1、临床兽医专业优秀论文 天祝白牦牛、岷县黑裘皮羊成纤维细胞库的构建关键词：家畜养殖 种质资源 纤维细胞库摘要：本文选取天祝白牦牛、岷县黑裘皮羊这两种国家级畜禽遗传资源保护品种作为研究对象，采用胰蛋白酶热消化法，分别构建这两种动物的多种组织的成纤维细胞库，并对其生长曲线、倍增时间、染色体核型、同工酶、微生物污染以及转化表达外源基因等特性进行研究，旨在成功地建立其成纤维细胞库，从细胞水平上对优良地方保护品种的遗传资源进行有效保存和利用，并为其它动物遗传资源保存提供可行的方法借鉴，同时所建的细胞库还可为胚胎干细胞研究、转基因工程、克隆等细胞分子生物学研究提供宝贵材料。 天祝白牦牛保存样本 28 个，冻
2、存细胞 472 支；岷县黑裘皮羊保存样本 23 个，冻存细胞290 支，试验结果如下： 1、培养细胞的形态均为典型的成纤维型细胞，绝大部分呈梭形或不规则三角形，细胞生长时呈放射状、火焰状或旋涡状走势，细胞增殖快，生长旺盛。 2、绘制的细胞生长曲线显示，复苏细胞生长状况很好，生长曲线均呈“S”型，细胞每代生长均经历了潜伏期、指数生长期和停滞期，符合体外细胞生长规律。 3、复苏后细胞活率均保持在 90以上，传代后生长状况与冻存前基本一致，细胞形态和生长速度没有明显变化，冻存细胞生物学特征稳定。 4、微生物污染检测呈阴性，表明细胞未受到细菌、真菌、病毒及支原体污染。 5、核型分析：天祝白牦牛体外培养
3、的成纤维细胞正常染色体数为 2n=60，包括 29 对常染色体和 1 对性染色体，常染色体 29 对为端着丝点染色体，性染色体 X 和 Y 染色体为近中着丝粒染色体，计数 50 个细胞染色体数目时，并对 2n=60 的进行统计，为 74，染色体中二倍体占主体；岷县黑裘皮羊体外培养的成纤维细胞正常染色体数为 2n=54，包括 26 对常染色体和 1 对性染色体，常染色体有 3 对为中着丝点染色体，23 对为端着丝点染色体，进行统计 50 个细胞染色体，2n=54 占 84，表明所建细胞库的细胞稳定的二倍体细胞占主体，遗传性基本稳定。 6、乳酸脱氢酶(LDH)同工酶是遗传成因性的同工酶，天祝白牦牛
4、各种细胞的乳酸脱氢酶同工酶都显现五条区带，从“阳极”到“阴极”分别为LDHlt;,1gt;，LDHlt;,2gt;，LDHlt;,3gt; LDHlt;,4gt;，LDHlt;,5gt;，岷县黑裘皮羊跟中细胞都显现三条区带，从“阳极”到“阴极”分别为LDHlt;,1gt;，LDHlt;,2gt;，LDHlt;,3gt;，通过 LDH 同工酶的区带分布和相对百分含量的比较表明不同品种的 LDH 同工酶含量不同，说明 LDH 同工酶具有明显的品种特异性；各品种细胞 LDH 同工酶酶谱表明，细胞遗传性能稳定。 7、红色荧光质粒在成纤维细胞中的转化表达，试验表明成纤维细胞未发生与其它物种细胞的交叉污染
5、和恶性转化，并能有效地转化表达外源基因，转染率可以作为衡量细胞活力的指标，同时转染成功的细胞也可以为结构基因组研究、后基因组研究、转基因研究提供大量的供体细胞。正文内容本文选取天祝白牦牛、岷县黑裘皮羊这两种国家级畜禽遗传资源保护品种作为研究对象，采用胰蛋白酶热消化法，分别构建这两种动物的多种组织的成纤维细胞库，并对其生长曲线、倍增时间、染色体核型、同工酶、微生物污染以及转化表达外源基因等特性进行研究，旨在成功地建立其成纤维细胞库，从细胞水平上对优良地方保护品种的遗传资源进行有效保存和利用，并为其它动物遗传资源保存提供可行的方法借鉴，同时所建的细胞库还可为胚胎干细胞研究、转基因工程、克隆等细胞分
6、子生物学研究提供宝贵材料。 天祝白牦牛保存样本 28 个，冻存细胞 472 支；岷县黑裘皮羊保存样本 23 个，冻存细胞 290支，试验结果如下： 1、培养细胞的形态均为典型的成纤维型细胞，绝大部分呈梭形或不规则三角形，细胞生长时呈放射状、火焰状或旋涡状走势，细胞增殖快，生长旺盛。 2、绘制的细胞生长曲线显示，复苏细胞生长状况很好，生长曲线均呈“S”型，细胞每代生长均经历了潜伏期、指数生长期和停滞期，符合体外细胞生长规律。 3、复苏后细胞活率均保持在 90以上，传代后生长状况与冻存前基本一致，细胞形态和生长速度没有明显变化，冻存细胞生物学特征稳定。 4、微生物污染检测呈阴性，表明细胞未受到细菌
