1、 食品安全标准食品添加剂 维生素 A1 范围 本标准适用于以 -紫罗兰酮为起始原料，经化学合成制得的食品添加剂维生素 A。 2 规范性引用文件 本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。 3 化学名称、分子式、结构式和相对分子质量 3.1 化学名称 反式 -3,7-二甲基 -9-(2,6,6-三甲基 -1-环己烯基 -1)-2,4,6,8-壬四烯乙酸酯 3.2 分子式 C22H32O2 3.3 结构式 CH3CH3CH3CH2OCOCH3H3CCH3 3.4 相对分子质
2、量 328.49（按照 2007 年国际相对原子质量） 4 技术要求 4.1 感官要求：应符合表 1 的规定。 表 1 感官要求 项 目 要 求 检验方法 色泽 淡黄色 取适量样品置于清洁、干燥的试管中，在自然光线下，观察其色泽和组织状态，嗅其气味。 气味 无酸败味，几乎无臭或有微弱的鱼腥味 组织状态 油溶液,冷冻后可固化 4.2 理化指标：应符合表 2 的规定。 1表 2 理化指标 项 目 指 标 检验方法 维生素 A （ C22H32O2）标示量a， w/% 97.0 103.0 附录 A 中 A.4 酸值 (以 KOH 计 ) ( mg/g ) 2.0 附录 A 中 A.5 过氧化值试验
3、 通过试验 附录 A 中 A.6 吸收系数比 0.85 A 附录 A 中 .7 铅（ Pb） /( mg/kg ) 2 GB 5009.12 砷（ As） /(mg/kg ) 2 GB/T 5009.76 a每 1g 含维生素 A 10 100 万单位（相当于每 1g 含维生素 A 30 mg 300mg） 2 附 录 A （规范性附录） 检验方法 A.1 安全提示 本标准试验方法中使用的部分试剂具有毒性或腐蚀性， 按相关规定操作,操作时须小心谨慎。若溅到皮肤上应立即用水冲洗，严重者应立即治疗。在使用挥发性酸时，需在通风橱中进行。 A.2 一般规定 除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试
4、剂和 GB/T 6682 2008 规定的三级水。 试验方法中所用的标准滴定溶液，杂质测定用标准溶液，制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按 GB/T601、 GB/T 602、 GB/T 603 的规定制备。 A.3 鉴别试验 A.3.1 试剂和材料 A.3.1.1 三氯甲烷。 A.3.1.2 三氯化锑溶液： 250g/L 三氯甲烷溶液，如果需要，应过滤后使用。 A.3.1.3 展开剂：环己烷-乙醚（4+1）。 A.3.1.4 三氯化锑试液： 200g/L 三氯甲烷溶液。如果需要，应过滤后使用。 A.3.2 呈色试验 A.3.2.1 方法提要 维生素 A 和亲电试剂氯化高锑作用形成不稳定的蓝
5、色碳钅 翁 离子。 A.3.2.2 分析步骤 取 1 滴实验室样品， 加 10mL 三氯甲烷， 振摇使溶解； 取出 2 滴， 加 2mL 三氯甲烷、 0.5mL三氯化锑溶液，即显蓝色，渐变成紫红色。 A.3.3 薄层层析 A.3.3.1 方法提要 实验室样品溶液所显示主斑点与维生素 A 对照品溶液所显示主斑点的 R 值相同。 A.3.3.2 分析步骤 分别称取维生素 A 对照品和实验室样品约 15000 IU 置于 10mL 容量瓶中， 用三氯甲烷溶解并稀释至刻度，然后在硅胶薄层板上分别点样 0.01mL，在展开剂中展开，展开后，晾干。用三氯化锑试液显色，呈蓝色斑点。实验室样品溶液所显示主斑点
