1、新药安全药理学研究与进展,第二军医大学药物安全性评价中心 陆国才 袁伯俊,内 容,安全药理学：研究药物治疗范围内或治疗范围以上的剂量时，潜在不期望出现的对生理功能的不良影响 次要药效学：主要研究药物非期望的、与治疗目的不相关的效应和作用机制,概 念,CFDA要求,核心组合试验(Core Battery)中枢神经系统、心血管系统和呼吸系统研究 追加的安全药理学研究（Follow-up）对中枢神经系统、心血管系统和呼吸系统进行深入的研究 补充的安全药理学研究（Supplemental）研究药物对三大系统以外器官(如泌尿系统、自主神经系统、胃肠道系统和其它器官组织)功能的影响,概 念,CFDA要求,
2、确定药物可能存在的非期望药效作用 评价药物在毒理学和/或临床研究中所观察到的药物不良反应和/或病理生理作用 研究所观察到的和/或推测的药物不良反应机制,目 的,CFDA要求,有助于了解新药的药理作用特点和机制 有助于发现新药理作用，一药多用，药尽其用 为毒理学研究打下基础，是各种毒性实验的必要补充,目 的,CFDA要求,贯穿在新药研究全过程中，可分阶段进行 在药物进入临床试验前，应完成Core Battery Studies 追加和/或补充的安全药理学研究可在申报生产前进行,阶段性,CFDA要求,内容要求,CFDA要求,神经系统运动功能、行为改变、协调功能、感觉运动反射和体温等的变化(小鼠)
3、心血管系统给药前后血压（包括收缩压、舒张压和平均压）、心电图（包括QT间期、PR间期、ST段和QRS波等）和心率等变化(Beagle犬) 呼吸系统呼吸频率和呼吸幅度(Beagle犬) 根据情况增加其它系统或指标,1.动物选择可采用不同类型动物(正常或模型，清醒或麻醉)。一般多用正常动物 2.剂量途径产生主要药效作用及以上的3个剂量，临床给药途径 3.观察时间药效学和药代动力学特性、受试动物、临床研究方案等因素选择观察时间点和观察时间,CFDA要求,有关问题,4.系统指标 中枢神经系统 心血管系统 呼吸系统 根据情况增加其它系统或指标 5.体外研究应确定受试物的浓度-效应关系。无明显影响作用时，
4、应说明浓度选择范围,CFDA要求,有关问题,中枢神经系统：对行为、学习记忆、神经生化、视觉、听觉和电生理等的影响 心血管系统：对心输出量、心肌收缩作用、血管阻力等指标的检测 呼吸系统：对气道阻力、肺动脉压力、血气分析等指标的检测,CFDA要求,追加安全药理学,泌尿系统：对肾功能的影响，如对尿量、比重、渗透压、pH、电解质平衡、蛋白质、细胞和血生化（如尿素氮、肌酐、蛋白质）等指标的检测 自主神经系统：有关受体的结合、体内或体外对激动剂或拮抗剂的功能反应、对自主神经的直接刺激作用和对心血管反应、压力反射和心率等指标的检测,CFDA要求,补充安全药理学,胃肠系统：观察药物对胃肠系统的影响，如胃液分泌
5、量和pH、胃肠损伤、胆汁分泌、离体回肠收缩、胃液pH等指标的测定 其它研究：潜在的依赖性、骨骼肌、免疫和内分泌功能等的影响,CFDA要求,补充安全药理学,体内血药浓度低，或其它组织器官分布很少的局部用药（如皮肤、眼科用药） 只用于治疗晚期癌症病人的细胞毒类药物，在首次用于临床前可不做一般药理学研究，但不包括具有新作用机制的此类药物,CFDA要求,免做安全药理学,内 容,“Safety pharmacology includes the assessment of effects on vital functions, such as cardiovascular, central nervou
6、s system and respiratory systems, and these should be evaluated prior to human exposure.” ICH M3: Nonclinical safety studies for the conduct of human clinical trials for pharmaceuticals. (July 1997)Value of safety pharmacology acknowledged by regulators and sponsors,ICH要求,ICH Guideline M3, 1997,“Saf
7、ety pharmacology studies investigate the potential for undesirable pharmacological activity in appropriate animal models and, where necessary, to incorporate particular monitoring for these activities in the toxicity studies and/or clinical studies.”“ these studies may allow for a mechanistically-ba
