1、植物病理学专业优秀论文 转 Harpin蛋白编码基因对油菜农艺性状及抗菌核病的影响关键词：油菜 蛋白编码基因 农艺性状 抗菌核病摘要：由革兰氏阴性植物病原细菌产生的 Harpins 可以激发烟草过敏性细胞坏死(hvpersensitive cell death，HCD)，诱导植物抗病、抗虫，促进植物生长。Harpins 类激发子都具有相似的生化特征：富含甘氨酸(Gly)，不含半胱氨酸(Cys)，热稳定，对蛋白酶敏感。温室和田间实验表明，Harpins 蛋白处理植物可以诱导对真菌、细菌、病毒、线虫等多种病原物的抵抗，提高植物的产量。此外，将 harpin 转化烟草，水稻，梨树，都能不同程度的提高
2、转基因植株的抗性。因此，本研究旨在将编码 harpinlt;,Xoocgt;的基因 hrf2 转化油菜，以期提高油菜的抗病性和产量。 hrf2 基因来源于水稻细条斑菌Xanthomonas oryzae pvoryzicola 菌株 RS105，该基因含 414 bp，其推测的产物 Hrf2 含 138 个氨基酸，分子量约为15.310lt;#39;3gt;。hrf2 基因编码的harpinlt;,Xoocgt;蛋白具有与其他 Harpins 蛋白类似的特征和功能。hrf2 表达的蛋白质产物能够诱导植物抗病性、抗虫性和促进植物生长等有益效应。 本实验通过 PCR 方法，从水稻细条斑菌 Xant
3、homonas oryzae pvoryzicola 菌株 RS105 中扩增出 hrf2 基因，将其克隆入植物表达载体pBI121，构建 pBIl21：hrf2 重组质粒。然后将 hrf2 基因及其启动子和终止子用 Hind 和 EcoR 从 pBIl21：hrf2 上切下后回收，连接到用这两个酶切过的转基因表达载体 pCAMBIA1301 上，构建成重组转基因载体pCAMBIA1301：hrf2。重组载体转化至大肠杆菌 DH5 中，经酶切，测序验证后，通过冻融法转化根癌土壤杆菌 LBA4404。菌落 PCR 和酶切检测后，挑选阳性克隆供转化油菜使用。 由根癌农杆菌 LBA4404 介导，将
4、重组表达质粒pCAMBIA1301：hrf2 转化甘蓝型油菜杨油 4 号子叶节，获得了抗潮霉素的再生转基因油菜植株。经 PCR，Southem，RT-PCR 和 GUS 染色检测证明 hrf2 基因已整合到油菜基因组中，并且能在转录水平正常表达。从转 hrf2 基因的油菜中提取的可溶性蛋白注射烟草能引起过敏反应。 在相同培养条件下，转基因油菜的株高、叶片大小与受体植株无明显差异，生长发育正常，无肉眼可见的HR。转基因油菜的花期略有推迟，结实率差异较大；所有转基因植株的每荚粒数均少于对照，但部分转基因植株的千粒重与对照相比显著增加。T1 代油菜种子在含有 hyg 50 mg/L 的培养基上出现抗
5、感分化。抗病性鉴定结果表明，转hrf2 基因的油菜对油菜菌核病有较好的抗性。正文内容由革兰氏阴性植物病原细菌产生的 Harpins 可以激发烟草过敏性细胞坏死(hvpersensitive cell death，HCD)，诱导植物抗病、抗虫，促进植物生长。Harpins 类激发子都具有相似的生化特征：富含甘氨酸(Gly)，不含半胱氨酸(Cys)，热稳定，对蛋白酶敏感。温室和田间实验表明，Harpins 蛋白处理植物可以诱导对真菌、细菌、病毒、线虫等多种病原物的抵抗，提高植物的产量。此外，将 harpin 转化烟草，水稻，梨树，都能不同程度的提高转基因植株的抗性。因此，本研究旨在将编码 harp
6、inlt;,Xoocgt;的基因 hrf2 转化油菜，以期提高油菜的抗病性和产量。 hrf2 基因来源于水稻细条斑菌Xanthomonas oryzae pvoryzicola 菌株 RS105，该基因含 414 bp，其推测的产物 Hrf2 含 138 个氨基酸，分子量约为15.310lt;#39;3gt;。hrf2 基因编码的harpinlt;,Xoocgt;蛋白具有与其他 Harpins 蛋白类似的特征和功能。hrf2 表达的蛋白质产物能够诱导植物抗病性、抗虫性和促进植物生长等有益效应。 本实验通过 PCR 方法，从水稻细条斑菌 Xanthomonas oryzae pvoryzicol
