RNA的提取课件

1、 从细胞中提取 RNA得方法 1。加入 00ul 得 Trizo 将细胞悬浮起来 , 在室温下 (15-3 C) 用手 摇均 , 放置 5 分钟以上 ; 2。涡旋秒后 , 将样品轻离至底部 , 加入 160l 得氯仿 , 再涡旋 30 秒, 室温放置 25 分钟 ; 、 用 4C离心机 , 3000rpm 离心 15 分钟 , 使样品分层 ; 4。 将最上面得水相溶液。

2、氯仿是分子量比较大的有机溶剂，在提取 RNA 时，氯仿可以有效的使有机相和无机相迅速分离。RNA 提取过程，有机相中主要是酚和蛋白结合，从而使得蛋白和 RNA 脱离，RNA 进入水相。氯仿的作用有多个方面，加入氯仿，虽然有变性蛋白质的作用，但是其主要用处是用来分相，实际上是加速有机相和水相的分层。一般的trizol试剂在4度下是油状悬浮液，提高温度，放置一段时间，自然也会分相。离心后混合物分成三层：下层苯酚-氯仿层，中间层，上层无色的水样层。RNA无一例外地存在于水样层当中。水样层的容量大约为400ul。【标准： 1mlTrizol加200u。

3、植物组织 RNA 提取的难点及对策 从植物组织中提取 RNA 是进行植物分子生物学方面研究的必要前提。要进行 Northern杂交分析，纯化 mRNA 以用于体外翻译或建立 cDNA 文库，RT-PCR 及差示分析等分子生物学研究，都需要高质量的 RNA。因此，从植物组织中提取纯度高、完整性好的 RNA 是顺利进行上述研究的关键所在。从文献报道上看，有许多植物就是由于未能有效地分离纯化其组织中的 RNA， 而阻碍了其分子生物学方面研究的进展。一般认为在这些植物组织中，或富含酚类化合物，或富含多糖，或含有某些尚无法确定的次级代谢产物，或 RNase 的活性。

4、DNA/RNA 的提取、纯化与鉴定 编辑词条 发表评论(0) 目录 DNA 的提取纯化 基因组 DNA 的提取 从植物组织提取基因组 DNA 从动物组织提取基因组 DNA 细菌基因组 DNA 的制备 基因组 DNA 的检测 组织 DNA 的提取和纯化 石蜡包埋组织的 DNA 提取及其应用 外周血 DNA 提取技术 真核细胞 DNA 的制备 植物组织中 DNA 的提取 细菌 DNA 的提取方法 真菌 DNA 提取总结的两种方法 组织 mRNA 提取操作步骤 RNA 酶活性的控制 用异硫氰酸胍和有机溶剂提取 RNA mRNA 的分离 哺乳动物细胞总 RNA 的分离 植物总 RNA 的分离 植物 mRNA 的分离 PCR 常见问题分析。

5、华越洋新型超快土壤 RNA 提取试剂盒 Quick Total RNA Isolation Kit一般来说从污泥淤泥森林土壤河边土壤稻田泥土草地,池塘泥土竹林等土壤提取 RNA 比较难，因为土壤中的 RNA 含量少，而且 RNA 非常容易降。

6、1 2020 4 9 实验三 动物组织总RNA的提取与电泳 四川大学基础医学与法医学院生物化学与分子生物学廖英 2 2020 4 9 1 实验目的和要求2 相关基础知识3 实验方法 步骤和注意事项 3 2020 4 9 一 实验目的和要求掌。

7、酵母RNA的提取与鉴定,实验目的,掌握稀碱法分离酵母RNA的原理与操作过程。 了解RNA的组分并掌握定性鉴定的具体方法。,实验原理,由于RNA的来源和种类很多，因而提取制备方法也各异，一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。 苯酚法是实验室最常用的。组织匀浆用苯酚处理并离心后，RNA即溶于上层被苯酚饱和的水相中，DNA和蛋白质则留在苯酚层中，向水层加入乙醇后，RNA即以白色絮状沉淀析出。 此法能较好地除去DNA和蛋白质，提取的RNA具有生物活性。,实验原理,酵母细胞富含核酸，且核酸主要是RNA，含量为干菌体的2.67%10.0%，而DNA含量较少，仅为。

8、RNA提取方法及原理,John,1、研究背景,1.1 RNA研究的重要性DNA，RNA和蛋白质是三种重要的生物大分子，是生命现象的分子基础。 DNA的遗传信息决定生命的主要性状，而mRNA在信息传递中起很重要的作用。其它两大类RNA，rRNA和tRNA，同样在蛋白质的生物合成中发挥不可替代的重要功能。因此mRNA、rRNA、tRNA在遗传信息由DNA传递到表现生命性状的蛋白质的过程中举足轻重。,1.2 RNA分布,2、方法及原理,2.1 RNA的提取流程1、样本前处理2、细胞裂解3、 RNA的纯化及获得,RNA提取流程 样品前处理注意点,选择新鲜血液，不得超过4小时,选择新鲜的幼嫩组。

