1、 1 食品安全标准食品添加剂 叶酸1 范围 本标准适用于化学合成法制得的食品添加剂叶酸。 2 规范性引用文件 本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。 3 化学名称、分子式、结构式和相对分子质量 3.1 化学名称 N -(2-氨基 -1,4-二氢 -4-氧代 -6-喋啶）甲氨基 苯甲酰基 -L-谷氨酸 3.2 分子式 C19H19N7O6 3.3 结构式 3.4 相对分子质量 441.40（按 2007年国际相对原子质量） 4 技术要求 4.1 感官要求：应符合表
2、 1 的规定。 表 1 感官要求 项 目 要 求 检验方法 色泽 黄色或橙黄色 取适量样品置于清洁、干燥的白瓷盘中，在自然光线下，观察其色泽和组织状态。 组织状态 结晶性粉末 4.2 理化指标：应符合表 2 的规定。 2 表 2 理化指标 项 目 指 标 检验方法 叶酸（ C19H19N7O6，以干基计） ， w/% 96.0 102.0 附录A中 A.4 水分， w/% 8.5 附录A中 A.5 灼烧残渣， w/% 0.2 附录A中 A.6 重金属 (以 Pb计 )/（ mg/kg） 10 附录A中 A.7 砷 (As)/（ mg/kg） 3 GB/T 5009.76 3 附录 A (资料性
3、附录) 检验方法 A.1 安全提示 本标准试验方法中使用的部分试剂具有毒性或腐蚀性， 按相关规定操作， 操作时需小心谨慎。若溅到皮肤上应立即用水冲洗，严重者应立即治疗。在使用挥发性酸时，要在通风橱中进行。 A.2 一般规定 本标准所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和 GB/T 6682-2008 中规定的三级水；试验中所用标准滴定溶液和其他所需溶液，在未注明时，均按 GB/T 601、 GB/T 602、 GB/T 603 之规定配制。 A.3 鉴别试验 A.3.1 试剂和材料 氢氧化钠溶液： c(NaOH)=0.1 mol/L。 A.3.2 仪器和设备 紫外分光光度计，附 1
4、 吸收池。 A.3.3 紫外吸收试验 称取实验室样品，加氢氧化钠溶液制成每 1 mL中含 10 g实验室样品的溶液，用紫外分光光度计测定，在 256 nm2 nm， 283 nm2 nm， 365 nm4 nm的波长处有最大吸收，在 256 nm与 365 nm波长处的吸光度比值应为 2.8 3.0。 A.4 叶酸的测定 A.4.1 试剂和材料 A.4.1.1 甲醇：色谱级。 A.4.1.2 磷酸二氢钾。 A.4.1.3 氢氧化钾溶液： c(KOH)=0.1 mol/L。 A.4.1.4 氨水溶液： 0.5 100。 A.4.1.5 叶酸对照品。 A.4.2 仪器和设备 高效液相色谱仪。 A.
5、4.3 色谱分析条件 推荐的色谱柱及典型色谱操作条件见表 A.1，叶酸典型高效液相色谱图参见附录 B，其他能达到同等分离程度和柱效的色谱柱和色谱条件均可使用。 表 A.1 色谱柱和典型色谱操作条件 色谱柱 柱长 25cm，柱内径 4.6mm，十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱。 流动相 6.8g 磷酸二氢钾与 70 mL 氢氧化钾溶液，加水稀释至 850 mL，并调节 pH 至 6.30.1，加 80 mL 甲醇，用水稀释成 1000 mL 的溶液。 流速 1mL/min。 检测波长 254 nm。 4 柱温 30，控制精度 1。 A.4.4 分析步骤 A.4.4.1 对照品溶液的制备： 称取约 10
6、 mg 叶酸对照品，精确至 0.02 mg，置 50 mL 容量瓶中，加 30 mL 氨水溶液溶解后，用水稀释至刻度，摇匀。 A.4.4.2 实验室样品溶液的制备： 称取 约 10 mg 实验室样品，精确至 0.02 mg，置 50 mL 容量瓶中，加 30 mL 氨水溶液溶解后，用水稀释至刻度，摇匀。 A.4.4.3 系统适用性试验 理论塔板数按叶酸峰计算应不低于 2000，叶酸峰与相邻杂质峰的分离度应大于 1.5。 A.4.4.4 测定 按表 A.1色谱柱和典型色谱操作条件， 精密量取 10 L实验室样品溶液注入液相色谱仪， 记录色谱图；另取叶酸对照品溶液，同法测定。 A.4.5 结果计算
7、 叶酸含量（以 C19H19N7O6计,干基计)的质量分数以1w计，数值以 %表示，按式（ A.1）计算： 112123100%(1 )AmwwAm w=（ A.1） 式中： m 实验室样品的进样量的数值，单位为毫克（mg）； 1m 叶酸对照品的进样量的数值，单位为毫克（mg）； 2w 叶酸对照品（以C 19H19N7O6计,湿基计）的质量分数的数值，数值以%表示； 3w 按 A.5下测定实验品样品含水量的质量分数的数值，数值以%表示； 1A 实验室样品溶液中叶酸的峰面积的数值； 2A 对照品溶液中叶酸的峰面积的数值。 取两次平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行测定结果的相对偏差不大于
