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考马斯亮蓝(Bradford)法蛋白浓度测定试剂盒.pdf

1、 考马斯亮蓝 (Bradford)法蛋白浓度测定试剂盒 M2031 产品说明书 上海美季生物技术有限公司 上海市中山南二路 777 号 2 号搂 2303 Mbchem品牌为上海美季生物技术有限公司所有 电话: 86-021-51873168 传真 :86-021-51875086-800 本产品仅供科学研究使用 This product is for research use only. Not for human or diagnostic use. 考马斯亮蓝 (Bradford)法蛋白浓度测定试剂盒 Coomassie (Bradford) Protein Assay Kit 产品简

2、介: Bradford法(考马斯亮蓝法),是目前灵敏度最高的蛋白质测定法之一。当 Bradford 染色液(考马斯亮蓝 G250)和蛋白在酸性条件下结合时,溶液颜色由棕黑色转为蓝色,最大吸光值波长由 456nm 转至 595nm,吸光值与蛋白质的含量在一定浓度范围内有较好的线性关系,通过测定吸光值大小并对照标准蛋白的吸光值,推算出蛋白浓度,实现了蛋白浓度测定的快速,稳定和高灵敏度。 Bradford 染色液为 2 倍浓缩母液,便于储存。 产品特点 : 快速, 10-20 个样品只需要 10 分钟即可完成测定。 稳定,加样混匀后 2 分钟既可测定, 1 小时内吸光度变化不超过 10%。 最小测量

3、体积为 1-20 uL,最低测量蛋白量为 0.5 ug。 有常规和微量两种检测模式。 不受绝大部分样品中的化学物质的影响。巯基乙醇的浓度可高达 1M,二硫苏糖醇的浓度可高达 5 mM。 但受略高浓度的表面活性剂影响,各种蛋白质与染料的结合效率可能有差异。 经济实用:在微孔板中进行测定,可大大节约样品和试剂用量。 产品组成: 产品组成 M2031-1 M2031-2 规格 250 次微孔板法或 50次比色皿法 1000次微孔板法或 200次比色皿法 Albumin (BSA)蛋白标准(5mg/ml) 0.5ml 1.5ml Bradford 2x 染色液 25ml 100ml 考马斯亮蓝 (Br

4、adford)法蛋白浓度测定试剂盒 M2031 产品说明书 上海美季生物技术有限公司 上海市中山南二路 777 号 2 号搂 2303 Mbchem品牌为上海美季生物技术有限公司所有 电话: 86-021-51873168 传真 :86-021-51875086-800 本产品仅供科学研究使用 This product is for research use only. Not for human or diagnostic use. 保存温度: Bradford染色液 2-8 保存 , BSA蛋白标准 -20 保存 。有效期一年。 操作步骤: 一、 常规测定 A 96 孔酶标板测定: 1.

5、 根据需要 从冰箱取出 适量 Bradford 2x 染色液 ,平衡至室温并混匀;预热酶标仪 20分钟。 2. 根据需要取适量标准品 ,加入去离子水稀释至 1mg/ml(原液 5mg/ml),并混匀 。 注意: 原则上 蛋白样品在什么溶液中,标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见,也可以用去离子水、 0.9%NaCl或 PBS稀释标准品。稀释后的蛋白标准品也可以 -20长期保存。以下步骤中均默认采用去离子水,可以根据条件选择使用稀释液。 3. 标准曲线绘制。取一块酶标板,按以下表格数据加入试剂: (此方案工作线性范围为100-1000ug/ml。) 孔号 A B C D E F G H 蛋

6、白标准( l) 0 1 2 3 4 6 8 10 去离子水( l) 100 99 98 97 96 94 92 90 Bradford 2x 染色液 ( l) 100 100 100 100 100 100 100 100 对应的蛋白含量( g) 0 1 2 3 4 6 8 10 最终体积 200ul 4. 振荡混匀后,室温放置 5-10 分钟。 5. 用酶标仪测定 595nm处的吸光值 ,以不含 BSA 的光吸收值为空白对照。 6. 以蛋白含量( g)为横坐标,吸光值为纵坐标,绘出标准曲线。 7. 样品测定:将待测蛋白样品用去离子水稀释至适当浓度,取 10 l 样品,加入 100 l 2x

7、Bradford 染色液和 90 l 的去离子水,混匀后放置 5-10 分钟,然后以 A 号孔为对照,测定样品吸收值 A595。 考马斯亮蓝 (Bradford)法蛋白浓度测定试剂盒 M2031 产品说明书 上海美季生物技术有限公司 上海市中山南二路 777 号 2 号搂 2303 Mbchem品牌为上海美季生物技术有限公司所有 电话: 86-021-51873168 传真 :86-021-51875086-800 本产品仅供科学研究使用 This product is for research use only. Not for human or diagnostic use. 8. 根据

8、测得的吸收值,在标准曲线上即可查得样品的蛋白含量。 9. 计算蛋白浓度:以查得的蛋白含量除以样品体积 10 l,再乘以相应的稀释倍数即可得到待测样品的实际浓度。 B 比色皿测定 : 1. 根据需要从冰箱取出适量 Bradford 2x 染色液 ,平衡至室温并混匀;预热酶标仪 20分钟。 2. 根据需要取适量标准品 ,加入去离子水稀释至 1mg/ml(原液 5mg/ml),并混匀 。 注意: 原则上 蛋白样品在什么溶液中,标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见,也可以用去离子水、 0.9%NaCl或 PBS稀释标准品。稀释后的蛋白标准品也可以 -20长期保存。以下步骤中均默认采用去离子水,可

9、以根据条件选择使用稀释液。 10. 标准曲线绘制。 取 8个比色皿分别编号为 A-H,按以下表格数据加入试剂: (此方案工作线性范围为 100-1000ug/ml。) 孔号 A B C D E F G H 蛋白标准( l) 0 5 10 15 20 30 40 50 去离子水( l) 500 495 490 485 480 470 460 450 Bradford 2x 染色液 ( l) 500 500 500 500 500 500 500 500 对应的蛋白含量( g) 0 5 10 15 20 30 40 50 最终体积 1000ul 3. 振荡混匀后,室温放置 5-10 分钟。 4.