7、a 菌株 RS105 中扩增出 hrf2 基因，将其克隆入植物表达载体pBI121，构建 pBIl21：hrf2 重组质粒。然后将 hrf2 基因及其启动子和终止子用 Hind 和 EcoR 从 pBIl21：hrf2 上切下后回收，连接到用这两个酶切过的转基因表达载体 pCAMBIA1301 上，构建成重组转基因载体pCAMBIA1301：hrf2。重组载体转化至大肠杆菌 DH5 中，经酶切，测序验证后，通过冻融法转化根癌土壤杆菌 LBA4404。菌落 PCR 和酶切检测后，挑选阳性克隆供转化油菜使用。 由根癌农杆菌 LBA4404 介导，将重组表达质粒pCAMBIA1301：hrf2 转化
8、甘蓝型油菜杨油 4 号子叶节，获得了抗潮霉素的再生转基因油菜植株。经 PCR，Southem，RT-PCR 和 GUS 染色检测证明 hrf2 基因已整合到油菜基因组中，并且能在转录水平正常表达。从转 hrf2 基因的油菜中提取的可溶性蛋白注射烟草能引起过敏反应。 在相同培养条件下，转基因油菜的株高、叶片大小与受体植株无明显差异，生长发育正常，无肉眼可见的HR。转基因油菜的花期略有推迟，结实率差异较大；所有转基因植株的每荚粒数均少于对照，但部分转基因植株的千粒重与对照相比显著增加。T1 代油菜种子在含有 hyg 50 mg/L 的培养基上出现抗感分化。抗病性鉴定结果表明，转hrf2 基因的油菜
9、对油菜菌核病有较好的抗性。由革兰氏阴性植物病原细菌产生的 Harpins 可以激发烟草过敏性细胞坏死(hvpersensitive cell death，HCD)，诱导植物抗病、抗虫，促进植物生长。Harpins 类激发子都具有相似的生化特征：富含甘氨酸(Gly)，不含半胱氨酸(Cys)，热稳定，对蛋白酶敏感。温室和田间实验表明，Harpins 蛋白处理植物可以诱导对真菌、细菌、病毒、线虫等多种病原物的抵抗，提高植物的产量。此外，将 harpin 转化烟草，水稻，梨树，都能不同程度的提高转基因植株的抗性。因此，本研究旨在将编码 harpinlt;,Xoocgt;的基因 hrf2 转化油菜，以期
10、提高油菜的抗病性和产量。 hrf2 基因来源于水稻细条斑菌Xanthomonas oryzae pvoryzicola 菌株 RS105，该基因含 414 bp，其推测的产物 Hrf2 含 138 个氨基酸，分子量约为15.310lt;#39;3gt;。hrf2 基因编码的harpinlt;,Xoocgt;蛋白具有与其他 Harpins 蛋白类似的特征和功能。hrf2 表达的蛋白质产物能够诱导植物抗病性、抗虫性和促进植物生长等有益效应。 本实验通过 PCR 方法，从水稻细条斑菌 Xanthomonas oryzae pvoryzicola 菌株 RS105 中扩增出 hrf2 基因，将其克隆入
11、植物表达载体pBI121，构建 pBIl21：hrf2 重组质粒。然后将 hrf2 基因及其启动子和终止子用 Hind 和 EcoR 从 pBIl21：hrf2 上切下后回收，连接到用这两个酶切过的转基因表达载体 pCAMBIA1301 上，构建成重组转基因载体pCAMBIA1301：hrf2。重组载体转化至大肠杆菌 DH5 中，经酶切，测序验证后，通过冻融法转化根癌土壤杆菌 LBA4404。菌落 PCR 和酶切检测后，挑选阳性克隆供转化油菜使用。 由根癌农杆菌 LBA4404 介导，将重组表达质粒pCAMBIA1301：hrf2 转化甘蓝型油菜杨油 4 号子叶节，获得了抗潮霉素的再生转基因油