9、总 RNA提取的原理、步骤1.原理及方法（异硫氰酸胍-酚-氯仿 一步法）TRIZOL试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚，其中异硫氰酸胍可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使 RNA与蛋白质分离，并将 RNA释放到溶液中。当加入氯仿时，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使 RNA进入水相，离心后可形成水相层和有机层，这样 RNA与仍留在有机相中的蛋白质和 DNA分离开。水相层（无色）主要为 RNA，有机层（黄色）主要为DNA和蛋白质。2.简易步骤细胞或组织，加入 0.4ml TRIZOL试剂后匀浆室温静置 5分钟加入 1/5 TRIZOL试剂体积量的氯仿，剧烈震荡混匀室。

10、实验十、酵母RNA的提取及鉴定,一、原理 酵母核酸中RNA含量较多，DNA含量则少于2%。 RNA可溶于碱性溶液，当碱被中和后，可加乙醇使其沉淀，有此可得粗RNA制品。,二、实验仪器 离心机 水浴锅 电炉 烧杯 量筒,三、实验试剂,干酵母粉 0.2%氢氧化钠溶液：2g氢氧化钠溶于蒸馏水并稀释至1000ml。 乙酸 95%乙醇 无水乙醚 10%硫酸 氨水 5%硝酸银溶液：5g硝酸银溶于蒸馏水并稀释至100ml，贮于棕色瓶中。,1.RNA的提取：称取2g干酵母粉于100ml烧杯中，加入0.2%氢氧化钠溶液10ml，沸水浴加热30分钟，经常搅拌（如沸水浴过程中溶液蒸干可再加510ml氢氧化。

11、反转录和实时荧光定量PCR技术的原理及应用 (Reverse Transcription and Real time Quantitative PCR),泰山医学院 动脉粥样硬化研究所 宋国华 girl_sapphirehotmail.com,RT-PCR,逆转录（reverse transcription）是以RNA为模板合成DNA的过程，即RNA指导下的DNA合成。是RNA病毒的复制形式，需逆转录酶的催化。艾滋病病毒(HIV)就是一种典型的逆转录病毒。,逆转录与反转录严格意义上来说没有什么区别，但是逆转录是RNA类病毒自主行为，在整合到宿主细胞内以RNA为模板形成DNA的过程；反转录是进行基因工程过程中，人为地提取出所需要的目的基因。

12、 1 / 7果蝇总 RNA 和总蛋白的提取与电泳条带分析摘 要：本实验第一部分用果蝇成体为材料，以 Trizol 为提取液提取 total RNA，进行反转录制备 cDNA，通过琼脂糖凝胶电泳检测 total RNA 和 cDNA 浓度，并结合电泳图谱对total RNA 和 cDNA 图样进行分析；第二部分以果蝇幼体为材料，提取总蛋白，通过 SDS-PAGE 检测果蝇总蛋白表达，对表达结果进行简要分析，并比较了成体和幼体果蝇的蛋白表达差异。关键词：果蝇；total RNA；总蛋白；反转录；RT-PCR1 前言果蝇是一种非常重要的模式生物，通常所指的是黑腹果蝇，学名：Drosophila melanogast。

13、酵母的制备、鉴定及含量测定,结构简介,二、实验原理,选材：提取和制备RNA的首要问题是选RNA含量高的材料。微生物是工业上大量生产核酸的原料，其中RNA的提制以酵母最为理想，因为酵母核酸中主要是RNA（2.6710.0%），DNA很少（0.030.516），而且菌体容易收集，RNA也易于分离。此外，抽提后的菌体蛋白质（占干菌体的50%）仍具有很高的应用价值。,提取,注意：所有的组织中均存在RNA酶,人的皮肤、手指、试剂、容器等均可能被污染,因此全部实验过程中均需戴手套操作并经常更换（使用一次性手套）。所用的玻璃器皿需置于干燥烘箱中200（180 ）烘。

14、DNA、RNA提取的差别,极性化合物，溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂，钠盐比游离核酸易溶于水。在酸性溶液中，DNA、RNA易水解，在中性或弱碱性溶液中较稳定。天然状态的DNA 是以脱氧核糖核蛋白(DNP)形式存在于细胞核中。,核酸的理化性质,提取DNA、RNA总的原则 :,1 保证核酸一级结构的完整性； 2 其他生物大分子的污染应降低到最低程度； 3 不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子； 4 其他核酸分子，也应尽量去除。,核酸提取的基本步骤,1.材料准备2.破碎细胞或包膜内容物释放3.核酸分离、纯化4.沉淀或吸附核酸，并去除杂。