8、sed explanation of specific organ toxicities, which should be considered carefully with respect to human use and indication(s).”ICH S6 “Preclinical Safety Evaluation of Biotechnology-Derived Pharmaceuticals” (July 1997) Pharmacological activity in animals should be considered in toxicology and clini
9、cal studies Mechanism-based understanding of toxicities (or pharmacological activities) should be carefully considered in the risk assessment,ICH要求,ICH Guideline S6, 1997,“This guidance was developed to help protect clinical trial participants and patients receiving marketed products from potential
10、adverse effects of pharmaceuticals, while avoiding unnecessary use of animals and other resources.”ICH S7A “Safety Pharmacology Studies for Human Pharmaceuticals” (July 2001)Safety pharmacology studies have the potential to reduce use of animals and other resources,ICH要求,ICH Guideline S7A, 2001,清醒动物
11、-遥测系统,检测清醒状态下、自由活动动物的安全药理学指标 节省动物 符合动物福利要求 适合不同给药方式 连续动态、长时间检测指标,ICH要求,4 x 4拉丁方实验设计,ICH要求,4 x 8拉丁方实验设计,ICH要求,Drug to increase gastrointestinal (GI) motility Over 5.4 million prescriptions in 1996 (US) 34 patients TdP, 23 long QT (1993-1996) Cardiotoxicity reported when used with Ketoconazole and/or
12、Erythromycin Case report of 8-year old girlintensive care,ICH要求,Cisapride Story,ICH要求,Drug Interactions Leading to QT,Drug to increase gastrointestinal (GI) motility Over 5.4 million prescriptions in 1996 (US) 34 patients TdP, 23 long QT 1993-1996 Cardiotoxicity reported when used with Ketoconazole
13、and/or Erythromycin Case report of 8-year old girlintensive care 4 deaths and 16 resuscitated from 1993 to 1996 Drug withdrawn from US market July, 2000,ICH要求,Cisapride Story,FDA recommended removal of Terfenadine containing products from the market in 01/1997 FDA issued warning letter to Doctors ab
14、out cardiac safety of Cisapride Post-marketing surveillance became more important Medwatch reporting system Safety pharmacology guidances were approved to look at cardiovascular, respiratory and CNS side-effects of drug candidates ICH S7A and S7B Screening for QT prolongation is now an integral part