12、菜植株。经 PCR，Southem，RT-PCR 和 GUS 染色检测证明 hrf2 基因已整合到油菜基因组中，并且能在转录水平正常表达。从转 hrf2 基因的油菜中提取的可溶性蛋白注射烟草能引起过敏反应。 在相同培养条件下，转基因油菜的株高、叶片大小与受体植株无明显差异，生长发育正常，无肉眼可见的HR。转基因油菜的花期略有推迟，结实率差异较大；所有转基因植株的每荚粒数均少于对照，但部分转基因植株的千粒重与对照相比显著增加。T1 代油菜种子在含有 hyg 50 mg/L 的培养基上出现抗感分化。抗病性鉴定结果表明，转hrf2 基因的油菜对油菜菌核病有较好的抗性。由革兰氏阴性植物病原细菌产生的
13、Harpins 可以激发烟草过敏性细胞坏死(hvpersensitive cell death，HCD)，诱导植物抗病、抗虫，促进植物生长。Harpins 类激发子都具有相似的生化特征：富含甘氨酸(Gly)，不含半胱氨酸(Cys)，热稳定，对蛋白酶敏感。温室和田间实验表明，Harpins 蛋白处理植物可以诱导对真菌、细菌、病毒、线虫等多种病原物的抵抗，提高植物的产量。此外，将 harpin 转化烟草，水稻，梨树，都能不同程度的提高转基因植株的抗性。因此，本研究旨在将编码 harpinlt;,Xoocgt;的基因 hrf2 转化油菜，以期提高油菜的抗病性和产量。 hrf2 基因来源于水稻细条斑菌
14、Xanthomonas oryzae pvoryzicola 菌株 RS105，该基因含 414 bp，其推测的产物 Hrf2 含 138 个氨基酸，分子量约为15.310lt;#39;3gt;。hrf2 基因编码的harpinlt;,Xoocgt;蛋白具有与其他 Harpins 蛋白类似的特征和功能。hrf2 表达的蛋白质产物能够诱导植物抗病性、抗虫性和促进植物生长等有益效应。 本实验通过 PCR 方法，从水稻细条斑菌 Xanthomonas oryzae pvoryzicola 菌株 RS105 中扩增出 hrf2 基因，将其克隆入植物表达载体pBI121，构建 pBIl21：hrf2 重
15、组质粒。然后将 hrf2 基因及其启动子和终止子用 Hind 和 EcoR 从 pBIl21：hrf2 上切下后回收，连接到用这两个酶切过的转基因表达载体 pCAMBIA1301 上，构建成重组转基因载体pCAMBIA1301：hrf2。重组载体转化至大肠杆菌 DH5 中，经酶切，测序验证后，通过冻融法转化根癌土壤杆菌 LBA4404。菌落 PCR 和酶切检测后，挑选阳性克隆供转化油菜使用。 由根癌农杆菌 LBA4404 介导，将重组表达质粒pCAMBIA1301：hrf2 转化甘蓝型油菜杨油 4 号子叶节，获得了抗潮霉素的再生转基因油菜植株。经 PCR，Southem，RT-PCR 和 GU
16、S 染色检测证明 hrf2 基因已整合到油菜基因组中，并且能在转录水平正常表达。从转 hrf2 基因的油菜中提取的可溶性蛋白注射烟草能引起过敏反应。 在相同培养条件下，转基因油菜的株高、叶片大小与受体植株无明显差异，生长发育正常，无肉眼可见的HR。转基因油菜的花期略有推迟，结实率差异较大；所有转基因植株的每荚粒数均少于对照，但部分转基因植株的千粒重与对照相比显著增加。T1 代油菜种子在含有 hyg 50 mg/L 的培养基上出现抗感分化。抗病性鉴定结果表明，转hrf2 基因的油菜对油菜菌核病有较好的抗性。由革兰氏阴性植物病原细菌产生的 Harpins 可以激发烟草过敏性细胞坏死(hvperse
17、nsitive cell death，HCD)，诱导植物抗病、抗虫，促进植物生长。Harpins 类激发子都具有相似的生化特征：富含甘氨酸(Gly)，不含半胱氨酸(Cys)，热稳定，对蛋白酶敏感。温室和田间实验表明，Harpins 蛋白处理植物可以诱导对真菌、细菌、病毒、线虫等多种病原物的抵抗，提高植物的产量。此外，将 harpin 转化烟草，水稻，梨树，都能不同程度的提高转基因植株的抗性。因此，本研究旨在将编码 harpinlt;,Xoocgt;的基因 hrf2 转化油菜，以期提高油菜的抗病性和产量。 hrf2 基因来源于水稻细条斑菌Xanthomonas oryzae pvoryzicol
