1、 目 录摘 要 III关键词 IIIAbstractIVKey wordsIV引言 11 材料与方法 11.1 实验材料 .11.1.1 菌种 11.1.2 主要仪器设备 11.1.3 药品、试剂及配制 21.2 实验方法 .31.2.1 培养基及条件 31.2.2 粗酶液的制备 31.2.3 酶活的定义 31.2.4 酶活的测定 32 实验结果 32.1 产酶培养基的优化 .32.1.1 碳源的优化 32.1.2 氮源的优化 42.1.3 磷酸二氢钾浓度的优化 52.1.4 硫酸镁浓度的优化 62.1.5 发酵产酶培养基的正交实验 62.2 产酶条件的优化 72.2.1 温度对产酶的影响 7
2、2.2.2 接种量对产酶的影响 82.2.3 pH 对产酶的影响 .82.2.4 转速对产酶的影响 93 结果与分析与展望 9参考文献 11致 谢 13武汉生物工程学院学士学位论文（设计） II多粘芽孢杆菌产甘露聚糖酶的发酵条件研究摘 要-甘露聚糖是自然界中广泛存在的一类半纤维素。- 甘露聚糖酶可以水解葡萄甘露聚糖、半乳甘露聚糖、半乳葡甘露聚糖以及甘露聚糖等一大类半纤维素，形成能被较好利用的低聚糖。半纤维素被彻底分解且不造成污染的一条有效的途径，就是利用酶的水解作用。本文以多粘芽孢杆菌为菌种，对多粘芽孢杆菌产 -甘露聚糖酶发酵工艺条件进行了研究。通过单因素及正交试验优化分别从培养基和培养条件两
3、方面，考查了不同因素对菌株发酵产酶的影响。主要研究结果如下：菌株产酶最佳培养基组成为（g/L）：2.25% 魔芋粉+1.25%酵母膏+0.15%MgSO 47H2O+0.3%K2HPO43H2O。产酶最适培养条件为：初始 pH 值 9.0，接种量为 6 %，摇床转数 220 rpm， 33振荡培养 28h 可达到产酶高峰。关键词-甘露聚糖酶； 发酵条件； 多粘芽孢杆菌； 正交优化武汉生物工程学院学士学位论文（设计） IIIThe study of fermentation conditions of producing -mannanase by bacillus polymyxaAbstra
4、ct-mannan,a class of hemicellulose, exist widely in the nature. -mannanase can hydrolyze grape mannan,galactomannan, glucomannan,and galactomnnan mannose such a large class of hemicellulose, the formation of oligosaccharides can be better utilized. Hemicellulose was completely decompose without poll
5、uting an effective ay is to use enzyme hydrolysis. In this paper, making bacillus polymyxa as the bacteria, studies fermentation conditions of producing -mannanase by bacillus polymyxa. Form culture conditions and culture time,examines the different factors influences on the strains fermentation, by
