bca法与考马斯亮蓝法

1、 学科分类号 本科生毕业论文题 目(中文)：考马斯亮蓝法、银染法测定蛋白质纯度的对比研究 （英文）： Coomassie brilliant blue and silver staining method to determine the protein purity of contrast research 学生姓名： 学 号： 1011402014 系 别： 化学化工系 专 业： 制药工程 指导教师： 讲师 起止日期： 2013.09 2014.05 2014 年 5 月 26 日怀化学院本科毕业论文(设计)诚信声明作者郑重声明：所呈交的本科毕业论文。

2、实验二 植物组织中可溶性蛋白的测定,实验目的,植物体内的可溶性蛋白质大多数是参与各种代谢的酶类，测其含量是了解植物体总代谢的一个重要指标。在研究每一种酶的作用时，常以比活（酶活力单位mg蛋白）表示酶活力大小及酶制剂纯度。因此，测定植物体内可溶性蛋白质是研究酶活的一个重要项目。,实验原理,考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离态下呈红色，当它与蛋白质的疏水区结合后变为青色，前者最大光吸收在465nm，后者在595nm。在一定蛋白质浓度范围内（0100g/ml），蛋白质与色素结合物在595nm波。

3、生物化学实验技术课程作业 第 1 页蛋白质含量测定法考马斯亮蓝法实验目的学习、掌握考马斯亮蓝法（Bradford 法）测定蛋白质含量的方法实验原理 （ 蓝 色 ）变 为氨 基 酸芳 香 族碱 性染 料考 马 斯 亮 蓝 磷 酸 nmG59250max 器材与试剂器材722 型可见光分光光度计、漩涡混合器、试管 16 支试剂1.标准蛋白质溶液，用牛血清清蛋白（BSA） ，配制成 1.00mg/ml。2.考马斯亮蓝 G-250 染料试剂：称 100mg 考马斯亮蓝，溶于 50ml 95%的乙醇后，再加入 120ml 85% 的磷酸，用水稀释至 1 升。实验方法标准方法1.取 10 支试管，分别编号后按 表 1 剂。

4、 考马斯亮蓝 (Bradford)法蛋白浓度测定试剂盒 M2031 产品说明书 上海美季生物技术有限公司 上海市中山南二路 777 号 2 号搂 2303 www.mbchemic.com Mbchem品牌为上海美季生物技术有限公司所有 电话： 86-021-51873168 传真 :86-021-51875086-800 本产品仅供科学研究使用 This product is for research use only. Not for human or diagnostic use. 考马斯亮蓝 (Bradford)法蛋白浓度测定试剂盒 Coomassie (Bradford) Protein Assay Kit 产品简介： Bradford法（考马斯亮蓝法），是目前灵敏度最高的蛋白质测定法之一。当 Bradford 染色液（。

5、考马斯亮蓝 G250 法原理 考马斯亮蓝 G250GooMAssIe BrIllIAnT Blue G250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝 G250 在游离状态下呈红色，在稀酸溶液中，当它与蛋白质的疏水区结合后变为青色，前者。

6、考马斯亮蓝法测定 蛋白质含量,一、实验目的。,掌握考马斯亮蓝法定量测定蛋白质的原理与方法。 熟练分光光度计的使用和操作方法。,双缩脲法和Folin酚试剂法的明显缺点和许多限制，促使科学家们去寻找更好的 蛋白质溶液测定的方法。 1976年由Bradford建立的考马斯亮兰法（Bradford法），是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点，因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。,考马斯亮蓝法出现背景,二、实验原理,考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染。

7、考马斯亮蓝法测定蛋白质含量,掌握考马斯亮蓝法定量测定蛋白质的原理与方法。 熟练分光光度计的使用和操作方法。,一、实验目的。,考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置，由465nm变为595nm，溶液的颜色也由棕红色变为蓝色。经研究认为，染料主要是与蛋白质中的碱性氨基酸（特别是精氨酸）和芳香族氨基酸残基相结合。 在595nm下测定的吸光度值，与蛋白质浓度成正比,实验原理,器材。可见分光光度计、试管、试管架、刻度移液管、移液枪 试剂。 水 考马斯亮蓝试剂 称取考马斯亮蓝G250 100，加95乙醇100ml，。

8、标准曲线制作考马斯亮蓝法测蛋白质含量一、标准曲线一般用分光光度法测物质的含量，先要制作标准曲线，然后根据标准曲线查出所测物质的含量。因此，制作标准曲线是生物检测分析的一项基本技术。二、蛋白质含量测定方法1、凯氏定氮法2、双缩脲法3、Folin- 酚试剂法4、紫外吸收法5、考马斯亮蓝法三、考马斯亮蓝法测定蛋白质含量标准曲线制作（一） 、试剂：1、考马斯亮蓝试剂：考马斯亮蓝 G250 100mg 溶于 50ml 95%乙醇，加入 100ml 85% H3PO4，用蒸馏水稀释至 1000ml,滤纸过滤。最终试剂中含 0.01%（W/V）考马斯亮蓝 G250,4.7%（W/V）乙醇。

