1、玉林师范学院本科生毕业论文千斤拔对离体坐骨神经腓肠肌收缩特性的影响Flemingia Philippinensis Merr. et Rolfe Impact on Vitro Sciatic Gastrocnemius Shrinkage Characteristics院 系 生命科学与技术学院 专 业 制药工程（生物制药方向）学 生 班 级 2011 级 姓 名 学 号 201110403146 指导教师单位 生命科学与技术学院 指导教师姓名 指导教师职称 教授 千斤拔对离体坐骨神经腓肠肌收缩特性的影响制药工程 2011 级制药 11 班 指导老师 摘要目的：探讨千斤拔水提液(Flemin
2、gia philippinensis Merr. et Rolfe Decoction)对青蛙离体坐骨神经腓肠肌收缩特性的影响。方法：将解剖剥制的坐骨神经腓肠肌标本分别用浓度为0.7%的生理盐水、0.125g/mL、0.25g/mL、0.5g/mL 的千斤拔水提液浸润，用RM6240 生物信号采集仪测定每一浓度浸润前、浸润5分钟、浸润10分钟、浸润15分钟各时间点的腓肠肌收缩的阈强度（每一时间点分别测定5次）和完整单收缩曲线(每一时间点测定25次）的收缩速率、舒张速率、收缩幅度以及潜伏期等指标。结果：在浸润处理短时间下，腓肠肌收缩阈强度随着千斤拔水提液浓度的增加而升高，但小于用药前水平（P 0
3、.01，P 0.05），如果超过一定浓度和时间，阈强度大于用药前水平，并逐渐升高（P0.05）；而在同一时间内，收缩幅度、收缩速率、舒张速率均随千斤拔水提液浓度的增加先升高后降低，并低于用药前水平（P 0.01，P 0.05）；青蛙坐骨神经腓肠肌的潜伏期 受浸润溶液中千斤拔浓度的影响，它随着千斤拔浓度的增加先降低后升高，但整体呈现一个降低的趋势。结论：骨骼肌的收缩特性受到千斤拔的成分影响。低浓度千斤拔水提液在短时间内能提高骨骼肌的收缩能力，处理的时间过长或者生药浓度过高都会使骨骼肌的收缩能力减弱，甚至会抑制骨骼肌的收缩能力，并影响神经肌肉兴奋信号的传递。关键词：千斤拔，离体坐骨神经腓肠肌，收缩
4、特性Flemingia Philippinensis Merr. et Rolfe Impact on Vitro Sciatic Gastrocnemius Shrinkage CharacteristicsPharmaceutical Engineering2011 ZhenlinWeiSupervisor XiaopingWangAbstractGold: to investigate one thousand jins pull water extract (Flemingia philippinensis Merr. Et Rolfe Decoction) on frog in vi
5、tro sciatic nerve shrinkage characteristics of the gastrocnemius muscle. Methods: the anatomy of the strip of sciatic nerve gastrocnemius specimens with concentration of 0.7% saline respectively, 0.125 g/mL, 0.25 g/mL, 0.5 g/mL one thousand catties of water extraction liquid infiltration, each conce
6、ntration was determined by RM6240 biological signal acquisition instrument infiltration, infiltration, infiltration for 10 minutes, 5 minutes before the invasion of 15 minutes each time point of the gastrocnemius muscle contraction threshold intensity of every point, respectively (5) and a complete