18、a 菌株 RS105，该基因含 414 bp，其推测的产物 Hrf2 含 138 个氨基酸，分子量约为15.310lt;#39;3gt;。hrf2 基因编码的harpinlt;,Xoocgt;蛋白具有与其他 Harpins 蛋白类似的特征和功能。hrf2 表达的蛋白质产物能够诱导植物抗病性、抗虫性和促进植物生长等有益效应。 本实验通过 PCR 方法，从水稻细条斑菌 Xanthomonas oryzae pvoryzicola 菌株 RS105 中扩增出 hrf2 基因，将其克隆入植物表达载体pBI121，构建 pBIl21：hrf2 重组质粒。然后将 hrf2 基因及其启动子和终止子用 Hin
19、d 和 EcoR 从 pBIl21：hrf2 上切下后回收，连接到用这两个酶切过的转基因表达载体 pCAMBIA1301 上，构建成重组转基因载体pCAMBIA1301：hrf2。重组载体转化至大肠杆菌 DH5 中，经酶切，测序验证后，通过冻融法转化根癌土壤杆菌 LBA4404。菌落 PCR 和酶切检测后，挑选阳性克隆供转化油菜使用。 由根癌农杆菌 LBA4404 介导，将重组表达质粒pCAMBIA1301：hrf2 转化甘蓝型油菜杨油 4 号子叶节，获得了抗潮霉素的再生转基因油菜植株。经 PCR，Southem，RT-PCR 和 GUS 染色检测证明 hrf2 基因已整合到油菜基因组中，并且
20、能在转录水平正常表达。从转 hrf2 基因的油菜中提取的可溶性蛋白注射烟草能引起过敏反应。 在相同培养条件下，转基因油菜的株高、叶片大小与受体植株无明显差异，生长发育正常，无肉眼可见的HR。转基因油菜的花期略有推迟，结实率差异较大；所有转基因植株的每荚粒数均少于对照，但部分转基因植株的千粒重与对照相比显著增加。T1 代油菜种子在含有 hyg 50 mg/L 的培养基上出现抗感分化。抗病性鉴定结果表明，转hrf2 基因的油菜对油菜菌核病有较好的抗性。由革兰氏阴性植物病原细菌产生的 Harpins 可以激发烟草过敏性细胞坏死(hvpersensitive cell death，HCD)，诱导植物抗
21、病、抗虫，促进植物生长。Harpins 类激发子都具有相似的生化特征：富含甘氨酸(Gly)，不含半胱氨酸(Cys)，热稳定，对蛋白酶敏感。温室和田间实验表明，Harpins 蛋白处理植物可以诱导对真菌、细菌、病毒、线虫等多种病原物的抵抗，提高植物的产量。此外，将 harpin 转化烟草，水稻，梨树，都能不同程度的提高转基因植株的抗性。因此，本研究旨在将编码 harpinlt;,Xoocgt;的基因 hrf2 转化油菜，以期提高油菜的抗病性和产量。 hrf2 基因来源于水稻细条斑菌Xanthomonas oryzae pvoryzicola 菌株 RS105，该基因含 414 bp，其推测的产物
22、 Hrf2 含 138 个氨基酸，分子量约为15.310lt;#39;3gt;。hrf2 基因编码的harpinlt;,Xoocgt;蛋白具有与其他 Harpins 蛋白类似的特征和功能。hrf2 表达的蛋白质产物能够诱导植物抗病性、抗虫性和促进植物生长等有益效应。 本实验通过 PCR 方法，从水稻细条斑菌 Xanthomonas oryzae pvoryzicola 菌株 RS105 中扩增出 hrf2 基因，将其克隆入植物表达载体pBI121，构建 pBIl21：hrf2 重组质粒。然后将 hrf2 基因及其启动子和终止子用 Hind 和 EcoR 从 pBIl21：hrf2 上切下后回收
