1、学士学位论文（设计）Bachelors Thesis论文题目 香椿叶总黄酮提取工艺研究作者姓名 学号 20040403027所在院系 生命科学学院学科专业名称 生物技术导师及职称 副教授论文答辩时间 2008 年 5 月 17 日编号 2015140714 研究类型 基础研究 分类号 Q58湖北师范学院学士学位论文（设计）诚信承诺书中文题目：香椿叶总黄的提取工艺研究外文题目：Study on technique of extraction of total flavonoids from Toona sinensis leaves学生姓名 学生学号 20040403027院系专业 生物技术 学
2、生班级 0403学 生 承 诺我承诺在学士学位论文（设计）活动中遵守学校有关规定，恪守学术规范，本人学士学位论文（设计）内容除特别注明和引用外，均为本人观点，不存在剽窃、抄袭他人学术成果，伪造、篡改实验数据的情况。如有违规行为，我愿承担一切责任，接受学校的处理。学生（签名）：年 月 日指导教师承诺我承诺在指导学生学士学位论文（设计）活动中遵守学校有关规定，恪守学术道德规范，经过本人核查，该生学士学位论文（设计）内容除特别注明和引用外，均为该生本人观点，不存在剽窃、抄袭他人学术成果，伪造、篡改实验数据的现象。指导教师（签名）：年 月 日目 录1 前言 .11.1 香椿的简介 .11.2 香椿的开
3、发利用前景 .11.3 黄酮类化合物研究概况 .22 材料与方法 .32.1 材料 .32.1.1 实验材料 .32.1.2 仪器设备 .32.1.3 试剂及溶液 .32.2 实验方法 .42.2.1 样品的处理及提取 .42.2.2 总黄酮的测定 .42.2.3 总黄酮提取率计算 .42.2.4 总黄酮提取的单因素试验 .52.2.5 正交试验设计 .53 结果与分析 .63.1 料液比对黄酮提取率的影响 .63.2 乙醇体积对黄酮提取率的影响 .73.3 提取温度对黄酮提取率的影响 .73.4 提取时间对黄酮提取率的影响 .83.5 提取工艺的优化 .93.5.1 正交优水平下香椿黄酮的提
4、取率 .104 实验结果 .105 结论与讨论 .106 参考文献 .12中英文摘要香椿叶中总黄酮的提取工艺研究（指导老师, 副教授）（湖北师范学院生命科学学院 湖北 黄石 435002）摘 要: 香椿（ Toona sinensis）为楝科香椿属多年生落叶乔木，因其具有很高的营养价值和药用价值，而具有广阔的发展前景和开发价值。香椿老叶中含有较高含量的黄酮类化合物，因此具有很强的抗氧化活性。本文以香椿叶为原料,利用紫外分光光度法，以芦丁为对照品，NaNO 2-A1(NO3)3-NaOH 体系为显色剂测定香椿叶中总黄酮的含量，并利用L9(34)正交试验设计，确立香椿叶中总黄酮的最佳工艺条件为:乙
5、醇体积分数 60 %、料液比为 130 (g /mL)、浸提温度 70 、提取时间 2 h,在此条件下香椿叶片总黄酮提取率为 7.95 %。关键词:香椿叶；总黄酮；提取工艺中图分类号:Q58 Study on Technique of Extraction of Total Flavonoids from Toona Sinensis LeavesYi Nan (Tutor: Wang Youru)(College of Life Sciences, Hubei Normal University, Huangshi, Hubei, 435002)Abstract: Cedar (Toona
6、sinensis) , a perennial deciduous trees，is widely distributed in China, has a long history of cultivation, because of its high nutritional value and medicinal value, and has broad prospects for development and the development value.Flavonoids contain higher content of old leaves of Toona sinensis, s