7、single contraction curve (25 per point determination) contraction rate, diastolic velocity, amplitude and the incubation period of indicators. Results: under the infiltrating short processing time, gastrocnemius muscle contraction threshold intensity with the increase of one thousand catties pull wa
8、ter extraction liquid concentration, But at the same time, the shrinkage rate, shrinkage rate, relaxation rate with one thousand catties of water extraction liquid concentration increase reduced after rising first, and below the level before medication (P 0.01, P 0.05); Incubation period of frog sci
9、atic nerve gastrocnemius affected by infiltrating one thousand catties of concentration in the solution, it increased with the increase of one thousand catties pull concentration increased after lower first, but the overall shows the tendency of a lower. Conclusion: the skeletal muscle contraction c
10、haracteristics affected by one thousand catties of composition. Low concentration one thousand jins pull water extraction liquid in a short period of time can improve the ability of skeletal muscle contraction, the processing time is too long or crude drug concentration is too high will weaken or ev
11、en inhibit skeletal muscle contraction ability, and does affect the neuromuscular excitement signal transfer.key words: Flemingia philippinensis Merr. et Rolfe，Vitro sciatic gastrocnemius，Shrinkage characteristics目录1.前言 .11.1 千斤拔的基本特征 .11.2 千斤拔的化学成分 .21.3 千斤拔的药理作用 .21.4 千斤拔的应用前景 .31.5 实验原理 .42.试验材料和
12、试剂 .42.1 实验对象及材料 .42.2 主要仪器 .42.3 主要药品 .53.实验内容与方法 .53.1 制备离体坐骨神经腓肠肌实验 .53.1.1 常用试剂配制 .53.1.2 坐骨神经腓肠肌的预制备 .53.2 骨骼肌收缩信号采集实验 .63.2.1 仪器连接 .63.2.2 基本参数 .63.2.3 分组及处理 .63.2.5 数据记录以及统计学分析 .74.实验结果 .74.1 骨骼肌收缩信号采集实验 .74.1.1 千斤拔水提液对青蛙离体坐骨神经腓肠肌阈强度的影响 .7据记录以及统计学分析 .84.1.2 千斤拔水提液对青蛙离体坐骨神经腓肠肌收缩幅度的影响 .84.1.3 千