23、，连接到用这两个酶切过的转基因表达载体 pCAMBIA1301 上，构建成重组转基因载体pCAMBIA1301：hrf2。重组载体转化至大肠杆菌 DH5 中，经酶切，测序验证后，通过冻融法转化根癌土壤杆菌 LBA4404。菌落 PCR 和酶切检测后，挑选阳性克隆供转化油菜使用。 由根癌农杆菌 LBA4404 介导，将重组表达质粒pCAMBIA1301：hrf2 转化甘蓝型油菜杨油 4 号子叶节，获得了抗潮霉素的再生转基因油菜植株。经 PCR，Southem，RT-PCR 和 GUS 染色检测证明 hrf2 基因已整合到油菜基因组中，并且能在转录水平正常表达。从转 hrf2 基因的油菜中提取的可
24、溶性蛋白注射烟草能引起过敏反应。 在相同培养条件下，转基因油菜的株高、叶片大小与受体植株无明显差异，生长发育正常，无肉眼可见的HR。转基因油菜的花期略有推迟，结实率差异较大；所有转基因植株的每荚粒数均少于对照，但部分转基因植株的千粒重与对照相比显著增加。T1 代油菜种子在含有 hyg 50 mg/L 的培养基上出现抗感分化。抗病性鉴定结果表明，转hrf2 基因的油菜对油菜菌核病有较好的抗性。由革兰氏阴性植物病原细菌产生的 Harpins 可以激发烟草过敏性细胞坏死(hvpersensitive cell death，HCD)，诱导植物抗病、抗虫，促进植物生长。Harpins 类激发子都具有相似
25、的生化特征：富含甘氨酸(Gly)，不含半胱氨酸(Cys)，热稳定，对蛋白酶敏感。温室和田间实验表明，Harpins 蛋白处理植物可以诱导对真菌、细菌、病毒、线虫等多种病原物的抵抗，提高植物的产量。此外，将 harpin 转化烟草，水稻，梨树，都能不同程度的提高转基因植株的抗性。因此，本研究旨在将编码 harpinlt;,Xoocgt;的基因 hrf2 转化油菜，以期提高油菜的抗病性和产量。 hrf2 基因来源于水稻细条斑菌Xanthomonas oryzae pvoryzicola 菌株 RS105，该基因含 414 bp，其推测的产物 Hrf2 含 138 个氨基酸，分子量约为15.310l
26、t;#39;3gt;。hrf2 基因编码的harpinlt;,Xoocgt;蛋白具有与其他 Harpins 蛋白类似的特征和功能。hrf2 表达的蛋白质产物能够诱导植物抗病性、抗虫性和促进植物生长等有益效应。 本实验通过 PCR 方法，从水稻细条斑菌 Xanthomonas oryzae pvoryzicola 菌株 RS105 中扩增出 hrf2 基因，将其克隆入植物表达载体pBI121，构建 pBIl21：hrf2 重组质粒。然后将 hrf2 基因及其启动子和终止子用 Hind 和 EcoR 从 pBIl21：hrf2 上切下后回收，连接到用这两个酶切过的转基因表达载体 pCAMBIA13
27、01 上，构建成重组转基因载体pCAMBIA1301：hrf2。重组载体转化至大肠杆菌 DH5 中，经酶切，测序验证后，通过冻融法转化根癌土壤杆菌 LBA4404。菌落 PCR 和酶切检测后，挑选阳性克隆供转化油菜使用。 由根癌农杆菌 LBA4404 介导，将重组表达质粒pCAMBIA1301：hrf2 转化甘蓝型油菜杨油 4 号子叶节，获得了抗潮霉素的再生转基因油菜植株。经 PCR，Southem，RT-PCR 和 GUS 染色检测证明 hrf2 基因已整合到油菜基因组中，并且能在转录水平正常表达。从转 hrf2 基因的油菜中提取的可溶性蛋白注射烟草能引起过敏反应。 在相同培养条件下，转基因
28、油菜的株高、叶片大小与受体植株无明显差异，生长发育正常，无肉眼可见的HR。转基因油菜的花期略有推迟，结实率差异较大；所有转基因植株的每荚粒数均少于对照，但部分转基因植株的千粒重与对照相比显著增加。T1 代油菜种子在含有 hyg 50 mg/L 的培养基上出现抗感分化。抗病性鉴定结果表明，转hrf2 基因的油菜对油菜菌核病有较好的抗性。由革兰氏阴性植物病原细菌产生的 Harpins 可以激发烟草过敏性细胞坏死(hvpersensitive cell death，HCD)，诱导植物抗病、抗虫，促进植物生长。Harpins 类激发子都具有相似的生化特征：富含甘氨酸(Gly)，不含半胱氨酸(Cys)，
