1、微生物学专业优秀论文 复合 干扰素发酵特性与稳定性研究关键词：重组复合 干扰素 发酵工艺 二硫键 聚合反应 降解机制摘要：本课题重点研究重组复合干扰素(cIFN)不稳定性的机制，同时探索抑制发酵过程中 cIFN 降解与聚合的有效方法。首先研究了利用复合培养基在低温条件下发酵表达 cIFN。然后为了确定 cIFN 降解与聚合的原因，文章重点研究了环境因素(温度、pH、搅拌)对 cIFN 自身稳定性的影响。蛋白质在溶液中的稳定性与溶液环境密切相关，温度、pH、振动、剪切、表面吸附等环境因素对蛋白质的聚合与降解都有影响，但是发酵环境是一个相当复杂的体系，除上述因素之外，发酵液中还存在动态变化的酵母细
2、胞以及细胞裂解释放的各种蛋白质和蛋白酶，在这样复杂的发酵液环境下很难考察某种环境因素对 cIFN 聚合与降解影响程度和作用方式。本课题采用“离体”方法，即在没有酵母细胞和其他蛋白干扰的非发酵状态下，模拟发酵液中部分理化因素(培养温度、发酵液 pH、搅拌)对分离纯化后的 cIFN 的稳定性影响，为进一步分析发酵状态下 cIFN 发生聚合和降解的机理提供依据和指导。 研究发现利用复合培养基在 15下诱导完全抑制了 cIFN 的降解，在此基础上通过添加 Tween-80 抑制疏水聚合，由此较好解决了 cIFN 在利用 P.pastoris 表达时稳定性差的问题。 “离体”实验结果表明环境因素会对蛋白
3、质本身造成不同程度的稳定性影响，其中温度对 cIFN稳定性影响程度最严重，40下 cIFN 会发生严重的聚合与降解。pH 的改变不会引起 cIFN 立即聚合与降解，但是在 pH 为 3.0 的溶液中 cIFN 不稳定，后期cIFN 出现大量的聚合与降解。而震荡只会影响 cIFN 的聚合，对降解影响不明显。进一步研究发现 cIFN 分子内二硫键的断裂是造成发酵上清液在 SDS-PAGE上形成三条 cIFN 单体带的主要原因，三条带分别为结构完整的具有两条分子内的二硫键的 cIFN 条带；只具有一条二硫键的 cIFN 单体条带；不含二硫键的 cIFN 单体。研究还发现正是二硫键的断裂才造成了发酵和
4、分离纯化过程中出现严重的聚合与降解现象，并且结构的轻微变化就会对 cIFN 的稳定性造成致命影响。此外本课题还对二硫键断裂引起的聚合体类型进行了比较详细的分析与研究。证实了发酵过程中形成的 cIFN 二硫键异构体，诱导 cIFN 形成非共价键聚合体和共价键聚合体，同时也使得 cIFN 更容易被蛋白酶降解。正文内容本课题重点研究重组复合干扰素(cIFN)不稳定性的机制，同时探索抑制发酵过程中 cIFN 降解与聚合的有效方法。首先研究了利用复合培养基在低温条件下发酵表达 cIFN。然后为了确定 cIFN 降解与聚合的原因，文章重点研究了环境因素(温度、pH、搅拌)对 cIFN 自身稳定性的影响。蛋
5、白质在溶液中的稳定性与溶液环境密切相关，温度、pH、振动、剪切、表面吸附等环境因素对蛋白质的聚合与降解都有影响，但是发酵环境是一个相当复杂的体系，除上述因素之外，发酵液中还存在动态变化的酵母细胞以及细胞裂解释放的各种蛋白质和蛋白酶，在这样复杂的发酵液环境下很难考察某种环境因素对 cIFN 聚合与降解影响程度和作用方式。本课题采用“离体”方法，即在没有酵母细胞和其他蛋白干扰的非发酵状态下，模拟发酵液中部分理化因素(培养温度、发酵液 pH、搅拌)对分离纯化后的 cIFN 的稳定性影响，为进一步分析发酵状态下 cIFN 发生聚合和降解的机理提供依据和指导。 研究发现利用复合培养基在 15下诱导完全抑