15、 of drug development (lead optimization to clinical),ICH要求,Regulatory Response,“The study results can be used to elucidate the mechanism of action and, when considered with other information, estimate risk for delayed ventricular repolarization and QT interval prolongation in humans.”ICH S7B: Noncli
16、nical Evaluation of the Potential for Delayed Ventricular Repolarization (QT Interval Prolongation) by Human Pharmaceuticals (October 2005)Mechanism of action can be a goal of studies Use data with other data to estimate risk for QT prolongation in humans,ICH要求,ICH Guideline S7B, 2005,Bazett: QTc =
17、QT / RR 0.5 Fridericia: QTc = QT / RR 0.33,ICH要求,QTc Interval,ICH要求,QTc Interval,心率 年龄 性别 种属,HR/RR公式,心肌动作电位时的离子通道,ICH要求,IKr: 快速延迟整流K+电流,心肌动作电位时的离子通道,ICH要求,hERG (人类Ether-a-go-go 相关基因) (KCNH2) 编码Kv11.1 钾离子通道，使心脏动作电位Ikr流复极化,QT/QTc Prolongation,IKr Inhibition,Delayed Ventricular Repolarization,Arrhythmi
18、a,ADDITIONAL RISK FACTORS,IKr inhibitory potency:can help predict risk of QT/QTc prolongationis a biomarker for increased risk of Ventricular Arrhythmias is not a biomarker for Torsade de Pointes,ICH要求,IKr &TdP,ICH要求,Early after-depolarization（早后去极化） TdP,Drug Class Date WithdrawnTerfenadine Antihist
19、amine Feb 1998Sertindole Antipsychotic Dec 1998Astemizole Antihistamine Jun 1999Grepafloxacin Antibiotic Nov 1999Cisapride GI Prokinetic July 2000,ICH要求,Drugs Withdrawn for TdP risk,采用离体动物或人体心脏细胞、培养心脏细胞系或克隆人离子通道的异种表达体系测定离子流 在离体心脏标本进行动作电位参数测定，或在麻醉动物中进行能体现动作电位周期的特异性电生理参数检测 测定清醒或麻醉动物的ECG参数 在离体心脏标本或动物进行
20、致心律失常作用测定,QT间期延长非临床研究方法,ICH要求,QT间期延长非临床研究方法,ICH要求,Langendorff系统,QT间期延长非临床研究方法,ICH要求,ECG PR 间期, QRS 时间, QT 间期等 心脏功能 左心室压 变力性, 松弛性, 变时性 变更神经传导性 A-V 传导 单级动作电位 APD30 APD50 APD90,QT间期延长非临床研究方法,ICH要求,QT间期延长非临床研究方法,ICH要求,一般来说，临床上易诱发Tdp的药物的hERG IC50和有效游离治疗血浆浓度ETPC unbound 之间的比值大多小于30，因此药物对hERG作用的IC50是Cmax的3
21、0倍时，认为是可以接受的安全程度，出现假阳性结果的可能性也很低 安全窗应该考虑疾病的严重性和治疗的需要 对于如果不给予治疗就会死亡的疾病，如肿瘤，AIDS，一些感染性疾病等，IC50是Cmax的10倍可认为是安全的 对于较为严重的疾病，如中风、帕金森病、精神分裂症、癫痫症、哮喘症、关节炎等，30倍可以认为是安全的 对于较轻的疾病，如雷诺病、季节性鼻炎、湿疹等，100倍甚至更高的倍数才可认为是安全的,内 容,2009,趋势展望,安全药理学政策法规不断完善,趋势展望,QT间期研究策略,体外电生理IKr研究 采用原代或表达的IKr通道蛋白(如由hERG编码的蛋白)评价药物对离子电流的影响 体内对QT