7、、真菌、病毒及支原体污染。 5、核型分析：天祝白牦牛体外培养的成纤维细胞正常染色体数为 2n=60，包括 29 对常染色体和 1 对性染色体，常染色体 29 对为端着丝点染色体，性染色体 X 和 Y 染色体为近中着丝粒染色体，计数 50 个细胞染色体数目时，并对 2n=60 的进行统计，为 74，染色体中二倍体占主体；岷县黑裘皮羊体外培养的成纤维细胞正常染色体数为 2n=54，包括 26 对常染色体和 1对性染色体，常染色体有 3 对为中着丝点染色体，23 对为端着丝点染色体，进行统计 50 个细胞染色体，2n=54 占 84，表明所建细胞库的细胞稳定的二倍体细胞占主体，遗传性基本稳定。 6、
8、乳酸脱氢酶(LDH)同工酶是遗传成因性的同工酶，天祝白牦牛各种细胞的乳酸脱氢酶同工酶都显现五条区带，从“阳极”到“阴极”分别为LDHlt;,1gt;，LDHlt;,2gt;，LDHlt;,3gt; LDHlt;,4gt;，LDHlt;,5gt;，岷县黑裘皮羊跟中细胞都显现三条区带，从“阳极”到“阴极”分别为LDHlt;,1gt;，LDHlt;,2gt;，LDHlt;,3gt;，通过 LDH 同工酶的区带分布和相对百分含量的比较表明不同品种的 LDH 同工酶含量不同，说明 LDH 同工酶具有明显的品种特异性；各品种细胞 LDH 同工酶酶谱表明，细胞遗传性能稳定。 7、红色荧光质粒在成纤维细胞中的
9、转化表达，试验表明成纤维细胞未发生与其它物种细胞的交叉污染和恶性转化，并能有效地转化表达外源基因，转染率可以作为衡量细胞活力的指标，同时转染成功的细胞也可以为结构基因组研究、后基因组研究、转基因研究提供大量的供体细胞。本文选取天祝白牦牛、岷县黑裘皮羊这两种国家级畜禽遗传资源保护品种作为研究对象，采用胰蛋白酶热消化法，分别构建这两种动物的多种组织的成纤维细胞库，并对其生长曲线、倍增时间、染色体核型、同工酶、微生物污染以及转化表达外源基因等特性进行研究，旨在成功地建立其成纤维细胞库，从细胞水平上对优良地方保护品种的遗传资源进行有效保存和利用，并为其它动物遗传资源保存提供可行的方法借鉴，同时所建的细
10、胞库还可为胚胎干细胞研究、转基因工程、克隆等细胞分子生物学研究提供宝贵材料。 天祝白牦牛保存样本 28 个，冻存细胞 472 支；岷县黑裘皮羊保存样本 23 个，冻存细胞 290 支，试验结果如下： 1、培养细胞的形态均为典型的成纤维型细胞，绝大部分呈梭形或不规则三角形，细胞生长时呈放射状、火焰状或旋涡状走势，细胞增殖快，生长旺盛。 2、绘制的细胞生长曲线显示，复苏细胞生长状况很好，生长曲线均呈“S”型，细胞每代生长均经历了潜伏期、指数生长期和停滞期，符合体外细胞生长规律。 3、复苏后细胞活率均保持在 90以上，传代后生长状况与冻存前基本一致，细胞形态和生长速度没有明显变化，冻存细胞生物学特征
11、稳定。 4、微生物污染检测呈阴性，表明细胞未受到细菌、真菌、病毒及支原体污染。 5、核型分析：天祝白牦牛体外培养的成纤维细胞正常染色体数为 2n=60，包括 29 对常染色体和 1 对性染色体，常染色体 29 对为端着丝点染色体，性染色体 X 和 Y 染色体为近中着丝粒染色体，计数 50 个细胞染色体数目时，并对 2n=60 的进行统计，为 74，染色体中二倍体占主体；岷县黑裘皮羊体外培养的成纤维细胞正常染色体数为 2n=54，包括 26 对常染色体和 1 对性染色体，常染色体有 3 对为中着丝点染色体，23 对为端着丝点染色体，进行统计 50 个细胞染色体，2n=54 占 84，表明所建细胞
12、库的细胞稳定的二倍体细胞占主体，遗传性基本稳定。 6、乳酸脱氢酶(LDH)同工酶是遗传成因性的同工酶，天祝白牦牛各种细胞的乳酸脱氢酶同工酶都显现五条区带，从“阳极”到“阴极”分别为LDHlt;,1gt;，LDHlt;,2gt;，LDHlt;,3gt; LDHlt;,4gt;，LDHlt;,5gt;，岷县黑裘皮羊跟中细胞都显现三条区带，从“阳极”到“阴极”分别为LDHlt;,1gt;，LDHlt;,2gt;，LDHlt;,3gt;，通过 LDH 同工酶的区带分布和相对百分含量的比较表明不同品种的 LDH 同工酶含量不同，说明 LDH 同工酶具有明显的品种特异性；各品种细胞 LDH 同工酶酶谱表明