6、 single factor and orthogonal experimental design The main finding are as follows:The fermentation conditions were optimized in order to improve the production of the enzyme: 2.25% konjac + 1.0% yeast extract +0.15% MgSO47H2O+ 0.3%K2HPO43H2O; The optimal culture conditions for -mannanase were initia
7、l pH 9.0, inoculation volume6%, agitation speed 240 rpm. After incubation at 33 , the enzyme showed the highest activity. Key words-mannanase; fermentationconditions; Bacillus polymyx ; orthogonal optimization武汉生物工程学院学士学位论文（设计） 1引言-甘露聚糖酶(-1, 4-D-mannan mannanohyd-rolase；EC 3.2.1.78)是一种半纤维素水解酶，降解产物的非
8、还原末端为甘露糖，其作用底物包括葡萄甘露聚糖、半乳甘露聚糖及 -甘露聚糖等，能消除甘露聚糖对单胃动物各种营养素的抗营养作用 1。-甘露聚糖酶存在于一些低等动物的肠道分泌液中，豆类植物如四棱豆，长角豆等萌发的种子中，天南星科植物魔芋萌发的球茎中都发现了酶活性的存在 2。而微生物更是产生 -甘露聚糖酶的主要来源，且具有活力高、成本低、来源稳定、提取方便等明显优点 3。自 1958 年 Counios 第一次报道了能产生 -甘露聚糖酶的真菌后，不少学者投入到 -甘露聚糖酶的研究中去。从事的方面有产酶菌株的筛选 4-9、基因诱变 10-13，酶晶体结构分析14，分子生物学结构分析 15以及培养基成分与
9、条件的优化 16-18等都取得了突破性成果。其中以培养基和培养条件优化的研究最为激烈。随着近年来对自然界半纤维素资源的大力开发和甘露低聚糖药用价值 19,20等其他价值的发现，-甘露聚糖酶也越来越受重视。针对 -甘露聚糖酶的基础研究也进入一个新高潮，其在人类生活中的应用越来越广泛。-甘露聚糖酶是一种半纤维素水解酶，具有多种生物学功能。-甘露聚糖酶可以用于糖链结构的分析，造纸工业，纺织工业，石油工业和饲料工业等。如在饲料工业中 21-25甘露聚糖酶主要作为外源性酶参与机体活动。另外，随着抗生素带来的农药残留问题，甘露聚糖和甘露聚糖酶对动物健康和生产性能的促进作用某种程度上已成为抗生素的替代产品。
10、-甘露聚糖酶有着广阔的应用价值和前景，这是人们一直不懈地探索研究 -甘露聚糖酶巨大推动力。但由于 -甘露聚糖酶活性水平普遍较低，限制了其在实际生产中的应用，且对于多粘芽孢杆菌产 -甘露聚糖酶的研究较少。本研究以多粘芽孢杆菌为生产菌株，通过具体实验研究对多粘芽孢杆菌产 -甘露聚糖酶的培养条件和培养基成分进行优化设计，并到实验结果。1 材料与方法1.1 实验材料1.1.1 菌种多粘芽孢杆菌 武汉生物工程学院发酵实验室提供1.1.2 主要仪器设备数显恒温水浴锅 HH-2 国华电器有限公司电子万用炉 北京市永光明医疗仪器厂SPX150BZ 型生化培养箱 上海博讯实业有限公司医疗设备厂 武汉生物工程学院
11、学士学位论文（设计） 2手提式不锈钢蒸汽消毒器 YX280A 上海三申医疗器械有限公司HQ45Z 恒温摇床 武汉中科科仪技术发展有限责任公司2020B 型电热恒温干燥箱 天津市泰斯特仪器有限公司BSC1300A/B3 生物洁净安全柜 上海博讯实业有限公司医疗设备厂笔式 PH 计 0.1 级 杭州市奥立龙仪器有限公司电子天平（max120g） 北京赛多利斯仪器系统有限公司80Bl 离心机 常州国华电器有限公司TU1810 紫外可见分光光度计 北京市普析通用仪器有限责任公司1.1.3 药品、试剂及配制1.1.3.1 药品与试剂魔芋粉、麸皮 从市场购买 马铃薯淀粉、酵母膏、胰蛋白胨 北京市奥博星生物