6、制了 cIFN 的降解，在此基础上通过添加 Tween-80 抑制疏水聚合，由此较好解决了 cIFN 在利用 P.pastoris 表达时稳定性差的问题。 “离体”实验结果表明环境因素会对蛋白质本身造成不同程度的稳定性影响，其中温度对 cIFN 稳定性影响程度最严重，40下 cIFN 会发生严重的聚合与降解。pH 的改变不会引起 cIFN 立即聚合与降解，但是在 pH 为 3.0 的溶液中 cIFN 不稳定，后期cIFN 出现大量的聚合与降解。而震荡只会影响 cIFN 的聚合，对降解影响不明显。进一步研究发现 cIFN 分子内二硫键的断裂是造成发酵上清液在 SDS-PAGE上形成三条 cIFN
7、 单体带的主要原因，三条带分别为结构完整的具有两条分子内的二硫键的 cIFN 条带；只具有一条二硫键的 cIFN 单体条带；不含二硫键的 cIFN 单体。研究还发现正是二硫键的断裂才造成了发酵和分离纯化过程中出现严重的聚合与降解现象，并且结构的轻微变化就会对 cIFN 的稳定性造成致命影响。此外本课题还对二硫键断裂引起的聚合体类型进行了比较详细的分析与研究。证实了发酵过程中形成的 cIFN 二硫键异构体，诱导 cIFN 形成非共价键聚合体和共价键聚合体，同时也使得 cIFN 更容易被蛋白酶降解。本课题重点研究重组复合干扰素(cIFN)不稳定性的机制，同时探索抑制发酵过程中 cIFN 降解与聚合
8、的有效方法。首先研究了利用复合培养基在低温条件下发酵表达 cIFN。然后为了确定 cIFN 降解与聚合的原因，文章重点研究了环境因素(温度、pH、搅拌)对 cIFN 自身稳定性的影响。蛋白质在溶液中的稳定性与溶液环境密切相关，温度、pH、振动、剪切、表面吸附等环境因素对蛋白质的聚合与降解都有影响，但是发酵环境是一个相当复杂的体系，除上述因素之外，发酵液中还存在动态变化的酵母细胞以及细胞裂解释放的各种蛋白质和蛋白酶，在这样复杂的发酵液环境下很难考察某种环境因素对 cIFN 聚合与降解影响程度和作用方式。本课题采用“离体”方法，即在没有酵母细胞和其他蛋白干扰的非发酵状态下，模拟发酵液中部分理化因素
9、(培养温度、发酵液 pH、搅拌)对分离纯化后的 cIFN 的稳定性影响，为进一步分析发酵状态下 cIFN 发生聚合和降解的机理提供依据和指导。 研究发现利用复合培养基在 15下诱导完全抑制了 cIFN 的降解，在此基础上通过添加 Tween-80 抑制疏水聚合，由此较好解决了 cIFN 在利用 P.pastoris 表达时稳定性差的问题。 “离体”实验结果表明环境因素会对蛋白质本身造成不同程度的稳定性影响，其中温度对 cIFN 稳定性影响程度最严重，40下 cIFN 会发生严重的聚合与降解。pH 的改变不会引起cIFN 立即聚合与降解，但是在 pH 为 3.0 的溶液中 cIFN 不稳定，后期
10、 cIFN 出现大量的聚合与降解。而震荡只会影响 cIFN 的聚合，对降解影响不明显。进一步研究发现 cIFN 分子内二硫键的断裂是造成发酵上清液在 SDS-PAGE 上形成三条 cIFN 单体带的主要原因，三条带分别为结构完整的具有两条分子内的二硫键的 cIFN 条带；只具有一条二硫键的 cIFN 单体条带；不含二硫键的 cIFN单体。研究还发现正是二硫键的断裂才造成了发酵和分离纯化过程中出现严重的聚合与降解现象，并且结构的轻微变化就会对 cIFN 的稳定性造成致命影响。此外本课题还对二硫键断裂引起的聚合体类型进行了比较详细的分析与研究。证实了发酵过程中形成的 cIFN 二硫键异构体，诱导
11、cIFN 形成非共价键聚合体和共价键聚合体，同时也使得 cIFN 更容易被蛋白酶降解。本课题重点研究重组复合干扰素(cIFN)不稳定性的机制，同时探索抑制发酵过程中 cIFN 降解与聚合的有效方法。首先研究了利用复合培养基在低温条件下发酵表达 cIFN。然后为了确定 cIFN 降解与聚合的原因，文章重点研究了环境因素(温度、pH、搅拌)对 cIFN 自身稳定性的影响。蛋白质在溶液中的稳定性与溶液环境密切相关，温度、pH、振动、剪切、表面吸附等环境因素对蛋白质的聚合与降解都有影响，但是发酵环境是一个相当复杂的体系，除上述因素之外，发酵液中还存在动态变化的酵母细胞以及细胞裂解释放的各种蛋白质和蛋白