13、斤拔水提液对青蛙离体坐骨神经腓肠肌收缩速率的影响 .94.1.4 千斤拔水提液对青蛙离体坐骨神经腓肠肌舒张速率的影响 .104.1.5 千斤拔水提液对青蛙离体坐骨神经腓肠肌潜伏期的影响 .115.讨论 .125.1 千斤拔水提液活性物质对青蛙离体坐骨神经腓肠肌收缩特性的影响 .125.2 千斤拔水提液对青蛙离体坐骨神经腓肠肌收缩能力的影响 .135.3 千斤拔药理作用的研究展望 .14致谢 .15参考文献 .161.前言1.1 千斤拔的基本特征千斤拔（学名：Flemingia philippinensis Merr. et Rolfe），别称：蔓性千斤拔，吊马桩，吊马墩，一条根，老鼠尾，钻地风
14、（四川）等 1。蔡毅，梁雁，李小云等 2对广西产的三种千斤拔进行了生药学鉴别。实验结果为：半灌木千斤拔的根为长圆柱形，略弯曲，上粗下渐细，偶有分枝，长 2070cm，直径 1.01.5cm。表面灰棕色棕褐色至黑褐色，有稍突起的横长皮孔及细皱纹质坚韧，不易折断，断面略平坦； 皮部棕褐色，木部宽广，类白色或淡黄棕色，有明显的放射状纹理气微，味微苦甘。木栓层 24 列细胞，排列紧密，细胞壁特厚，可见孔沟，皮层较薄，细胞中充满红棕色物质；可见分泌腔，内含黄褐色分泌物，韧皮部狭窄，分泌细胞单个散在，直径 1830m，或数个相连形成大型的分泌腔，直径木质部宽广，占切面的 5/6;大型导管 12 个聚生，直
15、径 2586，周围聚生众多木纤维； 木射线明显，多由 1 列扁平的木薄壁细胞组成，内含淀粉粒。蔓性千斤拔的根为长圆柱形，上粗下渐细，极少分枝，长3070cm，直径 1.01.5cm，表面棕黄色灰黄色至棕褐色，有稍突起的横长皮孔及细皱纹质坚韧，不易折断，断面皮部深棕褐色，显纤维性；木部宽广，淡黄白色，有细微的放射状纹理，微具豆腥气，味微甘涩。木栓层为 10 余列细胞，其外侧常含深棕色物，皮层较窄，有的细胞内含棕色物，韧皮部中可见分泌细胞单个散在，直径 1840m，或数个相连； 纤维散在或成束；草酸钙方晶散在，直径 821m，木质部宽广，占切面的 2/3，大型导管 12 个聚生，直径25110m，
16、周围聚生木纤维；木射线明显，由 18 列扁平的木薄壁细胞组成，内含草酸钙方晶淀粉粒或淡红棕色物质大叶千斤拔的根呈圆柱状，较粗壮，多有分枝，长 3090，直径可达 6cm 根头部略呈结节状膨大，残留的茎基较粗； 表面红棕色，有细小的纵纹并且横向皮孔质坚硬，不易折断，断面的皮部与木部常分离“皮部颜色呈深红棕色，显纤维性，能够看见褐色的胶状物；木部颜色呈浅棕红色或棕黄色，有细微的放射状纹理，气微，味微甘辛。木栓层为 68 列细胞，切向延长，排列整齐，有时外被落皮层“皮层较窄，含棕色物的细胞更多“韧皮部狭窄，可见分泌细胞散在，直径 2032cm，纤维散在或成束；草酸钙方晶散在木质部宽广，3占切面的 7
17、/8,大型导管 12 个聚生，直径 2580m，周围聚生木纤维；木射线宽广，由 310 余列细胞构成，易见草酸钙方晶，直径 102m 和淀粉粒，直径 520m。1.2 千斤拔的化学成分千斤拔属植物中含有黄酮、酚类、鞣质、糖类、甾醇、生物碱和氨基酸类等成分,其中以酮类成分含量较高 3-4。陈敏等 5从蔓性千斤拔根的乙醇提取物中分离并鉴定了六个化合物和一个烷酸的混合物,其中两种为首次分离的黄酮类化合物,分别命名为蔓性千斤拔素 C()和蔓性千斤拔素 D(),其余为已知物,分别鉴定为 5, 7, 3c,4c-四羟基-6, 8-双异戊烯基异黄酮()、flemichin D()、nC22-C30 烷酸()
18、、B-谷甾醇()和羽扇豆醇（X）。化合物 和 对 P388 白血病细胞上具有显著的抑制作用。刘建华等 6利用水蒸气蒸馏法从蔓性千斤拔根茎中提取了挥发油,并用气相色谱-质谱-计算机联用系统对挥发油化学组成进行了定性定量研究,分析鉴定了 39 个化学成分,其中含量最高的是 Italicene 301136%,其次为含雪松烯类物质,分别为 A-雪松烯 51348%,B-雪松烯 51186%,C-雪松烯 51011%等 7,进一步对千斤拔的植物成分进行研究。1.3 千斤拔的药理作用目前,千斤拔被广泛应用于妇科、风湿痹痛等类型的中成药生产之中,比如妇科千金片、金鸡冲剂、金鸡胶囊、补血调经片、壮腰健肾丸、
19、活络止痛丸、复方海蛇酊、复方挫伤灵和脑萎缩丸等。千斤拔性平味甘，具有补气血，助阳道的作用，临床上主要用于治疗手足痹痛 ，腰部风湿作痛，理跌打伤等症 ，广西中药志 介绍 ：“舒筋活血，祛风湿 ，强筋骨 ，四肢酸软 ，跌打扭伤 ，阳黄疸 8，又治腰肌 劳损 ，腹胀，食欲不振 ，月经不调” 9。中国壮药志记载千斤拔有祛风湿邪毒、舒筋、通龙路、补虚壮骨的作用, 主治风湿骨痛、腰肌劳损、偏瘫痿痹、肾虚阳痿、气虚脚肿、劳伤咳嗽 10。近些年的研究表明，千斤拔用于治疗由肝肾阴亏，气血两虚所引起的腰膝酸软、肢体麻木、疲倦无力和月经不调诸症，都能够起到良好的治疗效果。4周卫华 11等通过实验研究千斤拔对小鼠进行