6、与对照品溶液所显主斑点的位置一致。 A.4 维生素 A 的测定 A.4.1 方法提要 维生素 A 分子中含有 5 个共轭双键，在 325nm 328nm 波长之间具有最大吸收峰，其最大吸收峰的位置随溶剂不同而异，因而可用于含量测定。本法是在三个波长处测得吸光度 , 3根据校正公式计算吸光度 A 校正值后 ,再计算含量。 A.4.2 试剂和材料 环己烷。 A.4.3 仪器和设备 紫外分光光度计。 A.4.4 测定方法 A.4.4.1 分析步骤 取实验室样品适量，精确至 0.000 2 g，加环己烷溶解并定量稀释成 9 15 IU 的溶液，按照维生素 A 测定法（ 中华人民共和国药典 2005 年
7、版二部附录 J维生素 A 测定法项下第一法 ) 测定吸收峰的波长，并在表 A.1 所列波长处测定吸光度。计算各吸光度与波长 328nm处的吸光度的比值和波长 328nm 处1%1cmE值。 表 A.1 维生素 A 在不同波长的吸光度比值 波长 （ nm） 吸光度比值 300 0.555316 0.907328 1.000 340 0.811 360 0.299A.4.4.2 结果计算 如果吸收峰波长在 326nm 329nm 之间，且所测得各波长吸光度比值不超过 A.1 中规定值的 0.02，可用公式（ A.1）计算含量： 1%1cmx E= （ 328nm） 1900 (A.1) 式中： x
8、每克样品中含有维生素 A 的 IU； 1%1cmE 百分吸收系数。 如果吸收峰波长在 326nm 329nm 之间，但所测得的各波长吸光度比值超过表 A.1 中规定值的 0.02，应按公式（ A.2）求出校正后的吸光度，然后再计算含量。 A328（校正） =3.52（ 2A328-A316-A340） (A.2) 式中： A328（校正） 在波长 328nm 处校正后的吸光度； A328在波长 328nm 处的吸光度； A316在波长 316nm 处的吸光度； A340在波长 340nm 处的吸光度。 如果校正吸光度与未校正吸光度相差不超过 3.0%，则不用校正吸光度，仍以未经校正的吸光度计算
9、含量。 如果校正吸光度与未校正吸光度相差 -15%至 -3%之间，则以校正吸光度计算含量。 GB 147502010 4如果校正吸光度超过未校正吸光度的 -15%或 +3%之间，或者吸收峰波长不在 326nm329nm 之间，则样品须按照中华人民共和国药典 2005 年版二部附录 J维生素 A 测定法项下第二法测定 (A.4.4.3)。 两次平行测定的允许相对差在 3%以内。 A.4.4.3 维生素 A 的测定第二法 精密称取实验室样品适量（约相当于维生素 A 总量 500 IU 以上，质量不多于 2g） ，置皂化瓶中，加 30mL 乙醇与 3mL 氢氧化钾溶液 (500g/L)，置水浴中煮沸
10、回流 30min，冷却后，自冷凝管顶端加水 10mL 冲洗冷凝管内部管壁，将皂化液移至分液漏斗中（分液漏斗活塞涂以甘油淀粉润滑剂） ，皂化瓶用水 60mL 100mL 分数次洗涤，洗液并入分液漏斗中，用不含过氧化物的乙醚振摇提取 4 次，每次振摇约 5min，第一次 60mL，以后各次 40mL，合并乙醚液，用水洗涤数次，每次约 100mL，洗涤应缓缓旋动，避免乳化，直至水层遇酚酞指示液不再显红色，乙醚液用铺有脱脂棉与无水硫酸钠的滤器滤过，滤器用乙醚洗涤，洗液与乙醚液合并，放入 250mL 容量瓶中，用乙醚稀释至刻度，摇匀；精密量取适量，置蒸发皿内，在水浴上低温蒸发至 5mL 后，置减压干燥器
11、中，抽干，迅速加异丙醇溶解并定量稀释制成每1mL 中含维生素 A 9 15 IU，照紫外 -可见分光光度法（ 中华人民共和国药典 2005 年版 附录 IV A） ，在 300nm、 310nm、 325nm 与 334nm 四个波长处测定吸光度，并测定吸收峰的波长。吸收峰的波长应在 323nm 327nm 之间，且 300nm 波长处的吸光度与 325nm 波长处的吸光度的比值应不超过 0.73，按下式计算校正吸光度； A325（校正） 6.815A325 2.555A310 4.260A334 每 1g 实验室样品中含有的维生素 A 的单位1%1cm(325nm, ) 1830E 校正 如