13、，细胞遗传性能稳定。 7、红色荧光质粒在成纤维细胞中的转化表达，试验表明成纤维细胞未发生与其它物种细胞的交叉污染和恶性转化，并能有效地转化表达外源基因，转染率可以作为衡量细胞活力的指标，同时转染成功的细胞也可以为结构基因组研究、后基因组研究、转基因研究提供大量的供体细胞。本文选取天祝白牦牛、岷县黑裘皮羊这两种国家级畜禽遗传资源保护品种作为研究对象，采用胰蛋白酶热消化法，分别构建这两种动物的多种组织的成纤维细胞库，并对其生长曲线、倍增时间、染色体核型、同工酶、微生物污染以及转化表达外源基因等特性进行研究，旨在成功地建立其成纤维细胞库，从细胞水平上对优良地方保护品种的遗传资源进行有效保存和利用，并
14、为其它动物遗传资源保存提供可行的方法借鉴，同时所建的细胞库还可为胚胎干细胞研究、转基因工程、克隆等细胞分子生物学研究提供宝贵材料。 天祝白牦牛保存样本 28 个，冻存细胞 472 支；岷县黑裘皮羊保存样本 23 个，冻存细胞 290 支，试验结果如下： 1、培养细胞的形态均为典型的成纤维型细胞，绝大部分呈梭形或不规则三角形，细胞生长时呈放射状、火焰状或旋涡状走势，细胞增殖快，生长旺盛。 2、绘制的细胞生长曲线显示，复苏细胞生长状况很好，生长曲线均呈“S”型，细胞每代生长均经历了潜伏期、指数生长期和停滞期，符合体外细胞生长规律。 3、复苏后细胞活率均保持在 90以上，传代后生长状况与冻存前基本一
15、致，细胞形态和生长速度没有明显变化，冻存细胞生物学特征稳定。 4、微生物污染检测呈阴性，表明细胞未受到细菌、真菌、病毒及支原体污染。 5、核型分析：天祝白牦牛体外培养的成纤维细胞正常染色体数为 2n=60，包括 29 对常染色体和 1 对性染色体，常染色体 29 对为端着丝点染色体，性染色体 X 和 Y 染色体为近中着丝粒染色体，计数 50 个细胞染色体数目时，并对 2n=60 的进行统计，为 74，染色体中二倍体占主体；岷县黑裘皮羊体外培养的成纤维细胞正常染色体数为 2n=54，包括 26 对常染色体和 1 对性染色体，常染色体有 3 对为中着丝点染色体，23 对为端着丝点染色体，进行统计
16、50 个细胞染色体，2n=54 占 84，表明所建细胞库的细胞稳定的二倍体细胞占主体，遗传性基本稳定。 6、乳酸脱氢酶(LDH)同工酶是遗传成因性的同工酶，天祝白牦牛各种细胞的乳酸脱氢酶同工酶都显现五条区带，从“阳极”到“阴极”分别为LDHlt;,1gt;，LDHlt;,2gt;，LDHlt;,3gt; LDHlt;,4gt;，LDHlt;,5gt;，岷县黑裘皮羊跟中细胞都显现三条区带，从“阳极”到“阴极”分别为LDHlt;,1gt;，LDHlt;,2gt;，LDHlt;,3gt;，通过 LDH 同工酶的区带分布和相对百分含量的比较表明不同品种的 LDH 同工酶含量不同，说明 LDH 同工酶具
17、有明显的品种特异性；各品种细胞 LDH 同工酶酶谱表明，细胞遗传性能稳定。 7、红色荧光质粒在成纤维细胞中的转化表达，试验表明成纤维细胞未发生与其它物种细胞的交叉污染和恶性转化，并能有效地转化表达外源基因，转染率可以作为衡量细胞活力的指标，同时转染成功的细胞也可以为结构基因组研究、后基因组研究、转基因研究提供大量的供体细胞。本文选取天祝白牦牛、岷县黑裘皮羊这两种国家级畜禽遗传资源保护品种作为研究对象，采用胰蛋白酶热消化法，分别构建这两种动物的多种组织的成纤维细胞库，并对其生长曲线、倍增时间、染色体核型、同工酶、微生物污染以及转化表达外源基因等特性进行研究，旨在成功地建立其成纤维细胞库，从细胞水