12、技术有限公司葡萄糖 湖南湘大化工试剂有限公司乳糖、氯化钠、无水亚硫酸钠、乙冰酸 天津市博迪化工有限公司硝酸铵、硫酸镁、硫酸铵 洛阳市化学试剂厂尿素、酒石酸钾钠 天津市化学试剂三厂牛肉浸膏 天津市英博化学试剂有限公司磷酸氢二钾 天津石英中厂霸州市化工分厂乙酸钠、苯酚 武汉市江北化学试剂有限责任公司3，5二硝基水杨酸 浙江湖州食品化工联合公司氢氧化钠 天津市风船化学试剂科技有限公司磷酸二氢钾 中国中湘地质实验研究所琼脂粉 上海山浦化工有限公司甘露糖 国药集团化学试剂有限公司1.1.3.2 药品配置（1）DNS 试剂配置称取 182g 酒石酸钾钠溶于 500ml 蒸馏水中，45下溶解，依次加入 3，
13、5- 二硝基水杨酸 6.3g、NaOH 21g、苯酚 5g、亚硫酸钠 5g，逐步搅拌至溶解，冷却后用蒸馏水定容至l000ml，存于棕色瓶中，室温下放置两周后使用。（2）0.5%魔芋胶溶液配制称取 0.5g 魔芋粉，加 入 100ml 乙酸- 乙酸钠缓冲液，可置于摇床中 200rpm，34h。常 温下三天内可用。（3）pH5.5 乙酸-乙酸钠缓冲液制备称取三水乙酸钠 11.57g，加入 0.85ml 冰乙酸，再加蒸馏水定容至 1000ml，测定 pH 值。如果偏离 5.5，则用 0.1mol/L 的乙酸或乙酸钠溶液调至 5.5。置于 4冰箱中备用。武汉生物工程学院学士学位论文（设计） 31.2
14、实验方法1.2.1 培养基及条件(1) 斜面活化培养基及条件葡萄糖 1.0%，氯化钠 0.05%，麸皮 1.0%，牛肉膏 0.1%，磷酸二氢钾 0.3%，磷酸氢二钠 0.5%，琼脂粉 1.8%，pH=7.5，35恒温培养 5d。(2) 液体种子培养基及条件魔芋粉 0.5%，酵母膏 1.0%，硫酸镁 0.1%，磷酸氢二钾 0.5%，硫酸铵1.0%， pH=7.5，35，200rpm ，摇床 24h。(3) 基础产酶培养基魔芋粉 0.5%，蛋白胨 1.0%，磷酸氢二钾 0.2%，硫酸镁 0.1%，硫酸铵1.0%，pH=7.0，35，200rpm ，摇床 28h1.2.2 粗酶液的制备将摇瓶后的菌液
15、部分倒入离心管中，在 3000rpm 下离心 15min，所得到的上清液即为粗酶液。1.2.3 酶活的定义在 37 下，pH 值为 5.5 的条件下，每分钟从浓度为 3mg/ml 的甘露聚糖（Sigma G0753）溶液中降解释放 1umol 还原糖所需要的酶量为一个酶活力单位 u。1.2.4 酶活的测定本实验采用 DNS 法测定。取 0.9ml 0.5%的魔芋胶溶液， 37水浴预热 5min，然后加入经适当稀释的粗酶液0.1ml，37准确反应 30min，立即加入 1ml DNS 试剂，沸水浴显色 5min，冷却后，测定540nm 处吸光度值。空白对照先加 DNS 试剂后加粗酶液。2 实验结
16、果2.1 产酶培养基的优化2.1.1 碳源的优化碳源是构成菌体细胞以及供给细胞代谢的物质基础，并供给菌体生命活动所需要的能量，是微生物生长代谢的重要成分之一。本实验利用基础产酶培养基进行摇瓶培养，分别取用魔芋粉、葡萄糖、乳糖和马铃薯淀粉作为碳源，对产酶量进行研究，每组做三个平行，酶活取平均值。实验结果如图2-1所示。武汉生物工程学院学士学位论文（设计） 4020406080100120魔 芋 粉 马 铃 薯 淀 粉 葡 萄 糖 乳 糖甘露聚糖酶相对酶活(%)图 2-1 不同碳源对发酵产酶的影响-甘露聚糖酶为胞外诱导型酶，培养基中含有外源诱导物(- 甘露聚糖) 时，才进行- 甘露聚糖酶的合成。对