12、果校正吸光度在未校正吸光度的 100%3以内，则仍以未经校正的吸光度计算含量。 如果吸收峰的波长不在 323nm 327nm 之间，或 300nm 波长处的吸光度与 325nm 波长处的吸光度的比值超过 0.73， 则应自上述皂化后的乙醚提取液 250mL 中， 另精密量取适量 （相当于维生素 A300 400 IU） ，减压蒸去乙醚至约剩 5mL，再在氮气流下吹干，立即精密加入3mL 甲醇，溶解后，精密量取 500L，注入维生素 D 测定法（ 中华人民共和国药典 2005年版附录 VII K）第二法项下的净化用色谱柱系统，准确收集含有维生素 A 的流出液，在氮气流下吹干，而后按照上述方法自
13、“迅速加异丙醇溶解 ”起，依法操作并计算含量。 注 1：甘油淀粉润滑剂 取甘油 22g，加入可溶性淀粉 9g，加热至 140，保持 30min 并不断搅拌，放冷，即得。 注 2：不含过氧化物的乙醚 照麻醉乙醚项下的过氧化物检查，如不符合规定，可用 5硫代硫酸钠溶液振摇，静置，分取乙醚层，再用水振摇洗涤 1 次，重蒸，弃去首尾 5部分，馏出的乙醚再检查过氧化物，应符合规定。 A.5 酸值的测定 A.5.1 试剂和材料 A.5.1.1 乙醇。 A.5.1.2 乙醚。 A.5.1.3 氢氧化钠标准滴定溶液： c (NaOH) =0.1mol/L。 A.5.1.4 酚酞指示液: 10g/L 乙醇溶液。
14、 A.5.2 分析步骤 GB 147502010 5 分别取 15mL 乙醇和乙醚，置于锥形瓶中，加 5 滴酚酞指示液，滴加氢氧化钠标准滴定溶液（ 0.1mol/L）至微显粉红色，再加 2.0g 实验室样品，振摇使完全溶解，用氢氧化钠标准滴定溶液（ 0.1mol/L）滴定。 A.5.3 结果计算 酸值（以 KOH 计 ） w, 数值以毫克每克（ mg/g）表示，按公式（ A.3）计算： w mMcV = (A.3) 式中： V实验室样品消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积的数值，单位为毫升（ mL） ; c氢氧化钠标准滴定溶液实际浓度的数值，单位为摩尔毫升（ mol/L） ； m实验室样品质量的数值
15、，单位为克（ g） ； M氢氧化钾的摩尔质量的数值，单位为克每摩尔（ g/mol） （ M= 56.1 ） 。 A.6 过氧化值的测定 A.6.1 试剂和材料 A.6.1.1 冰乙酸。 A.6.1.2 三氯甲烷。 A.6.1.3 碘化钾溶液：取碘化钾适量，制成饱和溶液。 A.6.1.4 硫代硫酸钠标准滴定溶液： c（ Na2S2O3） =0.1mol/L，标定后稀释成 0.01mol/L 的浓度待用。 A.6.1.5 淀粉指示液： 5g/L。 A.6.2 分析步骤 称取约 1.0g 实验室样品，精确至 0.000 2g。加 30mL 冰乙酸 -三氯甲烷（ 6+4），振摇使溶解，加 1mL 碘化钾溶液，振摇 1min，加 100mL 水与 1mL 淀粉指示液，用硫代硫酸钠标准滴定溶液（ 0.01mol/L）滴定，至紫蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正，消耗硫代硫酸钠标准滴定溶液（ 0.01mol/L）不得超过 1.5mL。 A.7 吸收系数比 在含量测定项下， 实验室样品溶液在 328nm 处测定校正吸收值与直接吸收值之比不低于0.85。如果吸收峰在 326nm 329nm 之间，且测得各吸光度比值不超过规定值的 0.02,不用计算吸收系数比。
