1、 考马斯亮蓝 (Bradford)法蛋白浓度测定试剂盒 M2031 产品说明书 上海美季生物技术有限公司 上海市中山南二路 777 号 2 号搂 2303 Mbchem品牌为上海美季生物技术有限公司所有 电话： 86-021-51873168 传真 :86-021-51875086-800 本产品仅供科学研究使用 This product is for research use only. Not for human or diagnostic use. 考马斯亮蓝 (Bradford)法蛋白浓度测定试剂盒 Coomassie (Bradford) Protein Assay Kit 产品简
2、介： Bradford法（考马斯亮蓝法），是目前灵敏度最高的蛋白质测定法之一。当 Bradford 染色液（考马斯亮蓝 G250）和蛋白在酸性条件下结合时，溶液颜色由棕黑色转为蓝色，最大吸光值波长由 456nm 转至 595nm，吸光值与蛋白质的含量在一定浓度范围内有较好的线性关系，通过测定吸光值大小并对照标准蛋白的吸光值，推算出蛋白浓度，实现了蛋白浓度测定的快速，稳定和高灵敏度。 Bradford 染色液为 2 倍浓缩母液，便于储存。 产品特点 : 快速， 10-20 个样品只需要 10 分钟即可完成测定。 稳定，加样混匀后 2 分钟既可测定， 1 小时内吸光度变化不超过 10%。 最小测量
3、体积为 1-20 uL，最低测量蛋白量为 0.5 ug。 有常规和微量两种检测模式。 不受绝大部分样品中的化学物质的影响。巯基乙醇的浓度可高达 1M，二硫苏糖醇的浓度可高达 5 mM。 但受略高浓度的表面活性剂影响，各种蛋白质与染料的结合效率可能有差异。 经济实用：在微孔板中进行测定，可大大节约样品和试剂用量。 产品组成： 产品组成 M2031-1 M2031-2 规格 250 次微孔板法或 50次比色皿法 1000次微孔板法或 200次比色皿法 Albumin (BSA)蛋白标准(5mg/ml) 0.5ml 1.5ml Bradford 2x 染色液 25ml 100ml 考马斯亮蓝 (Br
4、adford)法蛋白浓度测定试剂盒 M2031 产品说明书 上海美季生物技术有限公司 上海市中山南二路 777 号 2 号搂 2303 Mbchem品牌为上海美季生物技术有限公司所有 电话： 86-021-51873168 传真 :86-021-51875086-800 本产品仅供科学研究使用 This product is for research use only. Not for human or diagnostic use. 保存温度： Bradford染色液 2-8 保存 ， BSA蛋白标准 -20 保存 。有效期一年。 操作步骤： 一、 常规测定 A 96 孔酶标板测定： 1.
5、 根据需要 从冰箱取出 适量 Bradford 2x 染色液 ，平衡至室温并混匀；预热酶标仪 20分钟。 2. 根据需要取适量标准品 ,加入去离子水稀释至 1mg/ml(原液 5mg/ml),并混匀 。 注意： 原则上 蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，也可以用去离子水、 0.9%NaCl或 PBS稀释标准品。稀释后的蛋白标准品也可以 -20长期保存。以下步骤中均默认采用去离子水，可以根据条件选择使用稀释液。 3. 标准曲线绘制。取一块酶标板，按以下表格数据加入试剂： （此方案工作线性范围为100-1000ug/ml。） 孔号 A B C D E F G H 蛋
6、白标准（ l） 0 1 2 3 4 6 8 10 去离子水（ l） 100 99 98 97 96 94 92 90 Bradford 2x 染色液 （ l） 100 100 100 100 100 100 100 100 对应的蛋白含量（ g） 0 1 2 3 4 6 8 10 最终体积 200ul 4. 振荡混匀后，室温放置 5-10 分钟。 5. 用酶标仪测定 595nm处的吸光值 ，以不含 BSA 的光吸收值为空白对照。 6. 以蛋白含量（ g）为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线。 7. 样品测定：将待测蛋白样品用去离子水稀释至适当浓度，取 10 l 样品，加入 100 l 2x
7、Bradford 染色液和 90 l 的去离子水，混匀后放置 5-10 分钟，然后以 A 号孔为对照，测定样品吸收值 A595。 考马斯亮蓝 (Bradford)法蛋白浓度测定试剂盒 M2031 产品说明书 上海美季生物技术有限公司 上海市中山南二路 777 号 2 号搂 2303 Mbchem品牌为上海美季生物技术有限公司所有 电话： 86-021-51873168 传真 :86-021-51875086-800 本产品仅供科学研究使用 This product is for research use only. Not for human or diagnostic use. 8. 根据
8、测得的吸收值，在标准曲线上即可查得样品的蛋白含量。 9. 计算蛋白浓度：以查得的蛋白含量除以样品体积 10 l，再乘以相应的稀释倍数即可得到待测样品的实际浓度。 B 比色皿测定 ： 1. 根据需要从冰箱取出适量 Bradford 2x 染色液 ，平衡至室温并混匀；预热酶标仪 20分钟。 2. 根据需要取适量标准品 ,加入去离子水稀释至 1mg/ml(原液 5mg/ml),并混匀 。 注意： 原则上 蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，也可以用去离子水、 0.9%NaCl或 PBS稀释标准品。稀释后的蛋白标准品也可以 -20长期保存。以下步骤中均默认采用去离子水，可
9、以根据条件选择使用稀释液。 10. 标准曲线绘制。 取 8个比色皿分别编号为 A-H，按以下表格数据加入试剂： （此方案工作线性范围为 100-1000ug/ml。） 孔号 A B C D E F G H 蛋白标准（ l） 0 5 10 15 20 30 40 50 去离子水（ l） 500 495 490 485 480 470 460 450 Bradford 2x 染色液 （ l） 500 500 500 500 500 500 500 500 对应的蛋白含量（ g） 0 5 10 15 20 30 40 50 最终体积 1000ul 3. 振荡混匀后，室温放置 5-10 分钟。 4.