18、平上对优良地方保护品种的遗传资源进行有效保存和利用，并为其它动物遗传资源保存提供可行的方法借鉴，同时所建的细胞库还可为胚胎干细胞研究、转基因工程、克隆等细胞分子生物学研究提供宝贵材料。 天祝白牦牛保存样本 28 个，冻存细胞 472 支；岷县黑裘皮羊保存样本 23 个，冻存细胞 290 支，试验结果如下： 1、培养细胞的形态均为典型的成纤维型细胞，绝大部分呈梭形或不规则三角形，细胞生长时呈放射状、火焰状或旋涡状走势，细胞增殖快，生长旺盛。 2、绘制的细胞生长曲线显示，复苏细胞生长状况很好，生长曲线均呈“S”型，细胞每代生长均经历了潜伏期、指数生长期和停滞期，符合体外细胞生长规律。 3、复苏后细
19、胞活率均保持在 90以上，传代后生长状况与冻存前基本一致，细胞形态和生长速度没有明显变化，冻存细胞生物学特征稳定。 4、微生物污染检测呈阴性，表明细胞未受到细菌、真菌、病毒及支原体污染。 5、核型分析：天祝白牦牛体外培养的成纤维细胞正常染色体数为 2n=60，包括 29 对常染色体和 1 对性染色体，常染色体 29 对为端着丝点染色体，性染色体 X 和 Y 染色体为近中着丝粒染色体，计数 50 个细胞染色体数目时，并对 2n=60 的进行统计，为 74，染色体中二倍体占主体；岷县黑裘皮羊体外培养的成纤维细胞正常染色体数为 2n=54，包括 26 对常染色体和 1 对性染色体，常染色体有 3 对
20、为中着丝点染色体，23 对为端着丝点染色体，进行统计 50 个细胞染色体，2n=54 占 84，表明所建细胞库的细胞稳定的二倍体细胞占主体，遗传性基本稳定。 6、乳酸脱氢酶(LDH)同工酶是遗传成因性的同工酶，天祝白牦牛各种细胞的乳酸脱氢酶同工酶都显现五条区带，从“阳极”到“阴极”分别为LDHlt;,1gt;，LDHlt;,2gt;，LDHlt;,3gt; LDHlt;,4gt;，LDHlt;,5gt;，岷县黑裘皮羊跟中细胞都显现三条区带，从“阳极”到“阴极”分别为LDHlt;,1gt;，LDHlt;,2gt;，LDHlt;,3gt;，通过 LDH 同工酶的区带分布和相对百分含量的比较表明不同
21、品种的 LDH 同工酶含量不同，说明 LDH 同工酶具有明显的品种特异性；各品种细胞 LDH 同工酶酶谱表明，细胞遗传性能稳定。 7、红色荧光质粒在成纤维细胞中的转化表达，试验表明成纤维细胞未发生与其它物种细胞的交叉污染和恶性转化，并能有效地转化表达外源基因，转染率可以作为衡量细胞活力的指标，同时转染成功的细胞也可以为结构基因组研究、后基因组研究、转基因研究提供大量的供体细胞。本文选取天祝白牦牛、岷县黑裘皮羊这两种国家级畜禽遗传资源保护品种作为研究对象，采用胰蛋白酶热消化法，分别构建这两种动物的多种组织的成纤维细胞库，并对其生长曲线、倍增时间、染色体核型、同工酶、微生物污染以及转化表达外源基因
22、等特性进行研究，旨在成功地建立其成纤维细胞库，从细胞水平上对优良地方保护品种的遗传资源进行有效保存和利用，并为其它动物遗传资源保存提供可行的方法借鉴，同时所建的细胞库还可为胚胎干细胞研究、转基因工程、克隆等细胞分子生物学研究提供宝贵材料。 天祝白牦牛保存样本 28 个，冻存细胞 472 支；岷县黑裘皮羊保存样本 23 个，冻存细胞 290 支，试验结果如下： 1、培养细胞的形态均为典型的成纤维型细胞，绝大部分呈梭形或不规则三角形，细胞生长时呈放射状、火焰状或旋涡状走势，细胞增殖快，生长旺盛。 2、绘制的细胞生长曲线显示，复苏细胞生长状况很好，生长曲线均呈“S”型，细胞每代生长均经历了潜伏期、指
23、数生长期和停滞期，符合体外细胞生长规律。 3、复苏后细胞活率均保持在 90以上，传代后生长状况与冻存前基本一致，细胞形态和生长速度没有明显变化，冻存细胞生物学特征稳定。 4、微生物污染检测呈阴性，表明细胞未受到细菌、真菌、病毒及支原体污染。 5、核型分析：天祝白牦牛体外培养的成纤维细胞正常染色体数为 2n=60，包括 29 对常染色体和 1 对性染色体，常染色体 29 对为端着丝点染色体，性染色体 X 和 Y 染色体为近中着丝粒染色体，计数 50 个细胞染色体数目时，并对 2n=60 的进行统计，为 74，染色体中二倍体占主体；岷县黑裘皮羊体外培养的成纤维细胞正常染色体数为 2n=54，包括