8、2.0%。 A.5 水分的测定 A.5.1 试剂和材料 A.5.1.1 费休氏试液。 A.5.1.2 无水甲醇。 A.5.2 仪器和设备 费休氏水分测定仪。 A.5.3 分析步骤 按中华人民共和国药典 2005年版二部附录 M 水分测定法第一法 A测定。称取约 0.1 g实验室样品，精确至 0.0002 g，溶剂为无水甲醇，用水分测定仪直接测定，或将实验室样品置干燥的具塞玻璃瓶中，加 25mL 30mL无水甲醇 ,在不断振摇（或搅拌）下用费休氏试液滴定至溶液由浅黄色变为红棕色，或用永停滴定法指示终点；另作空白试验。 5 A.5.4 结果计算 实验室样品中水分的质量分数以3w 计，数值以%表示，
9、按式（ A.2）计算： 103()100%VV Fwm= （ A.2） 式中： F 每 1mL费休氏试液相当于水的质量的数值，单位为毫克每毫升（ mg/mL）； 1V 实验室样品消耗费休氏试液的体积的数值，单位为毫升（ mL）； 0V 空白所消耗费休氏试液的体积的数值，单位为毫升（ mL）； m 实验室样品的质量的数值，单位为毫克（ mg）。 取两次平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行试验的相对偏差应小于 0.2%。 A.6 灼烧残渣的测定 A.6.1 试剂和材料 硫酸。 A.6.2 分析步骤 称取约 1.0 g 实验室样品，精确至 0.0002 g，置已灼烧至恒重的坩埚中，缓缓灼烧至
10、完全碳化， 冷却至室温； 加硫酸 0.5mL 1mL 使湿润， 低温加热至硫酸蒸气除尽后， 在 550 50灼烧使完全灰化，移至干燥器内，冷却至室温，精确称定后，再在 550 50灼烧至恒重。 A.6.3 结果计算 灼烧残渣的质量分数以4w 计，数值以 %表示，按式（ A.3）计算： 234()100%mmwm=（ A.3） 式中：2m 恒重坩埚和残渣的质量的数值，单位为克（g）； 3m 恒重坩埚的质量的数值，单位为克（g）； m 实验室样品的质量的数值，单位为克（g）。 取两次平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行测定结果的绝对差值不大于0.02%。 A.7 重金属的测定 A.7.1
11、试剂和材料 A.7.1.1 硝酸。 A.7.1.2 硫酸。 A.7.1.3 盐酸。 A.7.1.4 甘油。 A.7.1.5 乙酸铵。 A.7.1.6 硝酸铅。 A.7.1.7 硫代乙酰胺。 A.7.1.8 氨试液： 400 1000。 A.7.1.9 氢氧化钠溶液： c（ NaOH） =1 mol/L。 A.7.1.10 盐酸溶液： c（ HCl） =2 mol/L。 6 A.7.1.11 盐酸溶液： c（ HCl） =7 mol/L。 A.7.1.12 氨水溶液： c（ NH3H2O） =5 mol/L。 A.7.1.13 酚酞指示液： 10g/L 乙醇溶液。 A.7.1.14 乙酸盐缓冲液
12、（ pH3.5）： 称取约 25 g 乙酸铵，加 25 mL 水溶解后，加 7 mol/L 盐酸溶液 38 mL，用 2 mol/L 盐酸溶液或氨水溶液准确调节 pH 至 3.5（ pH 计），用水稀释至 100 mL，即得。 A.7.1.15 硫代乙酰胺试液： 称取约 4 g 硫代乙酰胺，精确至 0.01 g，加水使溶解成 100 mL，置冰箱中保存。临用前取5.0 mL 混合液 （由 1 mol/L 15 mL 氢氧化钠溶液、 5.0 mL 水及 20 mL 甘油组成） ， 加上述 1.0 mL硫代乙酰胺溶液，置水浴上加热 20s，冷却，立即使用。 A.7.1.16 铅标准溶液： 称取约
13、0.160 g 硝酸铅，精确至 0.000 2g,置于 1000 mL 容量瓶中，加 5 mL 硝酸与 50 mL水溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，移取 10mL0.02mL 贮备液，置于100 mL 容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每 1mL 相当于 10 g 的 Pb）。配置与贮存用的玻璃仪器均不得含铅。 A.7.2 分析步骤 按中华人民共和国药典 2005 年版二部附录 H 重金属检查法第二法测定，具体方法如下： 取 A.6 下遗留的残渣，加 0.5 mL 硝酸，蒸干，至氧化氮蒸气除尽后（或取实验室样品 1g，缓缓灼烧至完全炭化，冷却至室温，加 0.5 mL 1.
14、0 mL 硫酸，使恰湿润，用低温加热至硫酸除尽后，加 0.5 mL 硝酸，蒸干，至氧化氮蒸气除尽后，冷却至室温，在 500 600灼烧至完全灰化） ，冷却至室温，加 2 mL 盐酸，置水浴上蒸干后加 15 mL 水，滴加氨试液至对酚酞指示液显中性，再加 2 mL 乙酸盐缓冲液（ pH3.5） ，微热溶解后，移置纳氏比色甲管中，加水稀释成 25 mL； 另取配制实验室样品溶液的试剂， 置瓷皿中蒸干后， 加 2 mL 乙酸盐缓冲液 （ pH3.5）与 15 mL 水，微热溶解后，移置纳氏比色乙管中，加 1mL 0.01mL 标准铅溶液，再用水稀释成 25 mL；再在甲乙两管中分别加各 2 mL 硫代乙酰胺试液，摇匀，放置 2min，同置白纸上，自上向下透视，甲管中显示的颜色与乙管比较，不得更深。
