1、坐骨神经-腓肠肌标本制备 骨骼肌的单收缩、收缩总和与强直收缩,目的要求,1学习蛙类动物双毁髓的实验方法。 2学习并掌握坐骨神经-腓肠肌标本的制备方法。 3. 学习神经-肌肉实验的电刺激方法和记录肌肉收缩的方法； 4. 观察刺激强度与肌肉收缩反应之间的关系； 5. 掌握阈刺激、阈下刺激、阈上刺激、最大（适）刺激等概念。 6学习应用Pclab系统。,实验原理,对于单根神经纤维或肌纤维来说，对刺激的反应具有“全或无”的特性。神经肌肉标本是由许多兴奋性不同的神经纤维或肌纤维组成的。,在保持足够的刺激时间（脉冲波宽）不变时，刺激强度过小，不能引起任何收缩反应；随着刺激强度增加到某一定值，可引起少数兴奋性
2、较高的运动单位兴奋，引起少数肌纤维收缩，表现出较小的张力变化。该刺激器度称为阈强度，具有阈强度的刺激称为阈刺激。,实验原理,此后随着刺激强度的继续增加，会有较多的运动单位兴奋，肌肉的收缩幅度及产生的张力也不断增加，此时的刺激称为阈上刺激。,但当刺激强度增大到某一临界值时，所有的运动单位都被兴奋，引起肌肉最大幅度的收缩，产生的张力也最大。此后，再增加刺激强度，也不会再引起反应的继续增加。 可引起肌肉发生最大收缩反应的最小刺激强度为最适刺激强度，该刺激叫最大（适）刺激。,动物与器材,蛙；任氏液；肌槽、张力换能器（50100g）、支架、双凹夹、Pclab系统（含输入接线和刺激输出线）、常用手术器械、
3、锌铜弓、蜡盘、培养皿、滴管、棉线、橡皮泥。,方法步骤,1. 双毁髓 2. 剥制后肢标本 3. 分离两后肢（耻骨联合） 4. 分离坐骨神经 5. 分离股骨头(2cm) 6. 游离腓肠肌，肌腱处打结。 7. 检验标本,实验步骤,8. 进入PcLab实验内容 9. 连接刺激输出线、肌槽、张力换能器、万能支架 10.设定刺激参数，预采样。 11.放上坐骨神经-腓肠肌标本，观察，测定 11.保存和打印实验结果,注意事项,保留股骨头完整关节，不能从关节面之间剪开 实验后利用蛙躯体前部练习双毁髓在本实验要提交的数据： （1）阈刺激和最适刺激参数； （2）强直收缩图。,神经干复合动作电位及其传导速度的测定,目
4、的要求,了解蛙类坐骨神经干的单相和双相动作电位的记录方法；理解兴奋传导的概念。 掌握蛙离体神经干动作电位传导速度的测定方法。 初步熟悉电生理学实验方法；进一步掌握Pclab系统的应用方法。,基本原理,神经干在受到有效刺激后，可产生动作电位，标志着神经发生了兴奋。动作电位一经产生，即可向外传播，此即为神经冲动。如果将两个引导电极分别置于正常完整的神经干表面，当神经干的一端兴奋之后，兴奋波会先后通过两个引导电极（r1-r1），可记录到两个方向相反的电位偏转波形，称为双相动作电位。如将两个引导电极之间的神经麻醉或损伤，兴奋波只能通过第一个引导电极，不能传导至第二个引导电极，故只能记录到一个方向的电位
5、偏转波形，称为单相动作电位。,坐骨神经干是由许多不同类型的神经纤维组成的，因此其动作电位是一种复合动作电位。 由于各类神经纤维的兴奋阈值并不相同，所以在一定范围内，该复合动作电位的幅值可随刺激强度的变化而发生改变。这一点有别于单根神经纤维的动作电位。,动作电位在神经纤维上的传导具有一定的速度。不同类型的神经纤维传导速度各不相同。总体说来，直径粗的神经纤维传导速度快，直径相同的有髓神经纤维比无髓神经纤维快。蛙类坐骨神经干中以A类纤维为主，其传导速度在室温下约为3540ms。,测定神经纤维上神经冲动的传导速度（V）时，在远离刺激点的不同距离处分别引导其动作电位。两引导点之间的距离为d，在两引导点分