7、o it has strong antioxidant activity.The in Toona sinensis leaves as raw material, ultraviolet spectrophotometry, using rutin as control sample, NaNO2-Al (NO3) 3-NaOH system as the chromogenic reagent for the determination of the content of total flavonoids in Toona sinensis leaves, and the L9 (34)
8、orthogonal experimental design, established the optimum technological conditions of total flavonoids from Toona sinensis leaves: ethanol concentration 60 %, material liquid ratio is 1: 30 (g / ml), leaching temperature of 70 , extraction time of 2 h, under the conditions of Toona sinensis leaves fla
9、vonoids extraction rate of 7.95 %. Key words: toona sinensis leaves; total flavonoid; extraction processChinese Library Classification(CLC): Q58湖北师范学院生命科学学院 2008 届学士学位论文（设计）0香椿叶中总黄酮的提取工艺研究（ 指导老师， 副教授）（湖北师范学院生命科学学院 湖北 黄石 435002）1 前言1.1 香椿的简介香椿 Toona Sinensis(AJuss)Roem，又名椿、椿树、香芽树，系楝科香椿属落叶乔木 1， 植物名实图考
10、称红椿 2。香椿的皮(椿白皮)、树汁(春尖油)、果实( 香椿子) 3均可作药用引。香椿叶系香椿的叶，又名椿叶、椿木叶、春尖叶。春季采收，多鲜用。味辛、苦，性平，归脾、胃经。具有祛暑化湿，解毒杀虫之效。主治暑湿伤中，恶，L-呕吐、食欲不振、泄泻、痢疾、痈疽肿毒、疥疮、白秃疮等。为双数羽状复叶，互生，长 2550cm，有特殊气味；含小叶 1022 片，对生或近对生，有短柄；长圆形至披针状长圆形，长 815cm，基部偏斜，圆或圆楔形，先端尖，全缘或有稀疏锯齿，上面深绿色，无毛，下面色淡，叶脉或脉间有长束毛，叶柄红色，基部肥大 1香椿芽是我国传统的名贵蔬菜，色香味俱佳，含有丰富的营养成分。除作为蔬菜食
11、用外，中医用椿叶、椿白皮、香椿子作为药材入药，具有驱风祛湿，收敛止血，抗菌止痛等功效。近几年的研究表明，香椿含有较高的皂苷、黄酮等活性物质 4，香椿叶粗提物具有明显的抗肿瘤、抗氧化及抗菌等药理作用 5-6。香椿树干笔直，生长迅速，一般1015 年即可成材。香椿木材具有美丽花纹和广泛用途，在国际上享有“中国桃花心木”的美称 7。因此香椿具有广阔的发展前景和开发价值。1.2 香椿的开发利用前景香椿不仅营养丰富，且具有较高的药用价值。香椿味苦、涩、性平、无毒，入肝、胃、肾经，有开胃爽神、祛风除湿、止血利气、消火解毒、润肤明目、杀虫的功效，可用治食欲不振、疮疥、风疽、遗精、女子崩漏、带下、便血、痔疮、