17、实验结果进行分析，得到以魔芋粉为碳源时，酶活力最高，所以其最适碳源为魔芋粉。确定最佳碳源的种类后，以魔芋粉为碳源进行浓度实验。分别设定0.5%、 1.0%、 1.5%、2.0%和 2.5%作为浓度梯度，每组做三个平行，酶活取平均值。结果表明，魔芋粉的质量浓度在0.5% 至2.0% 之间，- 甘露聚糖酶活力较高随浓度升高而升高，在2.0%达到最佳值。超过2.0%后，酶的活力迅速下降。但也可能在实验过程中，魔芋粉浓度增大，吸胀强度变大，高温高压灭菌时培养基易鼓胀而浸出，且培养基粘度增大，溶氧量减少，不利于菌株的产酶。所以魔芋粉的浓度不宜过高，应维持在较低的水平。实验结果如图2-2 所示。02040
18、60801001200 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5魔 芋 粉 含 量 (%)甘露聚糖酶相对酶活(%)图2-2 不同的魔芋粉浓度对产酶的影响2.1.2 氮源的优化氮源是菌体生长代谢的主要结构物质和能源物质，分为无机氮源和有机氮源。常用的有机氮源主要有酵母膏、胰蛋白胨、牛肉膏等，常用的无机氮源主要有硫酸铵、硝酸铵以武汉生物工程学院学士学位论文（设计） 5及尿素等。本次实验用不同种类的氮源共六种，进行摇瓶培养产酶实验，每组做三个平行，酶活取平均值。实验结果如图2-3所示。020406080100120硝 酸铵酵 母膏 尿 素胰 蛋白 胨 硫 酸 铵 牛 肉 膏氮 源 种 类 (1.0
19、%)甘露聚糖酶相对酶活(%)图2-3 不同氮源对发酵产酶的影响在不同的氮源种类中，有机氮源产酶效果优于无机氮源。有机氮源中又以酵母膏对产酶的促进作用最大，因此多粘芽孢杆菌产-甘露聚糖酶的 最佳氮源为酵母膏。确定酵母膏为最佳氮源后，以不同浓度梯度的酵母膏为变量。分别以0.5%、 1.0%、 1.5%、2.0%、 2.5%进行实验，每组做三个平行，酶活取平均值，所得实验结果如图2-4 所示。当酵母膏的浓度在 1.0%时酶活最大，因此最佳氮源为 1.0%的酵母膏。0204060801001200 1 2 3酵 母 膏 浓 度 （ %）甘露聚糖酶相对酶活（%）图2-4 酵母膏浓度对发酵产酶的影响2.1
20、.3 磷酸二氢钾浓度的优化磷酸二氢钾以及硫酸镁在微生物培养基中都是作为无机盐起作用，不仅可以为菌体的生长代谢提供无机离子，还能够起到稳定渗透压的作用。本次实验以基本培养基为基础，改变磷酸二氢钾的浓度，进行摇瓶发酵培养，实验结果如图2-5所示，当磷酸二氢钾的浓度在0.3%的时候多粘芽孢杆菌产 -甘露聚糖酶的相对酶活最高。武汉生物工程学院学士学位论文（设计） 60204060801001200 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5磷 酸 二 氢 钾 浓 度 （ %）甘露聚糖酶相对酶活（%）图 2-5 磷酸二氢钾浓度对发酵产酶的影响2.1.4 硫酸镁浓度的优化同样以基本培养基为基础，以硫酸镁的浓度
21、为变量进行遥瓶发酵实验，分别取硫酸镁0.1%、0.2% 、0.3% 、0.4%，每组做三个平行，最后取平均值，所得实验结果如图 2-6，产酶培养基中硫酸镁的最佳浓度在 0.2%。0204060801001200 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5硫 酸 镁 浓 度 （ %）甘露聚糖酶相对酶活（%）图 2-6 硫酸镁浓度对发酵产酶的影响2.1.5 发酵产酶培养基的正交实验以上述实验为基础，为综合考察培养基各组分因素对产酶的影响，因素进行4因素3水平的正交实验L 9（3 4）（见表1）。进行L 9（3 4）正交实验结果见表2.表2-1 产甘露聚糖酶培养基正交实验的因素水平表因素水平魔芋粉:A