20、负重游泳游泳实验以及对实验小鼠的血 BUN、LDH、SOD、MDA、GPX 和肝 HG 进行测定。结果发现千斤拔低、中、高浓度三组的小鼠负重游泳的时间显著高于正常对照组。千斤拔醇提物中、高浓度两组小鼠的血清 LDH 明显低于正常对照组小鼠(P0.05) ，千斤拔醇提物低、中、高浓度两组小鼠的血清 BUN 低于正常对照组小鼠(P0.01) ，千斤拔醇提物低、中、高浓度三组小鼠的肝糖原 HG 显著高于正常对照组小鼠(P0.05 或P0.01)。千斤拔醇提物中、高浓度两组小鼠的血清 SOD 活性明显高于正常对照组小鼠(P0.05 或 P0.01) ，千斤拔醇提物高浓度组小鼠的血清 MDA 含量低于正
21、常对照组小鼠(P0.01) ，千斤拔醇提物高浓度组小鼠的血清 GPX 显著高于正常对照组小鼠(P0.05)。这些研究表明千斤拔具有抗炎镇痛、抗血栓、抗氧化和对神经系统损伤的保护作用； 在临床上，治疗肝肾阴亏，气血两虚引起的腰膝酸软，疲倦无力等症状具有很好的效果。曾春兰 12等通过采用小鼠耳廓肿胀法，0.6%醋酸所致扭体法，CCl4 所致急性肝损伤法，毛细玻璃管凝血时间法，小鼠负重游泳实验和急性毒性试验，来观察千斤拔抗炎镇痛*抗肝损伤、抗凝血、抗疲劳作用及其毒性情况。结果发现千斤拔能减轻小鼠耳廓肿胀，减少小鼠扭体次数；降低肝损伤小鼠转氨酶活性，延长凝血时间和小鼠游泳时间。急性毒性试验表明，千斤拔
22、的小鼠最大给药量为 160.1g 生药/kg。从而可以得出千斤拔具有一定的抗炎、镇痛、降转氨酶抗凝和抗疲劳作用，且药物毒性很小的结论。1.4 千斤拔的应用前景千斤拔性平味甘，且具有补气血，助阳道的功用，临床证明其对风湿骨痛、腰肌劳损、偏瘫痿痹、肾虚阳痿、气虚脚肿、劳伤咳嗽有很好疗效 13。近年来，对千斤拔的研究已经取得了初步的进展，涉及化学成分、药理作用、提取工艺等多个方面，研究水平也日趋深入，研究领域不断扩大。所以探讨千斤拔影响骨骼肌收缩性能对现实生活具有很大的意义。为了进一步明确千斤拔的药用价值，本研究采用对青蛙离体坐骨神经腓肠肌进行骨骼肌收缩性能的测验，探讨千斤拔对骨骼肌收缩特性的影响，
23、为阐明其药理和药效提供更多的科学依据。51.5 实验原理千斤拔含有的活性成分主要是黄酮类，除此之外还含有香豆素类、萜类、挥发油类、脂肪酸类等 13! 毛俐等 14用 ICP-AES 法测定了中药千斤拔微量元素的含量,发现其 Ca、Mg、Fe、Zn 等元素的含量均比较丰富。 Ca2+15与生物碱，对于骨骼肌以及神经都具有明显的药理学意义。千斤拔水提取物可使细胞能cAMP 增多，收缩时释放钙离子增加的机制，支气管平滑肌有松弛作用，对诱发的哮喘有保护作用, 能对抗组胺、乙酰胆碱等过敏介质引起的气管、支气管收缩, 明显延长哮喘潜伏期 16。本实验取样于骨骼肌展开研究。腓肠肌由许多肌纤维组成，电刺激腓肠
24、肌时，不同的刺激强度会引起肌肉不同程度的收缩反应。当刺激强度很小时，不足以引起肌肉发生收缩反应，此时的刺激为阈下刺激；一般将引起组织发生收缩反应的最小刺激强度定义为阈强度或强度阈值。当全部肌纤维同时收缩时，则出现最大的收缩反应。这时，即使再增大刺激强度，肌肉收缩的力量也不能再随之加大。可以引起肌肉发生最大收缩反应的最小刺激强度为最适刺激强度，此时的完整单收缩包括潜伏期、收缩过程、舒张过程这三个阶段。在最大收缩反应的单收缩曲线中，可以利用 RM6240 多道生理信号采集仪测出收缩幅度、收缩时间、舒张时间、潜伏期这一系列指标，并可利用公式计算：收缩速率=收缩幅度/收缩时间，舒张速率=收缩幅度/舒张时间。2.试验材料和试剂2.1 实验对象及材料健康且弹跳力正常的黑斑蛙，505g，雌雄兼用，购于广西玉林洞口市场，经 教授鉴定为正品。生药千斤拔块根，购于广西玉林市中药材市场，经 教授鉴定为正品。2.2 主要仪器RM6240 多道生理信号采集仪（成都仪器厂）、精密电子天平（上海精密科学仪器有限公司）、张力换能器、冰箱、手术剪、手术镊、眼科剪、眼科镊、毁髓针、蛙板、固定针、玻璃分针、神经屏蔽盒、滴管、培养皿、玻璃分针、锌铜弓、污物缸、棉线、量筒、烧杯、铁架台等。