12、酶，在这样复杂的发酵液环境下很难考察某种环境因素对 cIFN 聚合与降解影响程度和作用方式。本课题采用“离体”方法，即在没有酵母细胞和其他蛋白干扰的非发酵状态下，模拟发酵液中部分理化因素(培养温度、发酵液 pH、搅拌)对分离纯化后的 cIFN 的稳定性影响，为进一步分析发酵状态下 cIFN 发生聚合和降解的机理提供依据和指导。 研究发现利用复合培养基在 15下诱导完全抑制了 cIFN 的降解，在此基础上通过添加 Tween-80 抑制疏水聚合，由此较好解决了 cIFN 在利用 P.pastoris 表达时稳定性差的问题。 “离体”实验结果表明环境因素会对蛋白质本身造成不同程度的稳定性影响，其中
13、温度对 cIFN 稳定性影响程度最严重，40下 cIFN 会发生严重的聚合与降解。pH 的改变不会引起cIFN 立即聚合与降解，但是在 pH 为 3.0 的溶液中 cIFN 不稳定，后期 cIFN 出现大量的聚合与降解。而震荡只会影响 cIFN 的聚合，对降解影响不明显。进一步研究发现 cIFN 分子内二硫键的断裂是造成发酵上清液在 SDS-PAGE 上形成三条 cIFN 单体带的主要原因，三条带分别为结构完整的具有两条分子内的二硫键的 cIFN 条带；只具有一条二硫键的 cIFN 单体条带；不含二硫键的 cIFN单体。研究还发现正是二硫键的断裂才造成了发酵和分离纯化过程中出现严重的聚合与降解
14、现象，并且结构的轻微变化就会对 cIFN 的稳定性造成致命影响。此外本课题还对二硫键断裂引起的聚合体类型进行了比较详细的分析与研究。证实了发酵过程中形成的 cIFN 二硫键异构体，诱导 cIFN 形成非共价键聚合体和共价键聚合体，同时也使得 cIFN 更容易被蛋白酶降解。本课题重点研究重组复合干扰素(cIFN)不稳定性的机制，同时探索抑制发酵过程中 cIFN 降解与聚合的有效方法。首先研究了利用复合培养基在低温条件下发酵表达 cIFN。然后为了确定 cIFN 降解与聚合的原因，文章重点研究了环境因素(温度、pH、搅拌)对 cIFN 自身稳定性的影响。蛋白质在溶液中的稳定性与溶液环境密切相关，温
15、度、pH、振动、剪切、表面吸附等环境因素对蛋白质的聚合与降解都有影响，但是发酵环境是一个相当复杂的体系，除上述因素之外，发酵液中还存在动态变化的酵母细胞以及细胞裂解释放的各种蛋白质和蛋白酶，在这样复杂的发酵液环境下很难考察某种环境因素对 cIFN 聚合与降解影响程度和作用方式。本课题采用“离体”方法，即在没有酵母细胞和其他蛋白干扰的非发酵状态下，模拟发酵液中部分理化因素(培养温度、发酵液 pH、搅拌)对分离纯化后的 cIFN 的稳定性影响，为进一步分析发酵状态下 cIFN 发生聚合和降解的机理提供依据和指导。 研究发现利用复合培养基在 15下诱导完全抑制了 cIFN 的降解，在此基础上通过添加
16、 Tween-80 抑制疏水聚合，由此较好解决了 cIFN 在利用 P.pastoris 表达时稳定性差的问题。 “离体”实验结果表明环境因素会对蛋白质本身造成不同程度的稳定性影响，其中温度对 cIFN 稳定性影响程度最严重，40下 cIFN 会发生严重的聚合与降解。pH 的改变不会引起cIFN 立即聚合与降解，但是在 pH 为 3.0 的溶液中 cIFN 不稳定，后期 cIFN 出现大量的聚合与降解。而震荡只会影响 cIFN 的聚合，对降解影响不明显。进一步研究发现 cIFN 分子内二硫键的断裂是造成发酵上清液在 SDS-PAGE 上形成三条 cIFN 单体带的主要原因，三条带分别为结构完整