22、酵母膏 :B 硫酸镁 :C 磷酸氢二钾:D1 1.75% 0.75% 0.15% 0.25%2 2.0% 1.0% 0.20% 0.30%3 2.25% 1.25% 0.25% 0.35%武汉生物工程学院学士学位论文（设计） 7表2-2 L9（3 4）培养基成分优化正交试验结果编号 A B C D 甘露聚糖酶相对酶活(%)1 1 1 1 1 40.92 1 2 2 2 703 1 3 3 3 23.64 2 1 2 3 54.45 2 2 3 1 106 2 3 1 2 86.67 3 1 3 2 89.98 3 2 1 3 1009 3 3 2 1 84.0K1 134.5 185.2 22
23、7.5 134.9K2 151 180.0 208.4 246.5K3 276.5 194.2 123.5 178R 132.0 14.2 104 110.6通过极差分析，以甘露聚糖酶活为发酵条件优化的指标，培养基成分影响力由大到小排列顺序为：A(魔芋粉)D(磷酸氢二钾)C (硫酸镁) B(酵母膏)，从而的到最佳培养基配方为：2.25%魔芋粉、1.25%酵母膏、0.3%磷酸氢二钾、0.15%硫酸镁。以优化后的培养基做产酶发酵实验，实验结果为酶活比优化前提高了16%。2.2 产酶条件的优化培养条件是影响菌体生长代谢的重要因素，其对菌体产酶的影响主要表现在两方面，一是影响产物生成量，二是影响产物合
24、成方向。同一种菌株在不同的外界条件下可能按照不同的途径合成多种酶和代谢产物，要得到较多的目的产物，必须严格控制好培养条件。2.2.1 温度对产酶的影响608010012025 28 31 34 37 40温 度 （ ）甘露聚糖酶相对酶活（%）图 2-7 不同摇瓶温度对发酵产酶的影响培养温度是影响发酵过程的重要因素，必需控制好发酵温度，使代谢向目的产物方向武汉生物工程学院学士学位论文（设计） 8进行。本研究将培养温度设定为六个梯度，即 28、30、33、35 、37、39，每组做三个平行，酶活取平均值，所得结果如图 2-7 所示，温度在 33左右时，-甘露聚糖酶酶活达到最高值。2.2.2 接种量
25、对产酶的影响接种量对菌体细胞产酶状况也有影响，接种量过少，菌体难以生存，接种量过多又会导致菌体大量繁殖，不易积累代谢产物。实验结果如图 2-8 所示，随着接种量的增加，甘露聚糖酶的活性逐渐增加。接种量为 6%时，酶的活性达到最大值；然而接种量继续增加时，甘露聚糖酶的活性有所下降。因此接种量在 6%左右时最有利于产酶。0204060801001200 2 4 6 8 10 12 14接 种 量 （ %）甘露聚糖酶相对酶活（%）图 2-8 不同接种量对产酶的影响2.2.3 pH 对产酶的影响初始 pH 对发酵条件的影响与温度类似，也可以改变代谢方向，影响到目的产物的积累。0204060801001
26、205.5 6.5 7.5 8.5 9.5 10.5pH甘露聚糖酶相对酶活（%）图 2-9 不同初始 pH 对发酵产酶的影响不同菌株的发酵最佳初始pH 值相差较大。本次实验共设定6、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10共8个梯度，每个梯度做三个平行，最终结果取武汉生物工程学院学士学位论文（设计） 9平均值，结果见图2-9。由图可知，初始 pH值为9.0时，甘露聚糖酶的相对酶活最高，即最利于菌体产酶，此时为碱性环境。2.2.4 转速对产酶的影响摇床转速主要是影响发酵过程中的通气量，从而控制溶氧量，因此不同的摇床转速可导致菌体发酵产酶的能力不同。本实验中分别以160rpm、