22、的研究 从体内测定心室复极化，如QT间期检测结果进行评价 化学/药理的分类 可诱导人QT间期延长作用的药物如抗精神病类药物，组胺H1受体拮抗剂、氟喹酮类,QT间期研究策略,趋势展望,追加试验 离体心脏 麻醉动物 重复给药试验 动物种属和性别的选择 用代谢性诱导剂或用拮抗剂 用阳性药和参比化合物 其他通道的抑制作用 在多个时间点测定电生理参数 模拟病理状况和心律失常 综合风险评估,QT间期研究策略,趋势展望,QT间期延长的问题在很大程度上已得到解决 药物对血压的影响非常重要 药物对心脏功能（收缩能力）的影响非常重要 很多化合物，通过重复给药的毒理实验来获得心血管系统的安全药理实验数据，而不需要再
23、单独进行安全药理实验 特别是生物类药品如单克隆抗体等大多采用此法 通过设计周全的安全药理实验和毒理实验，大大提高了整体动物模型的心血管系统药理实验的研究水平和数据质量,QT间期研究策略,为什么血压检测很重要？,降低高血压患者的血压可以降低死亡率 微小血压的变化的重要性：“哪怕只是降低2 mmHg的系统血压，中风死亡率就会降低10%，中年IHD患者和其他血管疾病患者的死亡率会减少7%,为什么心肌耗氧很重要？,心肌全靠有氧代谢，不能生成乳酸，不能负担超氧负荷 因此，心肌细胞耗氧量能提供非常准确的，实时的能量消耗状况 心肌耗氧量也是判断冠状血流的一个重要指标,心肌耗氧的三大决定因素,心脏收缩期室壁张
24、力（压力） 心率 收缩力 心肌收缩 VS 心肌变力状态 正性肌力类药物可以增加心肌收缩 负性肌力作用类药物则可以降低心肌收缩,改变心肌收缩力的结果,心肌收缩减弱意味着心脏做功能力降低 心肌收缩力的显著降低，临床体现可为急性或慢性心衰 心肌收缩力增强可增加心脏的做功量，通常来说是在身体需求增加时的正常生理反应 但是心肌收缩力增强的同时会急剧增加心肌耗氧量,心肌耗氧升高三大因素,收缩期室壁张力（血压） 哪怕平均血压只是微小地缓慢上升都会引起死亡率的明显升高 心率 心率的微小缓慢上升也会引起死亡率明显升高 心肌收缩 心肌收缩力的长期缓慢增强会导致什么结果呢？,HESI心肌收缩力评价项目,综合策略：
25、收集实验数据和提出建议，以改善非临床心血管数据的预提示能力（从动物到人类，从短期到长期用药） 心肌收缩力被选定为一个重点研究项目 目的： 用已知药效的药物，评估犬类和大鼠整体动物模型在检测药物正性和负性肌力作用应用上的灵敏度 该研究同时也对比了啮齿类模型和犬类模型在此类应用中的相对灵敏度 实验研究将由美国和欧洲的HESI成员来完成,健康和环境科学研究所（HESI）,心肌收缩能力实验设计,比格犬 双4X4拉丁方交叉设计 (N=8) 正性 & 负性肌力药物 空白溶剂 & 3 个剂量 测试药物和剂量选择 植入式遥测 DSI & ITS 系统 LVP, AoP, ECG, Temp dP/dtmax
26、dP/dt40, dP/dt min, QA,SD或者Wistar大鼠 双4X4拉丁方交叉设计 (N=8) 正性 & 负性肌力药物 空白溶剂 & 3 个剂量 测试药物和剂量选择 植入式遥测 DSI HD-S21 系统 LVP, AoP, ECG, Temp dP/dtmax dP/dt40, dP/dtmin, QA,计算机模拟 (in silico) 干细胞定向分化为心肌细胞 下丘脑病理切片 HERG通道体外筛选新方法 荧光筛选(测量膜电位) 结合试验 (标记的HERG通道阻滞剂，HTS) 斑马鱼HTS 结合药代/药效，研究毒理学生物标志，预测临床,安全药理学研究新技术新方法,趋势展望,计算
27、机模拟 (in silico) 干细胞定向分化为心肌细胞 下丘脑病理切片 HERG通道体外筛选新方法 荧光筛选(测量膜电位) 结合试验 (标记的HERG通道阻滞剂，HTS) 斑马鱼HTS 结合药代/药效，研究毒理学生物标志，预测临床,安全药理学研究新技术新方法,趋势展望,PART I MUTAGENESIS AND MUTANTS Highly Efficient ENU Mutagenesis in Zebrafish Production of Pseudotyped Retrovirus and the Generation of Proviral Transgenic Zebrafis
28、h Undertaking a Successful Gynogenetic Haploid Screen in Zebrafish Cryopreservation and In Vitro Fertilization at the Zebrafish International Resource Center,计算机模拟 (in silico) 干细胞定向分化为心肌细胞 下丘脑病理切片 HERG通道体外筛选新方法 荧光筛选(测量膜电位) 结合试验 (标记的HERG通道阻滞剂，HTS) 斑马鱼HTS 结合药代/药效，研究毒理学生物标志，预测临床,安全药理学研究新技术新方法,趋势展望,PART