10、用 分光光度计 测定 595nm处的吸光值 ，以不含 BSA 的光吸收值为空白对照。 5. 以蛋白含量（ g）为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线。 6. 样品测定：将待测蛋白样品用去离子水稀释至适当浓度，取 50 l 样品，加入 500 l 2x Bradford 染色液和 450 l 的去离子水，混匀后放置 5-10 分钟，然后以 A 号 比色皿 为对照，测定样品吸收值 A595。 考马斯亮蓝 (Bradford)法蛋白浓度测定试剂盒 M2031 产品说明书 上海美季生物技术有限公司 上海市中山南二路 777 号 2 号搂 2303 Mbchem品牌为上海美季生物技术有限公司所有 电话
11、： 86-021-51873168 传真 :86-021-51875086-800 本产品仅供科学研究使用 This product is for research use only. Not for human or diagnostic use. 7. 根据测得的吸收值，在标准曲线上即可查得样品的蛋白含量。 8. 计算蛋白浓度：以查得的蛋白含量除以样品体积 50 l，再乘以相应的稀释倍数即可得到待测样品的实际浓度。 二、 微量 测定 ： 只需要将常规测定 第 2步 中的蛋白标准品加去离子水稀释 至 50ug/ml（此方案工作线性范围为 5-50ug/ml。） ,其它步骤和常规测定相同。 您
12、也可以根据需要调整蛋白标准品的浓度和各管中 蛋白标准品的添加量，以便得到更精确的结果。 常见问题 ： 1. 当吸光度大于 0.8A时，请把样本稀释后再测定。 2. Bradford 法测定蛋白浓度时 待测样品浓度在 1 1500 微克 /毫升浓度范围内有较好的线性关系。 您也可以根据需要 调整标准蛋白稀释浓度范围来绘制标准曲线 ，以便得到更精确的结果 。 3. 最好使用塑料或玻璃比色皿。如使用石英比色皿，使用后立即用少量 95%的乙醇荡洗，以洗去染色用完后可以乙醇反复清洗。塑料比色皿决不可用乙醇或丙酮长时间浸泡。 4. 比色顺序从蛋白浓度低的管开始，中间不必清洗比色 皿 ，以免影响结果。 5.
13、 疏水蛋白或粘蛋白，可能与染料发生沉淀，加入等体积 1N NaOH 可以消除。 6. 如果知道样品的蛋白大体浓度，可以采用相近的 3管做标准曲线。 7. 由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同，因此 Bradford 法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差 。 8. Bradford 染色液含有刺激性或者腐蚀 性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。 若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。 9. Bradford 染色液中考马斯亮蓝易聚集成团，每次使用前请颠倒 6 8 次并且竖直抓住瓶口做水平圈动作，旋转瓶中液体，帮助充分混匀，但不可以上下振荡混匀。 10.
14、低温会降低 Bradford 染色液的敏感度，因此每次使用前应该使 Bradford 染色液回复到室温，可以倒出每次需要的 Bradford 染色液，将原瓶放回冰箱，仅仅将需要的 Bradford 染色液复温，可以减少复温时间 。 考马斯亮蓝 (Bradford)法蛋白浓度测定试剂盒 M2031 产品说明书 上海美季生物技术有限公司 上海市中山南二路 777 号 2 号搂 2303 Mbchem品牌为上海美季生物技术有限公司所有 电话： 86-021-51873168 传真 :86-021-51875086-800 本产品仅供科学研究使用 This product is for resear
15、ch use only. Not for human or diagnostic use. 11. 标准品曲线配制时，如果吸量不准确或者加样枪不精确会造成标准曲线相关系数减小，可根据需要使用倍比梯度稀释的方法来配制，或者使用精确度高的加样枪。 12. 由于 Bradford 法在蛋白浓度增高到一定时候，颜色反应并不成比例增加，因此得到的标准曲线只是在一定范围内可以近似看成直线，每次应按照实际测得的标准曲线计算出相对精确的蛋白浓度。 13. 需要酶标仪一台，最佳检测波长为 595nm，也可以在 570 610nm 之间波长测定，但会降低一些灵敏度。并需 96 孔板。如果没有酶标仪，也可以使用普通
16、的分光光度计测定。使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。 14. 不像其它一些蛋白浓度测定方法（包括 Lowry 法）， Bradford 法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。样品中巯基乙醇的浓度可高达 1M，二流苏糖醇的浓度可高达 5mM。但受略高浓度的去垢剂影响。需确保 SDS 低于 0.125%,Triton X-100 低于 0.125%， Tween 20 低于 0.06%，可以考虑用超纯水稀释，透析 /除盐， ACETONE/TCA 沉淀 蛋白后重溶于超纯水等方法来消除干扰物质的影响。 含去垢剂的样品推荐使用 Mbchem的 BCA 蛋白浓度测定试剂盒（ Mbchem M3020）。 相关产品 : M2030-1 BCA Protein Assay Kit 250 assays M2030-2 BCA Protein Assay Kit 1000 assays M2032-1 Lowry Protein Assay Kit 250 assays M2032-2 Lowry Protein Assay Kit 1000 assays