17、的具有两条分子内的二硫键的 cIFN 条带；只具有一条二硫键的 cIFN 单体条带；不含二硫键的 cIFN单体。研究还发现正是二硫键的断裂才造成了发酵和分离纯化过程中出现严重的聚合与降解现象，并且结构的轻微变化就会对 cIFN 的稳定性造成致命影响。此外本课题还对二硫键断裂引起的聚合体类型进行了比较详细的分析与研究。证实了发酵过程中形成的 cIFN 二硫键异构体，诱导 cIFN 形成非共价键聚合体和共价键聚合体，同时也使得 cIFN 更容易被蛋白酶降解。本课题重点研究重组复合干扰素(cIFN)不稳定性的机制，同时探索抑制发酵过程中 cIFN 降解与聚合的有效方法。首先研究了利用复合培养基在低温
18、条件下发酵表达 cIFN。然后为了确定 cIFN 降解与聚合的原因，文章重点研究了环境因素(温度、pH、搅拌)对 cIFN 自身稳定性的影响。蛋白质在溶液中的稳定性与溶液环境密切相关，温度、pH、振动、剪切、表面吸附等环境因素对蛋白质的聚合与降解都有影响，但是发酵环境是一个相当复杂的体系，除上述因素之外，发酵液中还存在动态变化的酵母细胞以及细胞裂解释放的各种蛋白质和蛋白酶，在这样复杂的发酵液环境下很难考察某种环境因素对 cIFN 聚合与降解影响程度和作用方式。本课题采用“离体”方法，即在没有酵母细胞和其他蛋白干扰的非发酵状态下，模拟发酵液中部分理化因素(培养温度、发酵液 pH、搅拌)对分离纯化
19、后的 cIFN 的稳定性影响，为进一步分析发酵状态下 cIFN 发生聚合和降解的机理提供依据和指导。 研究发现利用复合培养基在 15下诱导完全抑制了 cIFN 的降解，在此基础上通过添加 Tween-80 抑制疏水聚合，由此较好解决了 cIFN 在利用 P.pastoris 表达时稳定性差的问题。 “离体”实验结果表明环境因素会对蛋白质本身造成不同程度的稳定性影响，其中温度对 cIFN 稳定性影响程度最严重，40下 cIFN 会发生严重的聚合与降解。pH 的改变不会引起cIFN 立即聚合与降解，但是在 pH 为 3.0 的溶液中 cIFN 不稳定，后期 cIFN 出现大量的聚合与降解。而震荡只
20、会影响 cIFN 的聚合，对降解影响不明显。进一步研究发现 cIFN 分子内二硫键的断裂是造成发酵上清液在 SDS-PAGE 上形成三条 cIFN 单体带的主要原因，三条带分别为结构完整的具有两条分子内的二硫键的 cIFN 条带；只具有一条二硫键的 cIFN 单体条带；不含二硫键的 cIFN单体。研究还发现正是二硫键的断裂才造成了发酵和分离纯化过程中出现严重的聚合与降解现象，并且结构的轻微变化就会对 cIFN 的稳定性造成致命影响。此外本课题还对二硫键断裂引起的聚合体类型进行了比较详细的分析与研究。证实了发酵过程中形成的 cIFN 二硫键异构体，诱导 cIFN 形成非共价键聚合体和共价键聚合体
21、，同时也使得 cIFN 更容易被蛋白酶降解。本课题重点研究重组复合干扰素(cIFN)不稳定性的机制，同时探索抑制发酵过程中 cIFN 降解与聚合的有效方法。首先研究了利用复合培养基在低温条件下发酵表达 cIFN。然后为了确定 cIFN 降解与聚合的原因，文章重点研究了环境因素(温度、pH、搅拌)对 cIFN 自身稳定性的影响。蛋白质在溶液中的稳定性与溶液环境密切相关，温度、pH、振动、剪切、表面吸附等环境因素对蛋白质的聚合与降解都有影响，但是发酵环境是一个相当复杂的体系，除上述因素之外，发酵液中还存在动态变化的酵母细胞以及细胞裂解释放的各种蛋白质和蛋白酶，在这样复杂的发酵液环境下很难考察某种环