12、痢疾、肠炎、肺炎、尿道炎等病症。除药用外，香椿叶还可用作优质天然饲料、食品抗氧化剂，时令蔬菜等。进一步的研究其营养与药理作用，从中提取具有营养与保健作用的活性成湖北师范学院生命科学学院 2008 届学士学位论文（设计）1分，开发功能性保健产品，是一项前景广阔的工作 8。1.3 黄酮类化合物研究概况黄酮类化合物泛指两个具有酚羟基的苯环（A-与 B-环）通过中央三碳原子相互连结而成的一系列化合物，其基本母核为 2-苯基色原酮。是一大类以苯色酮环为基础的酚类化合物 9。植物中由苯丙氨酸产生的肉桂酰辅酶 A，经碳链延长环化生成的查耳酮，再衍生成的各种 -苯基衍生物。OOA B2-原原黄酮类化合物结构中
13、常连接有酚羟基、甲氧基、甲基、异戊烯基等官能团。此外，它还常与糖结合成苷。天然黄酮类化合物多以苷类形式存在，并且由于糖的种类、数量、联接位置及联接方式不同可以组成各种各样黄酮苷类。组成黄酮苷的糖类包括单糖、双糖、三糖和酰化糖。黄酮苷固体为无定形粉末，其余黄酮类化合物多为结晶性固体。黄酮类化合物不同的颜色为天然色素家族添加了更多色彩。这是由于其母核内形成交叉共轭体系，并通过电子转移、重排，使共轭链延长，因而显现出颜色。黄酮苷一般易溶于水、乙醇、甲醇等极性强的溶剂中；但难溶于或不溶于苯、氯仿等有机溶剂中 9。糖链越长则水溶度越大。黄酮类化合物因分子中多具有酚羟基，故显酸性。酸性强弱因酚羟基数目、位
14、置而异。黄酮类化合物广泛存在于天然产物中，大多具有明显的抗炎、抗菌、生物抗氧化性、抗衰老、降血脂、治疗心血管疾病等功能。其中有些可用于心血管病的治疗 9。比色法测定总黄酮的原理:在中性或弱碱性及亚硝酸钠存在条件下 ,黄酮类化合物先与亚硝酸钠发生氧化还原反应， 再加硝酸铝络合，最后加氢氧化钠溶液使黄酮类化合物开环，生成 2-羟基查耳酮而显红橙色,在 510 nm 波长处有吸收峰且符合定量分析的比尔定律,一般与芦丁标准系列比较定量（它的显色原理发生在黄酮醇类成分邻位无取代的邻二酚羟基部位,不具有邻位无取代邻二酚羟基的黄酮醇类成分加入上述试剂时是不显色的）。本研究以芦丁为标准品采用分光光度法及乙醇热
15、浸提法进行粗提取，测定香椿叶中的总黄酮含量。并通过单因素试验和正交设计法优化了香椿叶总黄酮提取工艺条件。湖北师范学院生命科学学院 2008 届学士学位论文（设计）2黄酮有很多生物活性，其中研究最广泛的是其抗氧化活性以及抗癌作用，因此具有巨大的医疗前景。将香椿老叶作为农业副产物通常直接被丢弃而未得到较好利用，如果能够将提取香椿黄酮应用于工业化生产，将会有巨大的经济效益和社会效益。出于黄酮性质比较稳定，可以广泛用于食品、医药、精细化工等行业，为开发新的天然添加剂提供了理论依据，这一研究具有应用意义和经济价值。2 材料与方法2.1 材料 2.1.1 实验材料香椿叶（香椿叶采于湖北师范学院生命科学学院
16、 311 实验室盆栽种植，叶样于 50 烘至恒重粉碎）2.1.2 仪器设备磨碎机电热恒温干燥箱（SKG-02 型，黄石恒丰医疗器械有限公司） 电子天平（BSA-124S 型，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司）电子天平（JA21001 型，上海精密科学仪器有限公司）HH-4 数显恒温水浴锅（金坛市精达一起制造厂）LXJ-IIB 低速大容量多管离心机（上海安亭科学仪器厂）SHB-A 循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）冰箱（BCD-196KTX 型，青岛海尔股份有限公司）722s 分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）2.1.3 试剂及溶液 乙醇/分析纯（海中试化工总公司）无水乙醇/分析纯