24、26 对常染色体和 1 对性染色体，常染色体有 3 对为中着丝点染色体，23 对为端着丝点染色体，进行统计 50 个细胞染色体，2n=54 占 84，表明所建细胞库的细胞稳定的二倍体细胞占主体，遗传性基本稳定。 6、乳酸脱氢酶(LDH)同工酶是遗传成因性的同工酶，天祝白牦牛各种细胞的乳酸脱氢酶同工酶都显现五条区带，从“阳极”到“阴极”分别为LDHlt;,1gt;，LDHlt;,2gt;，LDHlt;,3gt; LDHlt;,4gt;，LDHlt;,5gt;，岷县黑裘皮羊跟中细胞都显现三条区带，从“阳极”到“阴极”分别为LDHlt;,1gt;，LDHlt;,2gt;，LDHlt;,3gt;，通过
25、 LDH 同工酶的区带分布和相对百分含量的比较表明不同品种的 LDH 同工酶含量不同，说明 LDH 同工酶具有明显的品种特异性；各品种细胞 LDH 同工酶酶谱表明，细胞遗传性能稳定。 7、红色荧光质粒在成纤维细胞中的转化表达，试验表明成纤维细胞未发生与其它物种细胞的交叉污染和恶性转化，并能有效地转化表达外源基因，转染率可以作为衡量细胞活力的指标，同时转染成功的细胞也可以为结构基因组研究、后基因组研究、转基因研究提供大量的供体细胞。本文选取天祝白牦牛、岷县黑裘皮羊这两种国家级畜禽遗传资源保护品种作为研究对象，采用胰蛋白酶热消化法，分别构建这两种动物的多种组织的成纤维细胞库，并对其生长曲线、倍增时
26、间、染色体核型、同工酶、微生物污染以及转化表达外源基因等特性进行研究，旨在成功地建立其成纤维细胞库，从细胞水平上对优良地方保护品种的遗传资源进行有效保存和利用，并为其它动物遗传资源保存提供可行的方法借鉴，同时所建的细胞库还可为胚胎干细胞研究、转基因工程、克隆等细胞分子生物学研究提供宝贵材料。 天祝白牦牛保存样本 28 个，冻存细胞 472 支；岷县黑裘皮羊保存样本 23 个，冻存细胞 290 支，试验结果如下： 1、培养细胞的形态均为典型的成纤维型细胞，绝大部分呈梭形或不规则三角形，细胞生长时呈放射状、火焰状或旋涡状走势，细胞增殖快，生长旺盛。 2、绘制的细胞生长曲线显示，复苏细胞生长状况很好
27、，生长曲线均呈“S”型，细胞每代生长均经历了潜伏期、指数生长期和停滞期，符合体外细胞生长规律。 3、复苏后细胞活率均保持在 90以上，传代后生长状况与冻存前基本一致，细胞形态和生长速度没有明显变化，冻存细胞生物学特征稳定。 4、微生物污染检测呈阴性，表明细胞未受到细菌、真菌、病毒及支原体污染。 5、核型分析：天祝白牦牛体外培养的成纤维细胞正常染色体数为 2n=60，包括 29 对常染色体和 1 对性染色体，常染色体 29 对为端着丝点染色体，性染色体 X 和 Y 染色体为近中着丝粒染色体，计数 50 个细胞染色体数目时，并对 2n=60 的进行统计，为 74，染色体中二倍体占主体；岷县黑裘皮羊
28、体外培养的成纤维细胞正常染色体数为 2n=54，包括 26 对常染色体和 1 对性染色体，常染色体有 3 对为中着丝点染色体，23 对为端着丝点染色体，进行统计 50 个细胞染色体，2n=54 占 84，表明所建细胞库的细胞稳定的二倍体细胞占主体，遗传性基本稳定。 6、乳酸脱氢酶(LDH)同工酶是遗传成因性的同工酶，天祝白牦牛各种细胞的乳酸脱氢酶同工酶都显现五条区带，从“阳极”到“阴极”分别为LDHlt;,1gt;，LDHlt;,2gt;，LDHlt;,3gt; LDHlt;,4gt;，LDHlt;,5gt;，岷县黑裘皮羊跟中细胞都显现三条区带，从“阳极”到“阴极”分别为LDHlt;,1gt;
29、，LDHlt;,2gt;，LDHlt;,3gt;，通过 LDH 同工酶的区带分布和相对百分含量的比较表明不同品种的 LDH 同工酶含量不同，说明 LDH 同工酶具有明显的品种特异性；各品种细胞 LDH 同工酶酶谱表明，细胞遗传性能稳定。 7、红色荧光质粒在成纤维细胞中的转化表达，试验表明成纤维细胞未发生与其它物种细胞的交叉污染和恶性转化，并能有效地转化表达外源基因，转染率可以作为衡量细胞活力的指标，同时转染成功的细胞也可以为结构基因组研究、后基因组研究、转基因研究提供大量的供体细胞。本文选取天祝白牦牛、岷县黑裘皮羊这两种国家级畜禽遗传资源保护品种作为研究对象，采用胰蛋白酶热消化法，分别构建这两
