白）含量%=A 的 OD 值A 空白的 OD 值/ （A 的 OD 值A 空白的 OD 值）+（B 的 OD 值B 空白的 OD 值）100%2.4.2 扫描法：将干燥的样品醋酸纤维素薄膜电泳图谱放入自动光密度扫描仪，通过反射（未透明薄膜）或透射
47、（已透明薄膜）方式测定各蛋白质电泳区带的 OD 值，根据仪器性能，可自动或手工方法计算出样品白蛋白（或丙种球蛋白）的百分含量。附注用扫描法测定白蛋白（或丙种球蛋白）纯度时，可采用丽春红染色法，其染色液及漂洗液配方如下：0.2%红染色液：取丽春红0.2g，磺基水杨酸3g 及三氯醋酸3g，用蒸馏水溶解并稀释至100ml 。漂洗液：取冰醋酸3ml，用蒸馏水稀释至100ml。残留聚乙二醇（PEG）含量测定1试剂1.1 PEG（MW4000或6000 ） 。1.20.5mol /L 高氯酸（HClO4）溶液。1.3 5%BaCl2溶液。1.40.1mol /L 碘溶液。2 操作2.1 取1ml 样品，在
48、灵敏度允许的范围内，先将样品稀释到蛋白质浓度 1%，加入5.0ml 0.5mol /L 高氯酸溶液，15分钟后，用 4000r/min，离心10分钟，取上清液（如蛋白浓度过高，上清混浊，则要过滤至清） 。2.2 PEG 测定于4ml 上清液中加入1.0ml5%BaCl2和0.5ml 的0.1mol/L 碘溶液，反应15分钟后，进行比色。记录各样品的 A535值。2.3 标准曲线的绘制取1% 蛋白质溶液，另入 PEG 合成1080g/ml 溶液。根据样品的大致浓度，用去除蛋白质后溶液制剂作标准曲线。2.4 根据样品读数，从标准曲线上查出 PEG 含量。3 计算样品中 PCG 浓度% （g/ml）=样品稀释倍数查得标准曲线相应的 PEG 浓度附注1.整个比色过程应在试剂加入以后的1545分钟内完成，否则将要影响结果。2.本方法的灵敏度随被测定 PEG 的分子量的增加而提高。人血白蛋白多聚体含量及人血丙种球蛋白中 lgG 各组份测定（高压液相凝胶柱色谱法）1 仪器1.1 高压液相泵1.2 高压液相