17、（武汉市中天化工有限公司）NaOH 固体/分析纯，武汉市江北化学试剂厂）NaNO2 、NaOH、Al( NO3) 3 均为分析纯（汕头西陇化工厂有限公司）芦丁标准品 （中国药品生物制品检定所）湖北师范学院生命科学学院 2008 届学士学位论文（设计）32.2 实验方法2.2.1 样品的处理及提取 10 处理：摘取一定数量的香椿叶采用水冲洗并将其在烘箱中 50 烘至手捏碎，贮于干燥器中置暗处保存备用。提取：准确称取 1.0 g 香椿叶于锥形瓶中，按 1:20 的固液比加入 70 %的乙醇溶液，60 水浴提取 2 h。抽滤，滤液转移到 100 ml 容量瓶中， 70 %乙醇溶液定容即得到黄酮提取液
18、。2.2.2 总黄酮的测定1)标准曲线的制作参考文献 11，并加以改进：精密称取 105 烘至恒重的芦丁 0.1000 g，用体积分数70 乙醇溶解，摇匀，定容至 100 mL，再取 10 mL 此标准液于 100 mL 容量瓶中，稀释、定容为 01 mg/mL 芦丁标准品溶液，备用。分别吸取芦丁标准液0.00、0.25、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL 于 10 mL 比色管中。用体积分数 70 乙醇稀释至 5.0 mL，分别加入 5 NaN0 2 试液 0.3 mL，摇匀，静置 6 min。再加 5 AI(N0 3)3 试液 0.3 mL，摇匀，静置 6 min，再加
19、4 NaOH 4 mL，并用体积分数 70 乙醇溶液定容至刻度，摇匀，静置 12 min。于 504 nm 处测试。以吸光度值 A 为纵坐标，以显色液中芦丁质量浓度 Y (mg/mL)为横坐标，用最小二乘法进行回归。线性方程：A=76729Y+00183，相关系数 R2=09974 。2)总黄酮的测定：精密吸取黄酮提取液 1 mL 于 10 mL 比色管中，用体积分数为 70 %乙醇稀释至 5.0 mL，加入 5 NaNO 2 试液 0.3 mL，摇匀，静置 6 min。再加 5 Al(N0 3)3 试液 0.3 mL，摇匀，静置 6 min，再加 4 NaOH 4 mL，并用体积分数 70
20、%乙醇溶液定容止刻度，摇匀，静置，作样品空白测定吸光度值。按回归方程计算样品液中黄酮的含量。2.2.3 总黄酮提取率计算M=CaV其中：M 为提取物黄酮含量；C 为稀释的提取液黄酮的浓度（由标准曲线方程计算得出）mg/ml；湖北师范学院生命科学学院 2008 届学士学位论文（设计）4a 为测定时提取液的稀释倍数；V 为浸提液总体积 ml.A=M/m100%其中：A 为黄酮的提取率；m 为样品的质量 mg.2.2.4 总黄酮提取的单因素试验1)料液比对提取率的影响精确称取 5 份干燥香椿叶粉末，每份 0.5 g，在浸提温度为 60 ，乙醇体积分数为70 %，提取时间为 2 h 下分别对,固液比为
21、 1:10，1:20,1:30,1:40,1:50 时进行测量并计算提取率。2）乙醇体积分数对提取率的影响精确称取 5 份干燥香椿叶粉末，每份 0.5 g，在料液比为 1：30，浸提温度，提取时间不变的条件下，分别用体积分数为 40 %、50 %、60 %、70 %、80 %的乙醇溶液进行测量并计算提取率。3）浸提温度对提取率的影响精确称取 5 份干燥香椿叶粉末，每份 0.5 g，在料液比为 1：30，乙醇体积分数为70 %，提取时间 2 h 的条件下，分别用 40 、50 、60 、70 、80 的浸提温度进行测值并计算提取率。4）提取时间对提取率的影响精确称取 5 份干燥香椿叶粉末，每份 0.5 g，在料液比为 1：30，乙醇体积分数为70 %，浸提温度为 60 的条件下，控制提取时间为 1 h、2 h、3 h、4 h、5 h 进行测值并计算提取率。2.2.5 正交试验设计在单因素试验的基础上，采用 L9(34)正交试验设计，选乙醇体积分数、料液比和浸提温度、提取时间 4 项作为考察因素，进行 3 水平 4 因素试验，研究香椿叶总黄酮提取的较佳工艺参数。