9、 考马斯亮蓝法测蛋白质含量 一、原理 考马斯亮蓝 G-250（Coomassie G-250）是一种甲基取代的三苯基甲烷，分子中磺酸基的蓝色染料，在 465nm 处有最大吸收值。考马斯亮蓝 G-250 能与蛋白质通过范得华相互作用形成蛋白质考马斯亮蓝复合物蓝色溶液，引起该染料的最大吸收 max 的位置发生红移，在 595nm 处有最大吸收值。由于蛋白质考马斯亮蓝复合物在595nm 处的光吸收远高于考马斯亮蓝在 465nm 处的光吸收，因此，可大大地提高蛋白质的测定灵敏度。蛋白质考马斯亮蓝复合物溶液颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比。利用溶液颜色的差异进行比色测。

10、微丝的显示: 考马斯亮蓝法显示细胞中的微丝,山东师范大学生命科学学院 邢维贤,目的要求 基本原理 实验用品 方法与步骤 实验结果 实验报告,目的要求,掌握考马斯亮蓝的染色方法； 了解细胞内微丝的分布。,实验原理,细胞质中错综复杂的纤维网络结构称为细胞骨架，主要包括微管、微丝和中间纤维。考马斯亮蓝R250是一种普通的蛋白染料，它可以使多种蛋白质着色，由于有些细胞骨架纤维在该实验条件下不够稳定，有些类型的纤维太细，在光学显微镜下无法分辨，因此我们看到的主要是微丝组成的张力纤维。张力纤维在体外培养细胞中普遍存在，与细胞。

11、,Tianjin Medical University,天津医科大学药学院体内药物分析第三章,考马斯亮蓝法（Bradford法）,徐 亮,xuliangtijmu.edu.cn,一、基本原理,酸性溶液两者结合，使染料溶液的最大吸收峰的位置，由465nm变为595nm，溶液的颜色也由棕黑色变为兰色。,二、试剂与器材 试剂：（1）考马斯亮蓝试剂： 考马斯亮蓝G250 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H3PO4，用蒸馏水稀释至1000ml, 滤纸过滤。最终试剂中含0.01%（W/V）考马斯亮蓝G250, 4.7%（W/V）乙醇，8.5%（W/V）H3PO4。（2）标准蛋白质溶液： 纯的牛血清血蛋白，根据其纯度同0.15mol/L N。

12、考马斯亮蓝法（Bradford 法）测定蛋白质浓度一、实验原理 双缩脲法（biuret 法）和 folin酚试剂法（lowry 法）的明显缺点和许多限制，促使科学家们去寻找更好的蛋白质溶液测定的方法。1976 年由 bradford 建立的考马斯亮兰法（bradford 法） ，是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点，因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。考马斯亮兰 g-250 染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置（lmax） ，由 465nm 变为 595nm，溶液的颜色也由棕黑。

13、分光光度法介绍分光光度法是利用溶液中特定溶质的光吸收测定其浓度的方法，其基本原理是根据Lambert和 Beer 定律。一 Lambert 定律当一束平行单色光垂直照射于一均匀物质溶液时，溶液将吸收一部分光能，使光的强度减弱。若溶液的浓度不变，则在溶液中的光程越长，光线强度的减弱也越显著。设：入射光强度为 I0，透射光强度为 I，L 代表光在溶液中的光程。lg =K1LI0IK1是常数，受光线波长，溶液性质，溶液浓度影响。二 Beer 定律当一束光通过一溶液时，光能被溶液介质吸收一部分，若光程不变，则溶液的浓度越大，光吸收越强，透射光强度的。

14、实 验 四：蛋白质的定量测定 考马斯亮蓝法（Bradford）和BCA法,实验目的及要求,了解考马斯亮蓝法（Bradford法）和BCA法的原理及干扰因素 掌握标准曲线法测定蛋白质含量的方法,蛋白质检测及含量的测定,一、化学检测1、凯氏定氮法（Kjeldahl)：0.21.0 mg/ml (平均含氮量16%)2、双缩脲法（Biuret）：110 mg/ml （肽键在碱性溶液中与铜离子络合呈紫红色）3、Folin-酚试剂法（Lowry）：20-250 mg/ml （干扰因素多）4、考马斯亮蓝法（Bradford）：10100 mg/ml （受蛋白质内氨基酸组成影响较大）5、BCA法（bicinchoninic acid二喹林甲酸）：5-200。