30、种动物的多种组织的成纤维细胞库，并对其生长曲线、倍增时间、染色体核型、同工酶、微生物污染以及转化表达外源基因等特性进行研究，旨在成功地建立其成纤维细胞库，从细胞水平上对优良地方保护品种的遗传资源进行有效保存和利用，并为其它动物遗传资源保存提供可行的方法借鉴，同时所建的细胞库还可为胚胎干细胞研究、转基因工程、克隆等细胞分子生物学研究提供宝贵材料。 天祝白牦牛保存样本 28 个，冻存细胞 472 支；岷县黑裘皮羊保存样本 23 个，冻存细胞 290 支，试验结果如下： 1、培养细胞的形态均为典型的成纤维型细胞，绝大部分呈梭形或不规则三角形，细胞生长时呈放射状、火焰状或旋涡状走势，细胞增殖快，生长旺
31、盛。 2、绘制的细胞生长曲线显示，复苏细胞生长状况很好，生长曲线均呈“S”型，细胞每代生长均经历了潜伏期、指数生长期和停滞期，符合体外细胞生长规律。 3、复苏后细胞活率均保持在 90以上，传代后生长状况与冻存前基本一致，细胞形态和生长速度没有明显变化，冻存细胞生物学特征稳定。 4、微生物污染检测呈阴性，表明细胞未受到细菌、真菌、病毒及支原体污染。 5、核型分析：天祝白牦牛体外培养的成纤维细胞正常染色体数为 2n=60，包括 29 对常染色体和 1 对性染色体，常染色体 29 对为端着丝点染色体，性染色体 X 和 Y 染色体为近中着丝粒染色体，计数 50 个细胞染色体数目时，并对 2n=60 的
32、进行统计，为 74，染色体中二倍体占主体；岷县黑裘皮羊体外培养的成纤维细胞正常染色体数为 2n=54，包括 26 对常染色体和 1 对性染色体，常染色体有 3 对为中着丝点染色体，23 对为端着丝点染色体，进行统计 50 个细胞染色体，2n=54 占 84，表明所建细胞库的细胞稳定的二倍体细胞占主体，遗传性基本稳定。 6、乳酸脱氢酶(LDH)同工酶是遗传成因性的同工酶，天祝白牦牛各种细胞的乳酸脱氢酶同工酶都显现五条区带，从“阳极”到“阴极”分别为LDHlt;,1gt;，LDHlt;,2gt;，LDHlt;,3gt; LDHlt;,4gt;，LDHlt;,5gt;，岷县黑裘皮羊跟中细胞都显现三条
33、区带，从“阳极”到“阴极”分别为LDHlt;,1gt;，LDHlt;,2gt;，LDHlt;,3gt;，通过 LDH 同工酶的区带分布和相对百分含量的比较表明不同品种的 LDH 同工酶含量不同，说明 LDH 同工酶具有明显的品种特异性；各品种细胞 LDH 同工酶酶谱表明，细胞遗传性能稳定。 7、红色荧光质粒在成纤维细胞中的转化表达，试验表明成纤维细胞未发生与其它物种细胞的交叉污染和恶性转化，并能有效地转化表达外源基因，转染率可以作为衡量细胞活力的指标，同时转染成功的细胞也可以为结构基因组研究、后基因组研究、转基因研究提供大量的供体细胞。本文选取天祝白牦牛、岷县黑裘皮羊这两种国家级畜禽遗传资源保
34、护品种作为研究对象，采用胰蛋白酶热消化法，分别构建这两种动物的多种组织的成纤维细胞库，并对其生长曲线、倍增时间、染色体核型、同工酶、微生物污染以及转化表达外源基因等特性进行研究，旨在成功地建立其成纤维细胞库，从细胞水平上对优良地方保护品种的遗传资源进行有效保存和利用，并为其它动物遗传资源保存提供可行的方法借鉴，同时所建的细胞库还可为胚胎干细胞研究、转基因工程、克隆等细胞分子生物学研究提供宝贵材料。 天祝白牦牛保存样本 28 个，冻存细胞 472 支；岷县黑裘皮羊保存样本 23 个，冻存细胞 290 支，试验结果如下： 1、培养细胞的形态均为典型的成纤维型细胞，绝大部分呈梭形或不规则三角形，细胞
35、生长时呈放射状、火焰状或旋涡状走势，细胞增殖快，生长旺盛。 2、绘制的细胞生长曲线显示，复苏细胞生长状况很好，生长曲线均呈“S”型，细胞每代生长均经历了潜伏期、指数生长期和停滞期，符合体外细胞生长规律。 3、复苏后细胞活率均保持在 90以上，传代后生长状况与冻存前基本一致，细胞形态和生长速度没有明显变化，冻存细胞生物学特征稳定。 4、微生物污染检测呈阴性，表明细胞未受到细菌、真菌、病毒及支原体污染。 5、核型分析：天祝白牦牛体外培养的成纤维细胞正常染色体数为 2n=60，包括 29 对常染色体和 1 对性染色体，常染色体 29 对为端着丝点染色体，性染色体 X 和 Y 染色体为近中着丝粒染色体