29、热稳定，对蛋白酶敏感。温室和田间实验表明，Harpins 蛋白处理植物可以诱导对真菌、细菌、病毒、线虫等多种病原物的抵抗，提高植物的产量。此外，将 harpin 转化烟草，水稻，梨树，都能不同程度的提高转基因植株的抗性。因此，本研究旨在将编码 harpinlt;,Xoocgt;的基因 hrf2 转化油菜，以期提高油菜的抗病性和产量。 hrf2 基因来源于水稻细条斑菌Xanthomonas oryzae pvoryzicola 菌株 RS105，该基因含 414 bp，其推测的产物 Hrf2 含 138 个氨基酸，分子量约为15.310lt;#39;3gt;。hrf2 基因编码的harpinlt
30、;,Xoocgt;蛋白具有与其他 Harpins 蛋白类似的特征和功能。hrf2 表达的蛋白质产物能够诱导植物抗病性、抗虫性和促进植物生长等有益效应。 本实验通过 PCR 方法，从水稻细条斑菌 Xanthomonas oryzae pvoryzicola 菌株 RS105 中扩增出 hrf2 基因，将其克隆入植物表达载体pBI121，构建 pBIl21：hrf2 重组质粒。然后将 hrf2 基因及其启动子和终止子用 Hind 和 EcoR 从 pBIl21：hrf2 上切下后回收，连接到用这两个酶切过的转基因表达载体 pCAMBIA1301 上，构建成重组转基因载体pCAMBIA1301：hr
31、f2。重组载体转化至大肠杆菌 DH5 中，经酶切，测序验证后，通过冻融法转化根癌土壤杆菌 LBA4404。菌落 PCR 和酶切检测后，挑选阳性克隆供转化油菜使用。 由根癌农杆菌 LBA4404 介导，将重组表达质粒pCAMBIA1301：hrf2 转化甘蓝型油菜杨油 4 号子叶节，获得了抗潮霉素的再生转基因油菜植株。经 PCR，Southem，RT-PCR 和 GUS 染色检测证明 hrf2 基因已整合到油菜基因组中，并且能在转录水平正常表达。从转 hrf2 基因的油菜中提取的可溶性蛋白注射烟草能引起过敏反应。 在相同培养条件下，转基因油菜的株高、叶片大小与受体植株无明显差异，生长发育正常，无
32、肉眼可见的HR。转基因油菜的花期略有推迟，结实率差异较大；所有转基因植株的每荚粒数均少于对照，但部分转基因植株的千粒重与对照相比显著增加。T1 代油菜种子在含有 hyg 50 mg/L 的培养基上出现抗感分化。抗病性鉴定结果表明，转hrf2 基因的油菜对油菜菌核病有较好的抗性。由革兰氏阴性植物病原细菌产生的 Harpins 可以激发烟草过敏性细胞坏死(hvpersensitive cell death，HCD)，诱导植物抗病、抗虫，促进植物生长。Harpins 类激发子都具有相似的生化特征：富含甘氨酸(Gly)，不含半胱氨酸(Cys)，热稳定，对蛋白酶敏感。温室和田间实验表明，Harpins
33、蛋白处理植物可以诱导对真菌、细菌、病毒、线虫等多种病原物的抵抗，提高植物的产量。此外，将 harpin 转化烟草，水稻，梨树，都能不同程度的提高转基因植株的抗性。因此，本研究旨在将编码 harpinlt;,Xoocgt;的基因 hrf2 转化油菜，以期提高油菜的抗病性和产量。 hrf2 基因来源于水稻细条斑菌Xanthomonas oryzae pvoryzicola 菌株 RS105，该基因含 414 bp，其推测的产物 Hrf2 含 138 个氨基酸，分子量约为15.310lt;#39;3gt;。hrf2 基因编码的harpinlt;,Xoocgt;蛋白具有与其他 Harpins 蛋白类似
