1、TRIZOL 法提取植物总 RNA所用器皿均按 RNA 提取的常规方法处理。具体程序为:(1):取材料,加液氮研磨,在 1.5 ml 离心管中,分别加 1ml TRIZol(Tiangen)或 RNAiso(TAKALA)试剂,在离心管中加 5-6 勺样品,约 1g,用力摇 15 秒(也可涡旋) ,室温静置 15 分钟;(2)加 200ul 的氯仿上下颠倒混匀,室温静置 2min;(3)4 ,12,000g 离心 15 分钟;(4)将上清液移入新的 1.5ml 离心管,分层,下层红色酚层,界面,上层水相(含 RNA) ;(5)加入等体积的异丙醇沉淀 RNA(一般 500-700ul) ,轻微颠
2、倒,-20沉降 1h(此过程可延长)(6)4 ,12,000g 离心 15 分钟;(7)弃上清,加 1ml 75%乙醇,轻微颠倒,清洗沉淀,在7,000g,4,离心 5 分钟;(8)弃上清,风干(不能太干否则 RNA 很难溶解) ,加适当体积 RNase-free water 溶解。1.2.2 总 RNA 定量与完整性检测(1)定量:测 A260nm、A280nm 处的吸光值,计算 A260/A280的值,以估计总 RNA 纯度。通过 A260的值计算总 RNA 量。(2)RNA 完整性检测:在 1.2%普通琼脂糖胶上分离总 RNA,若有三条 (代表 rRNAs) 条带清晰,无拖尾的带(如图),则说明总 RNA 完整,可用于后续实验。