22、境因素对 cIFN 聚合与降解影响程度和作用方式。本课题采用“离体”方法，即在没有酵母细胞和其他蛋白干扰的非发酵状态下，模拟发酵液中部分理化因素(培养温度、发酵液 pH、搅拌)对分离纯化后的 cIFN 的稳定性影响，为进一步分析发酵状态下 cIFN 发生聚合和降解的机理提供依据和指导。 研究发现利用复合培养基在 15下诱导完全抑制了 cIFN 的降解，在此基础上通过添加 Tween-80 抑制疏水聚合，由此较好解决了 cIFN 在利用 P.pastoris 表达时稳定性差的问题。 “离体”实验结果表明环境因素会对蛋白质本身造成不同程度的稳定性影响，其中温度对 cIFN 稳定性影响程度最严重，4
23、0下 cIFN 会发生严重的聚合与降解。pH 的改变不会引起cIFN 立即聚合与降解，但是在 pH 为 3.0 的溶液中 cIFN 不稳定，后期 cIFN 出现大量的聚合与降解。而震荡只会影响 cIFN 的聚合，对降解影响不明显。进一步研究发现 cIFN 分子内二硫键的断裂是造成发酵上清液在 SDS-PAGE 上形成三条 cIFN 单体带的主要原因，三条带分别为结构完整的具有两条分子内的二硫键的 cIFN 条带；只具有一条二硫键的 cIFN 单体条带；不含二硫键的 cIFN单体。研究还发现正是二硫键的断裂才造成了发酵和分离纯化过程中出现严重的聚合与降解现象，并且结构的轻微变化就会对 cIFN
24、的稳定性造成致命影响。此外本课题还对二硫键断裂引起的聚合体类型进行了比较详细的分析与研究。证实了发酵过程中形成的 cIFN 二硫键异构体，诱导 cIFN 形成非共价键聚合体和共价键聚合体，同时也使得 cIFN 更容易被蛋白酶降解。本课题重点研究重组复合干扰素(cIFN)不稳定性的机制，同时探索抑制发酵过程中 cIFN 降解与聚合的有效方法。首先研究了利用复合培养基在低温条件下发酵表达 cIFN。然后为了确定 cIFN 降解与聚合的原因，文章重点研究了环境因素(温度、pH、搅拌)对 cIFN 自身稳定性的影响。蛋白质在溶液中的稳定性与溶液环境密切相关，温度、pH、振动、剪切、表面吸附等环境因素对
25、蛋白质的聚合与降解都有影响，但是发酵环境是一个相当复杂的体系，除上述因素之外，发酵液中还存在动态变化的酵母细胞以及细胞裂解释放的各种蛋白质和蛋白酶，在这样复杂的发酵液环境下很难考察某种环境因素对 cIFN 聚合与降解影响程度和作用方式。本课题采用“离体”方法，即在没有酵母细胞和其他蛋白干扰的非发酵状态下，模拟发酵液中部分理化因素(培养温度、发酵液 pH、搅拌)对分离纯化后的 cIFN 的稳定性影响，为进一步分析发酵状态下 cIFN 发生聚合和降解的机理提供依据和指导。 研究发现利用复合培养基在 15下诱导完全抑制了 cIFN 的降解，在此基础上通过添加 Tween-80 抑制疏水聚合，由此较好
26、解决了 cIFN 在利用 P.pastoris 表达时稳定性差的问题。 “离体”实验结果表明环境因素会对蛋白质本身造成不同程度的稳定性影响，其中温度对 cIFN 稳定性影响程度最严重，40下 cIFN 会发生严重的聚合与降解。pH 的改变不会引起cIFN 立即聚合与降解，但是在 pH 为 3.0 的溶液中 cIFN 不稳定，后期 cIFN 出现大量的聚合与降解。而震荡只会影响 cIFN 的聚合，对降解影响不明显。进一步研究发现 cIFN 分子内二硫键的断裂是造成发酵上清液在 SDS-PAGE 上形成三条 cIFN 单体带的主要原因，三条带分别为结构完整的具有两条分子内的二硫键的 cIFN 条带
27、；只具有一条二硫键的 cIFN 单体条带；不含二硫键的 cIFN单体。研究还发现正是二硫键的断裂才造成了发酵和分离纯化过程中出现严重的聚合与降解现象，并且结构的轻微变化就会对 cIFN 的稳定性造成致命影响。此外本课题还对二硫键断裂引起的聚合体类型进行了比较详细的分析与研究。证实了发酵过程中形成的 cIFN 二硫键异构体，诱导 cIFN 形成非共价键聚合体和共价键聚合体，同时也使得 cIFN 更容易被蛋白酶降解。本课题重点研究重组复合干扰素(cIFN)不稳定性的机制，同时探索抑制发酵过程中 cIFN 降解与聚合的有效方法。首先研究了利用复合培养基在低温条件下发酵表达 cIFN。然后为了确定 c