29、 II TRANSGENESIS Transient and Stable Transgenesis Using Tol2 Transposon Vectors Analysis of Genes and Genome by the Tol2-Mediated Gene and Enhancer Trap Methods Bacterial Artificial Chromosome Transgenesis for Zebrafish Simple and Efficient Transgenesis with Meganuclease Constructs in Zebrafish,计算机
30、模拟 (in silico) 干细胞定向分化为心肌细胞 下丘脑病理切片 HERG通道体外筛选新方法 荧光筛选(测量膜电位) 结合试验 (标记的HERG通道阻滞剂，HTS) 斑马鱼HTS 结合药代/药效，研究毒理学生物标志，预测临床,安全药理学研究新技术新方法,趋势展望,PART III TISSUE-SPECIFIC MANIPULATIONS Nitroreductase-Mediated Cell Ablation in Transgenic Zebrafish Embryos Focal Electroporation in Zebrafish Embryos and Larvae Ti
31、ssue Micromanipulation in Zebrafish Embryos,计算机模拟 (in silico) 干细胞定向分化为心肌细胞 下丘脑病理切片 HERG通道体外筛选新方法 荧光筛选(测量膜电位) 结合试验 (标记的HERG通道阻滞剂，HTS) 斑马鱼HTS 结合药代/药效，研究毒理学生物标志，预测临床,安全药理学研究新技术新方法,趋势展望,PART IV ANALYZING GENE EXPRESSION Zebrafish Spotted-Microarray for Genome-Wide Expression Profiling Experiments. Part
32、I: Array Printing and Hybridization Part II : Data Acquisition and Analysis Validating microRNA Target Transcripts Using Zebrafish Assays,计算机模拟 (in silico) 干细胞定向分化为心肌细胞 下丘脑病理切片 HERG通道体外筛选新方法 荧光筛选(测量膜电位) 结合试验 (标记的HERG通道阻滞剂，HTS) 斑马鱼HTS 结合药代/药效，研究毒理学生物标志，预测临床,安全药理学研究新技术新方法,趋势展望,PART V IMAGING Multiple
33、Embryo Time-Lapse Imaging of Zebrafish Development Live Cell Imaging of Zebrafish Leukocytes Imaging Zebrafish Embryos by Two-Photon Excitation Time-Lapse Microscopy Morphological Analysis of the Zebrafish Digestive System In Toto Imaging of Embryogenesis with Confocal Time-Lapse Microscopy,生物标志（物）,
34、生物标志的应用可分为四大类 筛查 诊断 监测病情发展和指导治疗 病情预测,生物标志特点-敏感性,高灵敏度 在组织中高度集中 在早期可迅速释放 有合适的半衰期 与损伤程度成正比,生物标志特点-特异性,对组织有特异性 对疾病有特异性 对疾病各类型有特异性,生物标志特点-测定法,准确 可重现 实施简单，操作性强 报告时间迅速 良好的成本效益比 诊断临界值明确清晰,心脏损伤生物标志,心脏损伤进展可分为三个阶段 炎症 急性损伤 心脏应激 这三个阶段可能连续、也可能同时发生,炎症标志 CRP、IL、TNF-& Fas、CD40 Ligand、基质金属蛋白酶MMP、髓过氧化物酶MPO 急性损伤标志 肌钙蛋白
35、cTn、髓过氧化物酶CK-MB、心脏型脂肪酸结合蛋白H-FABP 心脏应激标志 BNP & NT-proBNP、肾上腺髓质素Adrenomedullin、ST2,心脏损伤生物标志,Lancet Vol 378 July 30, 2011,心脏损伤标志,安全药理在生物学的发展 单抗不要求进行单独的安全药理实验(ICH S6) 安全药理CV整合到重复给药的毒理学研究中 呼吸系统整合到CV中 遥测系统引进视频记录 临床试验采用体内体外仿真模型获得安全药理数据,安全药理其它新进展,趋势展望,小 结,New, Robust, Reliable, Reproducible, Predictive assay,谢谢!,