34、的特征和功能。hrf2 表达的蛋白质产物能够诱导植物抗病性、抗虫性和促进植物生长等有益效应。 本实验通过 PCR 方法，从水稻细条斑菌 Xanthomonas oryzae pvoryzicola 菌株 RS105 中扩增出 hrf2 基因，将其克隆入植物表达载体pBI121，构建 pBIl21：hrf2 重组质粒。然后将 hrf2 基因及其启动子和终止子用 Hind 和 EcoR 从 pBIl21：hrf2 上切下后回收，连接到用这两个酶切过的转基因表达载体 pCAMBIA1301 上，构建成重组转基因载体pCAMBIA1301：hrf2。重组载体转化至大肠杆菌 DH5 中，经酶切，测序验证
35、后，通过冻融法转化根癌土壤杆菌 LBA4404。菌落 PCR 和酶切检测后，挑选阳性克隆供转化油菜使用。 由根癌农杆菌 LBA4404 介导，将重组表达质粒pCAMBIA1301：hrf2 转化甘蓝型油菜杨油 4 号子叶节，获得了抗潮霉素的再生转基因油菜植株。经 PCR，Southem，RT-PCR 和 GUS 染色检测证明 hrf2 基因已整合到油菜基因组中，并且能在转录水平正常表达。从转 hrf2 基因的油菜中提取的可溶性蛋白注射烟草能引起过敏反应。 在相同培养条件下，转基因油菜的株高、叶片大小与受体植株无明显差异，生长发育正常，无肉眼可见的HR。转基因油菜的花期略有推迟，结实率差异较大；
36、所有转基因植株的每荚粒数均少于对照，但部分转基因植株的千粒重与对照相比显著增加。T1 代油菜种子在含有 hyg 50 mg/L 的培养基上出现抗感分化。抗病性鉴定结果表明，转hrf2 基因的油菜对油菜菌核病有较好的抗性。由革兰氏阴性植物病原细菌产生的 Harpins 可以激发烟草过敏性细胞坏死(hvpersensitive cell death，HCD)，诱导植物抗病、抗虫，促进植物生长。Harpins 类激发子都具有相似的生化特征：富含甘氨酸(Gly)，不含半胱氨酸(Cys)，热稳定，对蛋白酶敏感。温室和田间实验表明，Harpins 蛋白处理植物可以诱导对真菌、细菌、病毒、线虫等多种病原物的
37、抵抗，提高植物的产量。此外，将 harpin 转化烟草，水稻，梨树，都能不同程度的提高转基因植株的抗性。因此，本研究旨在将编码 harpinlt;,Xoocgt;的基因 hrf2 转化油菜，以期提高油菜的抗病性和产量。 hrf2 基因来源于水稻细条斑菌Xanthomonas oryzae pvoryzicola 菌株 RS105，该基因含 414 bp，其推测的产物 Hrf2 含 138 个氨基酸，分子量约为15.310lt;#39;3gt;。hrf2 基因编码的harpinlt;,Xoocgt;蛋白具有与其他 Harpins 蛋白类似的特征和功能。hrf2 表达的蛋白质产物能够诱导植物抗病性
38、、抗虫性和促进植物生长等有益效应。 本实验通过 PCR 方法，从水稻细条斑菌 Xanthomonas oryzae pvoryzicola 菌株 RS105 中扩增出 hrf2 基因，将其克隆入植物表达载体pBI121，构建 pBIl21：hrf2 重组质粒。然后将 hrf2 基因及其启动子和终止子用 Hind 和 EcoR 从 pBIl21：hrf2 上切下后回收，连接到用这两个酶切过的转基因表达载体 pCAMBIA1301 上，构建成重组转基因载体pCAMBIA1301：hrf2。重组载体转化至大肠杆菌 DH5 中，经酶切，测序验证后，通过冻融法转化根癌土壤杆菌 LBA4404。菌落 PC
39、R 和酶切检测后，挑选阳性克隆供转化油菜使用。 由根癌农杆菌 LBA4404 介导，将重组表达质粒pCAMBIA1301：hrf2 转化甘蓝型油菜杨油 4 号子叶节，获得了抗潮霉素的再生转基因油菜植株。经 PCR，Southem，RT-PCR 和 GUS 染色检测证明 hrf2 基因已整合到油菜基因组中，并且能在转录水平正常表达。从转 hrf2 基因的油菜中提取的可溶性蛋白注射烟草能引起过敏反应。 在相同培养条件下，转基因油菜的株高、叶片大小与受体植株无明显差异，生长发育正常，无肉眼可见的HR。转基因油菜的花期略有推迟，结实率差异较大；所有转基因植株的每荚粒数均少于对照，但部分转基因植株的千粒