15、提取细胞 RNA 的步骤：1) 六孔板每孔细胞中加入 1ml Trizol，冰上放置 5min，枪头吹打。2) 将各孔裂解液吸到 1.5 ml EP 管中，加入氯仿 0.2ml/管，用力振摇 15s。1530下孵育2-3min，离心（4，12，000g，15min）。3) 离心后液体分为三层（上层无色水样层为 RNA，中层白色为 DNA 和底层红色为蛋白质），小心吸取上层无色液体移入一新的 EP 管中。4) 加入等体积异丙醇，0.40.5ml，混匀，15-30下孵育 1030min，离心（4，12，000g，10min）。其中如果加入等体积异丙醇后，置于试管架上用 PE 手套密封后，放于4冰箱中，沉淀 30min 效果更好。5) 。

16、酵母RNA的提取,1、实验目的,1、掌握稀碱法提取RNA的原理和方法2、学习和了解其它提取RNA的方法和原理,2、实验重点和难点,离心机的使用 提取RNA的实验原理,3、实验原理,一般的生物细胞中同时含有DNA和RNA，在酵母中RNA比DNA的含量高得多， RNA（2.6710.0%），DNA则少于2(O.03O.516)，在实验室常用酵母作为RNA提取的材料。若要制备具有生物活性的RNA，可采用苯酚法、去污剂法和盐酸胍法等，最常用的是苯酚法提取RNA；若对生物活性没有要求，则可使用浓盐法，稀碱法等。工业中用稀碱法或浓盐法，主要用于制备核苷酸的原料.,苯酚法：组织匀浆。

17、TRIZOL 法提取植物总 RNA所用器皿均按 RNA 提取的常规方法处理。具体程序为：（1）：取材料，加液氮研磨，在 1.5 ml 离心管中，分别加 1ml TRIZol（Tiangen）或 RNAiso（TAKALA）试剂，在离心管中加 5-6 勺样品，约 1g，用力摇 15 秒（也可涡旋） ，室温静置 15 分钟；（2）加 200ul 的氯仿上下颠倒混匀，室温静置 2min；（3）4 ，12,000g 离心 15 分钟；（4）将上清液移入新的 1.5ml 离心管，分层，下层红色酚层，界面，上层水相（含 RNA） ；（5）加入等体积的异丙醇沉淀 RNA（一般 500-700ul） ，轻微颠倒，-20沉降 1h（此过程可延长）。

18、总 RNA 的提取（Trizol 法提取）在收集到生物材料之后，最好能即刻进行 RNA 制备工作。若需暂时储存， 则应以液氮将生物材料急速冷冻后，储存于-80冷冻 柜。在制 备 RNA 时，将储存于冷冻柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破细胞，不可以先行解冻，以避免 RNase 的作用。1. 提取组织 RNA 时，每 50100mg 组织用 1ml Trizol 试剂对组织进行裂解；提取细胞 RNA 时，先离心沉淀细胞，每 5-10 106 个 细胞加 1ml Trizol 后，反复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞；2. 将上述组织或细胞的 Trizol 裂解液转入 EP 管中,在室温 1530C 下放置 。

19、RNA 的提取(TRIzol 法)TRIzol 试剂适用于从细胞和组织中快速分离 RNA。TRIzol 试剂有多组分分离作用，与其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚/SDS 法、盐酸胍法、硫氰酸胍法等相比，最大特点就是可同时分离一个样品的 RNA/DNA/蛋白质。TRIzol 使样品匀浆化，细胞裂解，溶解细胞内含物，同时因含有 RNase 抑制剂可保持 RNA 的完整性。在加入氯仿离心后，溶液分为水相和有机相，RNA 在水相中。取出水相用异丙醇沉淀可回收 RNA，用乙醇沉淀中间层可回收 DNA，用异丙醇沉淀有机相可回收蛋白质。TRIzol 试剂可用于小量样品（50-100mg 组织）也适用于大。

20、一.组织 RNA 提取1.最好新鲜组织，这样 RNA 提取的效果比较好，这是肯定的。2. 如果不是新鲜的（最好在半年之内，-80或者液氮中冻存的）组织，注意不要反复冻融，从冰冻状态拿到0-4，注意不要拿到常温，待组织解冻后，用 DEPC 泡过的剪刀剪一小块组织，称重后，放到预冷的匀浆器中，然后加入一定量的 TRIZOL 试剂，然后匀浆。注意：速度不要太快，要匀一会挺一会，否则由于摩擦产热，RNA 遇热会加速降解。如果一次做多个标本的 RNA 提取，也要这样做，更不能急。后面的步骤和细胞 RNA 提取一样。二.培养细胞的 RNA 提取1.贴壁细胞，需要先。