6、别引导出的动作电位的时相差为t，再按照以下公式来计算冲动速度：V=d/t(单位：m/s)。,动物与器材,蛙；任氏液、神经屏蔽盒、Pclab系统（含输入接线和刺激输出线）、常用手术器械、蛙板、培养皿、棉线。,方法与步骤,1制备坐骨神经干标本 2Pclab系统的软硬件设置 3放置标本 4实验采样,1制备坐骨神经干标本：,制备方法基本同实验1，剥离蛙一侧后肢的坐骨神经。坐骨神经下行至腘窝处分为两支：内侧为胫神经，走行表浅；外侧为腓神经。将神经干标本剥离得尽可能长些，即：上自脊神经发出部位，下沿胫、腓神经走向一直分离至踝关节附近。 剪去神经干的所有分支侧支；尽量把神经干周围的结缔组织剔干净（但切勿损伤
7、神经干），结扎坐骨神经干的脊柱端及胫、腓神经的足端；在靠近趾部处剪断神经游离神经干。将制备好的神经标本放入任氏液中稳定5min。,2Pclab系统的软硬件设置:,标准配置 实验模板选择 导线及器材连接：根据实验界面，用信号输入线把Pclab硬件相应的采样通道与神经屏蔽盒的两对记录电极连接起来，用刺激输出线把Pclab硬件的“刺激输出”与神经屏蔽盒的刺激电极连接起来。 预采样：点击“刺激”，若观察到刺激电流的波形，表明刺激器能正常发放电刺激。,3放置标本：,用浸有任氏液的棉球擦拭神经屏蔽盒上的电极，标本盒内放置一块湿润的滤纸片，以防标本干燥。用滤纸片吸去神经干上过多的任氏液，将其平搭在神经屏蔽盒
8、的电极上，并使其中枢端置于刺激电极上，外周端搭于引导电极上。并尽量让接触电极处的神经为剥离得较干净的节段，以保证动作电位的波形。,4 实验采样,神经干兴奋阈值的测定：刺激强度从0.1V开始，逐渐增加；找出刚刚出现动作电位时的刺激强度；若动作电位的曲线不够典型，则应检查神经是否剥离干净，如仍沾有血管或结缔组织，可放回任氏液中剥离干净后再静置片刻。,双相动作电位：在阈刺激的基础上逐渐加大刺激强度，可见动作电位的波形为双相，而且幅值随着刺激强度增大而加大；当刺激增加到一定强度时动作电位的幅值不再增大。测量动作电位上下相的振幅和整个动作电位的持续时间。,测量2个通道的动作电位分别达到波峰的时间间隔，即
9、为两个动作电位的时间差（ms），测量两对引导电极之间神经干的长度（mm），用以计算神经动作电位的传导速度。,将神经干标本放置的方向倒换后（即外周端置于刺激电极上，中枢端搭于引导电极上），观察双相动作电位的波形有无变化。,观察单相动作电位 用镊子将远离刺激端的一对引导电极之间的神经夹伤，再刺激时可观察到单相动作电位。读出最大刺激时单相动作电位的振幅值和整个动作电位的持续时间。,注意事项,制备标本时，神经纤维应尽可能长些，将附着于神经干上的结缔组织膜及血管清除干净，但不能损伤神经干。 经常滴加任氏液，保持神经标本湿润，但要用滤纸片吸去神经干上过多的任氏液。 如果在采样窗上发现动作电位的图形倒置，将
10、导线上与引导电极相接的两个红夹子对换即可，或面板上的“正负”按钮来进行刺激器极性的切换。 将神经干搭在引导电极上时，尽量将神经干拉成直线，且勿下垂或斜向置放。这样会影响测量神经干长度的准确性，最终影响传导速度的准确性。,实验报告写作要求：,1. 每次实验后均要写实验报告。2. 要求文字简洁、通顺，书写整洁，正确使用标点符号,3.报告格式,（1）实验目的(原理不专门写，应用于对实验结果的分析讨论中) （2）器材 （3）实验步骤（扼要） （4）实验结果：是实验最重要的部分，要随时、正确地记录实验过程中出现的现象。 （5）讨论,实验结果的表示方式：,a. 图（曲线），须标明实验名称、图名、日期、刺激时间等。b. 表格表示。,（5）讨论：,结合实验原理和实验操作过程，分析结果及实验成败关键。提交时间：周五交到海洋楼406实验室,下次实验,10月27日8:10-16:45 ABO血型鉴定 红细胞渗透脆性的测定 蛙类心搏过程的观察与描记、期外收缩与代偿间歇 动脉血压的测定及其影响因素,