27、180rpm、200rpm 、 220rpm、240rpm、260rpm 、 280 rpm 的转速研究其对菌体产酶的影响，结果如图 2-11 所示，转速在 220rpm 时，对产酶最有利。020406080100120160 180 200 220 240 260 280 300转 速 （ rpm）甘露聚糖酶相对酶活（%）图 2-10 不同转速对发酵产酶影响3 结果分析与展望本文以获得培养基中碳源、氮源等能源物质的添加直接影响其产酶能力，培养温度、初始 pH 等环境因素与菌株产酶力也息息相关。种量、初始 pH 等因子进行了分析，最终提高了菌株产 -甘露聚糖酶的能力。（1）-露聚糖酶属于胞外诱
28、导酶，在对有关嗜碱芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、黑曲霉菌等菌株发酵优化的研究报道中，都有魔芋粉为最优诱导产酶底物的结论。本实验的结果与上述结论一致，可见魔芋粉是产 -甘露聚糖酶菌株液体发酵中普遍最佳的碳源。研究认为，对于以魔芋粉为碳源的培养基，多粘芽孢杆菌利用魔芋粉产酶应有更大的提升空间。较高的碳源含量有利于菌株的生长，也使产酶稳定性增加；但在实验过程中发现，魔芋粉含量过高时，培养基过于黏稠甚至成凝胶状，首先吸胀作用增加了灭菌难度，其次会导致供氧不足而抑制菌株的生长及产酶。因此 2.25%的魔芋粉已经达到了最高利用水平。氮源是构成细胞原生质和酶蛋白的主要原料。本研究表明多粘芽孢杆菌产 -甘露聚糖酶发
29、酵过程中，有机氮源明显优于无机氮源，猜测这种情况与有机氮源的利用使培养基的 pH 有所升高，而无机氮源中的铵盐被分解利用后培养基的 pH 下降有关。而这一结果与武汉生物工程学院学士学位论文（设计） 10后面的初始 pH 的单因子实验相符。在有机氮源中又以酵母膏为最佳氮源，可能在酵母膏中有某种特殊成分，该成分能刺激产酶发酵。因此最后确定的最佳氮源为 1.0%的酵母膏。硫酸镁和磷酸氢二钾是微生物生长和产酶必不可少的无机盐成分。无机盐有提供微量元素、调节渗透压和 pH 的作用。不同的菌体产同一种酶，以及同一种菌体产不同的酶所需要的无机盐条件都不同。本研究通过单因子实验得到的硫酸镁和磷酸氢二钾的浓度分
30、别为 0.2%和 0.3%。（2）在微生物的发酵条件中，温度是影响微生物生长和存活的重要因素之一，不同的微生物对温度的要求和敏感性都不同。当微生物处于最适温度时，能刺激微生物的生长作用并提高产酶；温度过高或者过低都会降低酶活，过高时甚至会引起蛋白质变性，导致菌体死亡。本研究得到粘芽孢杆菌在 33时，所产 -甘露聚糖酶的酶活最高。环境的酸碱度对发酵的影响不仅在于改变基质代谢速率，有时甚至可以改变代谢途径及细胞机构 。不同菌株的发酵最佳其初始 pH 相差较大，多粘芽孢杆菌产 -甘露聚糖酶发酵，初始 pH 值为 9.0 时，甘露聚糖酶的相对酶活最高，即最利于菌体产酶，此时为碱性环境。转速和接种量也能
31、够影响产酶。转速影响的是发酵过程中的通气量，即溶氧量。因此转速应按实际情况和目的进行调节。接种量的大小决定生产菌种在摇瓶发酵中的生长情况。接种量过大或者过小，均会影响发酵。过小会使菌种难以度过调整期，过多移入代谢废物，不经济，也会延长培养时间，降低发酵罐的生产率而延长发酵时间。过大会使菌体大量生长，引起溶氧不足，不利于代谢产物合成。本研究发现多粘芽孢杆菌产 -甘露聚糖酶转速在 220rpm，接种量在 6%时，产 - 甘露聚糖酶的酶活最高。此外，培养时间和装液量对实验结果没有太大的影响。但是装液量不可过多或过少，过多不利于灭菌和溶氧，过少不利于菌株生长，一般采用 50ml/250ml；而培养时间