36、，计数 50 个细胞染色体数目时，并对 2n=60 的进行统计，为 74，染色体中二倍体占主体；岷县黑裘皮羊体外培养的成纤维细胞正常染色体数为 2n=54，包括 26 对常染色体和 1 对性染色体，常染色体有 3 对为中着丝点染色体，23 对为端着丝点染色体，进行统计 50 个细胞染色体，2n=54 占 84，表明所建细胞库的细胞稳定的二倍体细胞占主体，遗传性基本稳定。 6、乳酸脱氢酶(LDH)同工酶是遗传成因性的同工酶，天祝白牦牛各种细胞的乳酸脱氢酶同工酶都显现五条区带，从“阳极”到“阴极”分别为LDHlt;,1gt;，LDHlt;,2gt;，LDHlt;,3gt; LDHlt;,4gt;，
37、LDHlt;,5gt;，岷县黑裘皮羊跟中细胞都显现三条区带，从“阳极”到“阴极”分别为LDHlt;,1gt;，LDHlt;,2gt;，LDHlt;,3gt;，通过 LDH 同工酶的区带分布和相对百分含量的比较表明不同品种的 LDH 同工酶含量不同，说明 LDH 同工酶具有明显的品种特异性；各品种细胞 LDH 同工酶酶谱表明，细胞遗传性能稳定。 7、红色荧光质粒在成纤维细胞中的转化表达，试验表明成纤维细胞未发生与其它物种细胞的交叉污染和恶性转化，并能有效地转化表达外源基因，转染率可以作为衡量细胞活力的指标，同时转染成功的细胞也可以为结构基因组研究、后基因组研究、转基因研究提供大量的供体细胞。本文
38、选取天祝白牦牛、岷县黑裘皮羊这两种国家级畜禽遗传资源保护品种作为研究对象，采用胰蛋白酶热消化法，分别构建这两种动物的多种组织的成纤维细胞库，并对其生长曲线、倍增时间、染色体核型、同工酶、微生物污染以及转化表达外源基因等特性进行研究，旨在成功地建立其成纤维细胞库，从细胞水平上对优良地方保护品种的遗传资源进行有效保存和利用，并为其它动物遗传资源保存提供可行的方法借鉴，同时所建的细胞库还可为胚胎干细胞研究、转基因工程、克隆等细胞分子生物学研究提供宝贵材料。 天祝白牦牛保存样本 28 个，冻存细胞 472 支；岷县黑裘皮羊保存样本 23 个，冻存细胞 290 支，试验结果如下： 1、培养细胞的形态均为
39、典型的成纤维型细胞，绝大部分呈梭形或不规则三角形，细胞生长时呈放射状、火焰状或旋涡状走势，细胞增殖快，生长旺盛。 2、绘制的细胞生长曲线显示，复苏细胞生长状况很好，生长曲线均呈“S”型，细胞每代生长均经历了潜伏期、指数生长期和停滞期，符合体外细胞生长规律。 3、复苏后细胞活率均保持在 90以上，传代后生长状况与冻存前基本一致，细胞形态和生长速度没有明显变化，冻存细胞生物学特征稳定。 4、微生物污染检测呈阴性，表明细胞未受到细菌、真菌、病毒及支原体污染。 5、核型分析：天祝白牦牛体外培养的成纤维细胞正常染色体数为 2n=60，包括 29 对常染色体和 1 对性染色体，常染色体 29 对为端着丝点
40、染色体，性染色体 X 和 Y 染色体为近中着丝粒染色体，计数 50 个细胞染色体数目时，并对 2n=60 的进行统计，为 74，染色体中二倍体占主体；岷县黑裘皮羊体外培养的成纤维细胞正常染色体数为 2n=54，包括 26 对常染色体和 1 对性染色体，常染色体有 3 对为中着丝点染色体，23 对为端着丝点染色体，进行统计 50 个细胞染色体，2n=54 占 84，表明所建细胞库的细胞稳定的二倍体细胞占主体，遗传性基本稳定。 6、乳酸脱氢酶(LDH)同工酶是遗传成因性的同工酶，天祝白牦牛各种细胞的乳酸脱氢酶同工酶都显现五条区带，从“阳极”到“阴极”分别为LDHlt;,1gt;，LDHlt;,2g