10、用 分光光度计 测定 595nm处的吸光值 ,以不含 BSA 的光吸收值为空白对照。 5. 以蛋白含量( g)为横坐标,吸光值为纵坐标,绘出标准曲线。 6. 样品测定:将待测蛋白样品用去离子水稀释至适当浓度,取 50 l 样品,加入 500 l 2x Bradford 染色液和 450 l 的去离子水,混匀后放置 5-10 分钟,然后以 A 号 比色皿 为对照,测定样品吸收值 A595。 考马斯亮蓝 (Bradford)法蛋白浓度测定试剂盒 M2031 产品说明书 上海美季生物技术有限公司 上海市中山南二路 777 号 2 号搂 2303 Mbchem品牌为上海美季生物技术有限公司所有 电话

11、: 86-021-51873168 传真 :86-021-51875086-800 本产品仅供科学研究使用 This product is for research use only. Not for human or diagnostic use. 7. 根据测得的吸收值,在标准曲线上即可查得样品的蛋白含量。 8. 计算蛋白浓度:以查得的蛋白含量除以样品体积 50 l,再乘以相应的稀释倍数即可得到待测样品的实际浓度。 二、 微量 测定 : 只需要将常规测定 第 2步 中的蛋白标准品加去离子水稀释 至 50ug/ml(此方案工作线性范围为 5-50ug/ml。) ,其它步骤和常规测定相同。 您

12、也可以根据需要调整蛋白标准品的浓度和各管中 蛋白标准品的添加量,以便得到更精确的结果。 常见问题 : 1. 当吸光度大于 0.8A时,请把样本稀释后再测定。 2. Bradford 法测定蛋白浓度时 待测样品浓度在 1 1500 微克 /毫升浓度范围内有较好的线性关系。 您也可以根据需要 调整标准蛋白稀释浓度范围来绘制标准曲线 ,以便得到更精确的结果 。 3. 最好使用塑料或玻璃比色皿。如使用石英比色皿,使用后立即用少量 95%的乙醇荡洗,以洗去染色用完后可以乙醇反复清洗。塑料比色皿决不可用乙醇或丙酮长时间浸泡。 4. 比色顺序从蛋白浓度低的管开始,中间不必清洗比色 皿 ,以免影响结果。 5.

13、 疏水蛋白或粘蛋白,可能与染料发生沉淀,加入等体积 1N NaOH 可以消除。 6. 如果知道样品的蛋白大体浓度,可以采用相近的 3管做标准曲线。 7. 由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同,因此 Bradford 法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差 。 8. Bradford 染色液含有刺激性或者腐蚀 性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。 若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。 9. Bradford 染色液中考马斯亮蓝易聚集成团,每次使用前请颠倒 6 8 次并且竖直抓住瓶口做水平圈动作,旋转瓶中液体,帮助充分混匀,但不可以上下振荡混匀。 10.

14、低温会降低 Bradford 染色液的敏感度,因此每次使用前应该使 Bradford 染色液回复到室温,可以倒出每次需要的 Bradford 染色液,将原瓶放回冰箱,仅仅将需要的 Bradford 染色液复温,可以减少复温时间 。 考马斯亮蓝 (Bradford)法蛋白浓度测定试剂盒 M2031 产品说明书 上海美季生物技术有限公司 上海市中山南二路 777 号 2 号搂 2303 Mbchem品牌为上海美季生物技术有限公司所有 电话: 86-021-51873168 传真 :86-021-51875086-800 本产品仅供科学研究使用 This product is for resear

15、ch use only. Not for human or diagnostic use. 11. 标准品曲线配制时,如果吸量不准确或者加样枪不精确会造成标准曲线相关系数减小,可根据需要使用倍比梯度稀释的方法来配制,或者使用精确度高的加样枪。 12. 由于 Bradford 法在蛋白浓度增高到一定时候,颜色反应并不成比例增加,因此得到的标准曲线只是在一定范围内可以近似看成直线,每次应按照实际测得的标准曲线计算出相对精确的蛋白浓度。 13. 需要酶标仪一台,最佳检测波长为 595nm,也可以在 570 610nm 之间波长测定,但会降低一些灵敏度。并需 96 孔板。如果没有酶标仪,也可以使用普通

16、的分光光度计测定。使用分光光度计测定蛋白浓度时,每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。 14. 不像其它一些蛋白浓度测定方法(包括 Lowry 法), Bradford 法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。样品中巯基乙醇的浓度可高达 1M,二流苏糖醇的浓度可高达 5mM。但受略高浓度的去垢剂影响。需确保 SDS 低于 0.125%,Triton X-100 低于 0.125%, Tween 20 低于 0.06%,可以考虑用超纯水稀释,透析 /除盐, ACETONE/TCA 沉淀 蛋白后重溶于超纯水等方法来消除干扰物质的影响。 含去垢剂的样品推荐使用 Mbchem的 BCA 蛋白浓度测定试剂盒( Mbchem M3020)。 相关产品 : M2030-1 BCA Protein Assay Kit 250 assays M2030-2 BCA Protein Assay Kit 1000 assays M2032-1 Lowry Protein Assay Kit 250 assays M2032-2 Lowry Protein Assay Kit 1000 assays

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