28、IFN 降解与聚合的原因，文章重点研究了环境因素(温度、pH、搅拌)对 cIFN 自身稳定性的影响。蛋白质在溶液中的稳定性与溶液环境密切相关，温度、pH、振动、剪切、表面吸附等环境因素对蛋白质的聚合与降解都有影响，但是发酵环境是一个相当复杂的体系，除上述因素之外，发酵液中还存在动态变化的酵母细胞以及细胞裂解释放的各种蛋白质和蛋白酶，在这样复杂的发酵液环境下很难考察某种环境因素对 cIFN 聚合与降解影响程度和作用方式。本课题采用“离体”方法，即在没有酵母细胞和其他蛋白干扰的非发酵状态下，模拟发酵液中部分理化因素(培养温度、发酵液 pH、搅拌)对分离纯化后的 cIFN 的稳定性影响，为进一步分析
29、发酵状态下 cIFN 发生聚合和降解的机理提供依据和指导。 研究发现利用复合培养基在 15下诱导完全抑制了 cIFN 的降解，在此基础上通过添加 Tween-80 抑制疏水聚合，由此较好解决了 cIFN 在利用 P.pastoris 表达时稳定性差的问题。 “离体”实验结果表明环境因素会对蛋白质本身造成不同程度的稳定性影响，其中温度对 cIFN 稳定性影响程度最严重，40下 cIFN 会发生严重的聚合与降解。pH 的改变不会引起cIFN 立即聚合与降解，但是在 pH 为 3.0 的溶液中 cIFN 不稳定，后期 cIFN 出现大量的聚合与降解。而震荡只会影响 cIFN 的聚合，对降解影响不明显
30、。进一步研究发现 cIFN 分子内二硫键的断裂是造成发酵上清液在 SDS-PAGE 上形成三条 cIFN 单体带的主要原因，三条带分别为结构完整的具有两条分子内的二硫键的 cIFN 条带；只具有一条二硫键的 cIFN 单体条带；不含二硫键的 cIFN单体。研究还发现正是二硫键的断裂才造成了发酵和分离纯化过程中出现严重的聚合与降解现象，并且结构的轻微变化就会对 cIFN 的稳定性造成致命影响。此外本课题还对二硫键断裂引起的聚合体类型进行了比较详细的分析与研究。证实了发酵过程中形成的 cIFN 二硫键异构体，诱导 cIFN 形成非共价键聚合体和共价键聚合体，同时也使得 cIFN 更容易被蛋白酶降解
31、。本课题重点研究重组复合干扰素(cIFN)不稳定性的机制，同时探索抑制发酵过程中 cIFN 降解与聚合的有效方法。首先研究了利用复合培养基在低温条件下发酵表达 cIFN。然后为了确定 cIFN 降解与聚合的原因，文章重点研究了环境因素(温度、pH、搅拌)对 cIFN 自身稳定性的影响。蛋白质在溶液中的稳定性与溶液环境密切相关，温度、pH、振动、剪切、表面吸附等环境因素对蛋白质的聚合与降解都有影响，但是发酵环境是一个相当复杂的体系，除上述因素之外，发酵液中还存在动态变化的酵母细胞以及细胞裂解释放的各种蛋白质和蛋白酶，在这样复杂的发酵液环境下很难考察某种环境因素对 cIFN 聚合与降解影响程度和作
32、用方式。本课题采用“离体”方法，即在没有酵母细胞和其他蛋白干扰的非发酵状态下，模拟发酵液中部分理化因素(培养温度、发酵液 pH、搅拌)对分离纯化后的 cIFN 的稳定性影响，为进一步分析发酵状态下 cIFN 发生聚合和降解的机理提供依据和指导。 研究发现利用复合培养基在 15下诱导完全抑制了 cIFN 的降解，在此基础上通过添加 Tween-80 抑制疏水聚合，由此较好解决了 cIFN 在利用 P.pastoris 表达时稳定性差的问题。 “离体”实验结果表明环境因素会对蛋白质本身造成不同程度的稳定性影响，其中温度对 cIFN 稳定性影响程度最严重，40下 cIFN 会发生严重的聚合与降解。p