40、重与对照相比显著增加。T1 代油菜种子在含有 hyg 50 mg/L 的培养基上出现抗感分化。抗病性鉴定结果表明，转hrf2 基因的油菜对油菜菌核病有较好的抗性。由革兰氏阴性植物病原细菌产生的 Harpins 可以激发烟草过敏性细胞坏死(hvpersensitive cell death，HCD)，诱导植物抗病、抗虫，促进植物生长。Harpins 类激发子都具有相似的生化特征：富含甘氨酸(Gly)，不含半胱氨酸(Cys)，热稳定，对蛋白酶敏感。温室和田间实验表明，Harpins 蛋白处理植物可以诱导对真菌、细菌、病毒、线虫等多种病原物的抵抗，提高植物的产量。此外，将 harpin 转化烟草，水
41、稻，梨树，都能不同程度的提高转基因植株的抗性。因此，本研究旨在将编码 harpinlt;,Xoocgt;的基因 hrf2 转化油菜，以期提高油菜的抗病性和产量。 hrf2 基因来源于水稻细条斑菌Xanthomonas oryzae pvoryzicola 菌株 RS105，该基因含 414 bp，其推测的产物 Hrf2 含 138 个氨基酸，分子量约为15.310lt;#39;3gt;。hrf2 基因编码的harpinlt;,Xoocgt;蛋白具有与其他 Harpins 蛋白类似的特征和功能。hrf2 表达的蛋白质产物能够诱导植物抗病性、抗虫性和促进植物生长等有益效应。 本实验通过 PCR 方
42、法，从水稻细条斑菌 Xanthomonas oryzae pvoryzicola 菌株 RS105 中扩增出 hrf2 基因，将其克隆入植物表达载体pBI121，构建 pBIl21：hrf2 重组质粒。然后将 hrf2 基因及其启动子和终止子用 Hind 和 EcoR 从 pBIl21：hrf2 上切下后回收，连接到用这两个酶切过的转基因表达载体 pCAMBIA1301 上，构建成重组转基因载体pCAMBIA1301：hrf2。重组载体转化至大肠杆菌 DH5 中，经酶切，测序验证后，通过冻融法转化根癌土壤杆菌 LBA4404。菌落 PCR 和酶切检测后，挑选阳性克隆供转化油菜使用。 由根癌农杆
43、菌 LBA4404 介导，将重组表达质粒pCAMBIA1301：hrf2 转化甘蓝型油菜杨油 4 号子叶节，获得了抗潮霉素的再生转基因油菜植株。经 PCR，Southem，RT-PCR 和 GUS 染色检测证明 hrf2 基因已整合到油菜基因组中，并且能在转录水平正常表达。从转 hrf2 基因的油菜中提取的可溶性蛋白注射烟草能引起过敏反应。 在相同培养条件下，转基因油菜的株高、叶片大小与受体植株无明显差异，生长发育正常，无肉眼可见的HR。转基因油菜的花期略有推迟，结实率差异较大；所有转基因植株的每荚粒数均少于对照，但部分转基因植株的千粒重与对照相比显著增加。T1 代油菜种子在含有 hyg 50
44、 mg/L 的培养基上出现抗感分化。抗病性鉴定结果表明，转hrf2 基因的油菜对油菜菌核病有较好的抗性。特别提醒 ：正文内容由 PDF 文件转码生成，如您电脑未有相应转换码，则无法显示正文内容，请您下载相应软件，下载地址为 http:/ 。如还不能显示，可以联系我 q q 1627550258 ，提供原格式文档。我们还可提供代笔服务，价格优惠，服务周到，包您通过。“垐垯櫃 换烫梯葺铑?endstreamendobj2x 滌甸?*U 躆 跦?l, 墀 VGi?o 嫅#4K 錶 c#x 刔 彟 2Z 皙笜?D 剧珞 H 鏋 Kx 時 k,褝仆? 稀?i 攸闥-) 荮vJ 釔絓|?殢 D 蘰厣?籶(
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