32、要注意够产酶发酵，也要防止时间过长而菌液急剧减少和积累有害代谢物，所以最好应控制在2435h 之间。（3）本研究通过对培养基以及培养条件的优化，确定了多粘芽孢杆菌产 -甘露聚糖酶的最佳培养基和最佳培养条件。最佳培养基为：2.25% 魔芋粉+1.25%酵母膏+0.15% MgSO47H2O +0.3% K2HPO43H2O；最佳培养条件为：温度 33，初始 pH 值 9.0，接种量为 6 %，摇床转数 220rpm，装液量 50ml/250ml、摇瓶时间 28h。在此条件下进行验证实验得到酶活可达 356.54u/g。（4）近年来 -甘露聚糖酶工业应用领域逐渐拓展，国内外对 - 甘露聚糖酶的研究
33、取得了一定的进展,获得了一系列重要成果和较好的经济和社会效益。半纤维素在蓬勃发展的生物技术产业中扮演着举足轻重的角色,但目前关于半纤维素酶的研究主要关注木聚糖水解酶,与之相比,-甘露聚糖酶的研究没有得到足够重视。为了使 - 甘露聚糖酶更好的服务于生产生活的各个相关领域，我们应该在已有成果的基础上继续推进对 -甘露聚糖酶研究。一方面，从动植物和微生物中,特别是微生物中寻找性质优良的 -甘露聚糖酶。同时武汉生物工程学院学士学位论文（设计） 11充分利用结构生物学手段,加深对其结构和功能的认识。另一方面，应不断提高产酶菌株的产酶水平或构建外源高表达体系,掌握 -甘露聚糖酶合成的调控机理进而推动工业化
34、推广应用。参考文献1 李桂伶. 芽孢杆菌所产 -甘露聚糖酶牲质研究J. 饲料广角, 2009, 1:2-3.2 Millane RP,Hendrixson TL. Crystal structures of mannan and glucomannans. Carbohydr. Polym. 1994, 25:245-251.3 Oda Y, Komaki T, Tonomura K. Production of -mannanase and -mannosidase by Enterococcus casseliflavus FL2121 isolated from decayed Konj
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38、 of alkaline mannanase from an alkaliphilic Bacillus isolate.Acta Crystallogr D Biol Crystallogr. 武汉生物工程学院学士学位论文（设计） 122004,60:1490-2.15 毛绍名, 章怀云. -甘露聚糖酶分子生物学研究进展J. 生物技术通讯, 2006, 17(6): 995-997. 16 陈小兵, 丁宏标, 乔宇. -甘露聚糖酶的酶学性质、工农业应用及基因工程研究 J. 中国生物工程杂志, 2005:156-159.17 李 斌, 刘正初 , 王溪森等 . -甘露聚糖酶基因高效表达体系的构
39、建J. 湖北农业科学2009,45(8):1807-1810.18 殷莹莹, 谢达平, 戴晓阳 -甘露聚糖酶高产基因工程菌株发酵条件优化J. 湖南农业科学 2009, (4):5-10.19 徐红蕊. -甘露聚糖酶之国内外最新研究概况J. 湖南饲料, 2008, 2: 30-32.20 张彩 ,杨文博, 佟树敏等. -甘露聚糖酶研究概况J. 微生物学研究与应用,1995,(1):34- 37.21 邬敏辰.微生物 -甘露聚糖酶的生产与应用J.中国商办工业,200l,(5):46-47.22 向冰冰, 崔岱宗. -甘露聚糖酶的营养功能及其在动物饲料中的应用J. 农产品加工, 2009, (05)
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