33、H 的改变不会引起cIFN 立即聚合与降解，但是在 pH 为 3.0 的溶液中 cIFN 不稳定，后期 cIFN 出现大量的聚合与降解。而震荡只会影响 cIFN 的聚合，对降解影响不明显。进一步研究发现 cIFN 分子内二硫键的断裂是造成发酵上清液在 SDS-PAGE 上形成三条 cIFN 单体带的主要原因，三条带分别为结构完整的具有两条分子内的二硫键的 cIFN 条带；只具有一条二硫键的 cIFN 单体条带；不含二硫键的 cIFN单体。研究还发现正是二硫键的断裂才造成了发酵和分离纯化过程中出现严重的聚合与降解现象，并且结构的轻微变化就会对 cIFN 的稳定性造成致命影响。此外本课题还对二硫键
34、断裂引起的聚合体类型进行了比较详细的分析与研究。证实了发酵过程中形成的 cIFN 二硫键异构体，诱导 cIFN 形成非共价键聚合体和共价键聚合体，同时也使得 cIFN 更容易被蛋白酶降解。本课题重点研究重组复合干扰素(cIFN)不稳定性的机制，同时探索抑制发酵过程中 cIFN 降解与聚合的有效方法。首先研究了利用复合培养基在低温条件下发酵表达 cIFN。然后为了确定 cIFN 降解与聚合的原因，文章重点研究了环境因素(温度、pH、搅拌)对 cIFN 自身稳定性的影响。蛋白质在溶液中的稳定性与溶液环境密切相关，温度、pH、振动、剪切、表面吸附等环境因素对蛋白质的聚合与降解都有影响，但是发酵环境是
35、一个相当复杂的体系，除上述因素之外，发酵液中还存在动态变化的酵母细胞以及细胞裂解释放的各种蛋白质和蛋白酶，在这样复杂的发酵液环境下很难考察某种环境因素对 cIFN 聚合与降解影响程度和作用方式。本课题采用“离体”方法，即在没有酵母细胞和其他蛋白干扰的非发酵状态下，模拟发酵液中部分理化因素(培养温度、发酵液 pH、搅拌)对分离纯化后的 cIFN 的稳定性影响，为进一步分析发酵状态下 cIFN 发生聚合和降解的机理提供依据和指导。 研究发现利用复合培养基在 15下诱导完全抑制了 cIFN 的降解，在此基础上通过添加 Tween-80 抑制疏水聚合，由此较好解决了 cIFN 在利用 P.pastor
36、is 表达时稳定性差的问题。 “离体”实验结果表明环境因素会对蛋白质本身造成不同程度的稳定性影响，其中温度对 cIFN 稳定性影响程度最严重，40下 cIFN 会发生严重的聚合与降解。pH 的改变不会引起cIFN 立即聚合与降解，但是在 pH 为 3.0 的溶液中 cIFN 不稳定，后期 cIFN 出现大量的聚合与降解。而震荡只会影响 cIFN 的聚合，对降解影响不明显。进一步研究发现 cIFN 分子内二硫键的断裂是造成发酵上清液在 SDS-PAGE 上形成三条 cIFN 单体带的主要原因，三条带分别为结构完整的具有两条分子内的二硫键的 cIFN 条带；只具有一条二硫键的 cIFN 单体条带；
37、不含二硫键的 cIFN单体。研究还发现正是二硫键的断裂才造成了发酵和分离纯化过程中出现严重的聚合与降解现象，并且结构的轻微变化就会对 cIFN 的稳定性造成致命影响。此外本课题还对二硫键断裂引起的聚合体类型进行了比较详细的分析与研究。证实了发酵过程中形成的 cIFN 二硫键异构体，诱导 cIFN 形成非共价键聚合体和共价键聚合体，同时也使得 cIFN 更容易被蛋白酶降解。特别提醒 ：正文内容由 PDF 文件转码生成，如您电脑未有相应转换码，则无法显示正文内容，请您下载相应软件，下载地址为 http:/ 。如还不能显示，可以联系我 q q 1627550258 ，提供原格式文档。我们还可提供代笔
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