41、t;，LDHlt;,3gt; LDHlt;,4gt;，LDHlt;,5gt;，岷县黑裘皮羊跟中细胞都显现三条区带，从“阳极”到“阴极”分别为LDHlt;,1gt;，LDHlt;,2gt;，LDHlt;,3gt;，通过 LDH 同工酶的区带分布和相对百分含量的比较表明不同品种的 LDH 同工酶含量不同，说明 LDH 同工酶具有明显的品种特异性；各品种细胞 LDH 同工酶酶谱表明，细胞遗传性能稳定。 7、红色荧光质粒在成纤维细胞中的转化表达，试验表明成纤维细胞未发生与其它物种细胞的交叉污染和恶性转化，并能有效地转化表达外源基因，转染率可以作为衡量细胞活力的指标，同时转染成功的细胞也可以为结构基因组
42、研究、后基因组研究、转基因研究提供大量的供体细胞。本文选取天祝白牦牛、岷县黑裘皮羊这两种国家级畜禽遗传资源保护品种作为研究对象，采用胰蛋白酶热消化法，分别构建这两种动物的多种组织的成纤维细胞库，并对其生长曲线、倍增时间、染色体核型、同工酶、微生物污染以及转化表达外源基因等特性进行研究，旨在成功地建立其成纤维细胞库，从细胞水平上对优良地方保护品种的遗传资源进行有效保存和利用，并为其它动物遗传资源保存提供可行的方法借鉴，同时所建的细胞库还可为胚胎干细胞研究、转基因工程、克隆等细胞分子生物学研究提供宝贵材料。 天祝白牦牛保存样本 28 个，冻存细胞 472 支；岷县黑裘皮羊保存样本 23 个，冻存细
43、胞 290 支，试验结果如下： 1、培养细胞的形态均为典型的成纤维型细胞，绝大部分呈梭形或不规则三角形，细胞生长时呈放射状、火焰状或旋涡状走势，细胞增殖快，生长旺盛。 2、绘制的细胞生长曲线显示，复苏细胞生长状况很好，生长曲线均呈“S”型，细胞每代生长均经历了潜伏期、指数生长期和停滞期，符合体外细胞生长规律。 3、复苏后细胞活率均保持在 90以上，传代后生长状况与冻存前基本一致，细胞形态和生长速度没有明显变化，冻存细胞生物学特征稳定。 4、微生物污染检测呈阴性，表明细胞未受到细菌、真菌、病毒及支原体污染。 5、核型分析：天祝白牦牛体外培养的成纤维细胞正常染色体数为 2n=60，包括 29 对常
44、染色体和 1 对性染色体，常染色体 29 对为端着丝点染色体，性染色体 X 和 Y 染色体为近中着丝粒染色体，计数 50 个细胞染色体数目时，并对 2n=60 的进行统计，为 74，染色体中二倍体占主体；岷县黑裘皮羊体外培养的成纤维细胞正常染色体数为 2n=54，包括 26 对常染色体和 1 对性染色体，常染色体有 3 对为中着丝点染色体，23 对为端着丝点染色体，进行统计 50 个细胞染色体，2n=54 占 84，表明所建细胞库的细胞稳定的二倍体细胞占主体，遗传性基本稳定。 6、乳酸脱氢酶(LDH)同工酶是遗传成因性的同工酶，天祝白牦牛各种细胞的乳酸脱氢酶同工酶都显现五条区带，从“阳极”到“
45、阴极”分别为LDHlt;,1gt;，LDHlt;,2gt;，LDHlt;,3gt; LDHlt;,4gt;，LDHlt;,5gt;，岷县黑裘皮羊跟中细胞都显现三条区带，从“阳极”到“阴极”分别为LDHlt;,1gt;，LDHlt;,2gt;，LDHlt;,3gt;，通过 LDH 同工酶的区带分布和相对百分含量的比较表明不同品种的 LDH 同工酶含量不同，说明 LDH 同工酶具有明显的品种特异性；各品种细胞 LDH 同工酶酶谱表明，细胞遗传性能稳定。 7、红色荧光质粒在成纤维细胞中的转化表达，试验表明成纤维细胞未发生与其它物种细胞的交叉污染和恶性转化，并能有效地转化表达外源基因，转染率可以作为衡
46、量细胞活力的指标，同时转染成功的细胞也可以为结构基因组研究、后基因组研究、转基因研究提供大量的供体细胞。特别提醒 ：正文内容由 PDF 文件转码生成，如您电脑未有相应转换码，则无法显示正文内容，请您下载相应软件，下载地址为 http:/ 。如还不能显示，可以联系我 q q 1627550258 ，提供原格式文档。我们还可提供代笔服务，价格优惠，服务周到，包您通过。“垐垯櫃 换烫梯葺铑?endstreamendobj2x 滌甸?*U 躆 跦?l, 墀 VGi?o 嫅#4K 錶 c#x 刔 彟 2Z 皙笜?D 剧珞 H 鏋 Kx 時 k,褝仆? 稀?i 攸闥-) 荮vJ 釔絓|?殢 D 蘰厣?籶(
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