花生RNA提取方法

1、从绵羊脂肪组织提取高质量总 RNA 方法的改进及应用42HeilongjiangAnimalScienceandVeterinaryMedicineNo102007试验就针对绵羊饲喂高氟水草对其胫骨生物力学参数改变做一个初步的研究,至于高氟是否影响到胫骨骨密度(BMD),是否过量氟形成氟羟磷灰石可影响到胫骨胶原代谢有待进一步研究.本试验采用苦味酸一天狼星红偏振光法对饲喂不同添加量高氟水草的试验羊肋软骨进行切片学观察,对饲喂高氟绵羊肋软骨胶原纤维分布,排列和含量进行定性的分析.从肋软骨型胶原蛋白纤维进行特殊染色看出(部分图片见图 36),不添加高氟水草的对照组型胶原蛋白纤维。

2、人外周血淋巴细胞 RNA 的提取方法一、采集血样，室温保存。使用一次性的抗凝的真空抽血管进行采血。一般使用 EDTA 或肝素抗凝均可；血量一般为 1ml；一般地，1ml 外周血中含有大约 1-2*106 个单个核细胞（PBMC，即淋巴细胞核单核细胞）。二、提取淋巴细胞。取 1.5ml 无菌无酶的离心管，为管 1，先加入 500ul 淋巴细胞分离液；另一个1.5ml 无菌无酶的离心管中，装有 500ul 血样的真空管和 500ul PBS（磷酸盐缓冲液），1：1 混匀的混合物，共 1ml。然后缓慢把混匀的血样 PBS 混合液加入到有淋巴细胞分离液的管 1 中，注意要缓慢，使血样尽量。

3、RNA 的提取和 cDNA 合成原理和实验方法第一节. 概述从真核生物的组织或细胞中提取 mRNA,通过酶促反应逆转录合成 cDNA 的第一链和第二链,将双链 cDNA 和载体连接,然后转化扩增, 即可获得 cDNA 文库,构建的 cDNA 文库可用于真核生物基因的结构、表达和调控的分析;比较 cDNA 和相应基因组 DNA 序列差异可确定内含子存在和了解转录后加工等一系列问题。总之 cDNA 的合成和克隆已成为当今真核分子生物学的基本手段。自 70 年代中叶首例 cDNA 克隆问世以来,已发展了许多种提高cDNA 合成效率的方法,并大大改进了载体系统，目前 cDNA 合成试剂已商。

4、从细胞中提取RNA的方法 1 加入800ul的Trizol将细胞悬浮起来 在室温下 15 30C 用手摇均 放置5分钟以上 2 涡旋30秒后 将样品轻离至底部 加入160ul的氯仿 再涡旋30秒 室温放置2 5分钟 3 用4C离心机 13000rpm离心15分钟 使样品分层 4 将最上面的水相溶液层转移到新的1 7ml离心管中 加入2ul的糖原Glucogen 5 再加入400ul冰上预冷的异丙醇。

5、物种 提取成功物种 组织部位 提取方法植物 白菜 胚 Planteasy植物 白刺 根 天根试剂盒植物 板栗 胚珠 CTAB+LiCl植物 板栗 胚珠 CTAB+Licl植物 波兰小麦 叶片 CTAB+Licl植物 波兰小麦 根 SDS+柱子植物 彩叶草 叶片 天根试剂盒植物 草莓 叶片 Planteasy+天根 Dnase I植物 侧柏 成熟叶片 Planteasy+plantaid+除糖剂植物 茶树 叶片 TRIzol植物 茶叶 芽头、叶片 Trizol植物 柽柳 根 天根试剂盒植物 赤拟谷盗 叶片 CTAB+LiCl植物 赤霞珠 果皮 CTAB植物 粗叶榕 雌花 CTAB植物 大豆 根、叶、花、豆荚、荚壳、种子 天根试剂盒植物 丹参 根 CTAB植物。

6、实验一 植物基因组 DNA 的提取一、实验目的掌握植物总 DNA 的抽提方法和基本原理。学习根据不同的植物和实验要求设计和改良植物总 DNA 抽提方法。二、实验原理通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞，由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对 DNA 的抽提产生不利的影响，在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。在液氮中研磨，材料易于破碎，并减少研磨过程中各种酶类的作用。十二烷基肌酸钠(sarkosyl) 、十六烷基三甲基溴化铵 (hexadyltrimethyl ammomum bromide，简称为 CTAB)、十二烷。

7、血液 RNA 提取方法1. 取新鲜的血液（紫管），加入 3 倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置 10分钟，10,000 rpm 离心 1 分钟。2. 彻底吸弃上清，收集白细胞沉淀。3. 每 100-200l 血液收集的白细胞沉淀加入 1ml TRIzol。室温放置 5min，使样品充分裂解。4. 4 12,000 rpm 离心 10 分钟，取上清（）。5. 每 1ml TRIzol 加入 200l 氯仿，剧烈振荡混匀后室温放置 3-5 min，自然分相。6. 4 12,000rpm 离心 10-15min。样品会分成三层：黄色的有机相，中间层和无色的水相，RNA 主要在水相中，把水相转移到新管中（小心吸取水相）7. 在上清中加入等体。

8、RNA 的提取(TRIzol 法)TRIzol 试剂适用于从细胞和组织中快速分离 RNA。TRIzol 试剂有多组分分离作用，与其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚/SDS 法、盐酸胍法、硫氰酸胍法等相比，最大特点就是可同时分离一个样品的 RNA/DNA/蛋白质。TRIzol 使样品匀浆化，细胞裂解，溶解细胞内含物，同时因含有 RNase 抑制剂可保持 RNA 的完整性。在加入氯仿离心后，溶液分为水相和有机相，RNA 在水相中。取出水相用异丙醇沉淀可回收 RNA，用乙醇沉淀中间层可回收 DNA，用异丙醇沉淀有机相可回收蛋白质。TRIzol 试剂可用于小量样品（50-100mg 组织）也适用于大。

9、（1） 将花生种子在液氮中研磨成粉末，取适量加入离心管中。（2） 加入 800 ul 提取液和 8 ul -巯基乙醇，充分震荡混匀，冰浴 2min，4，12800rpm,5min。（3） 取上清（800 ul） ，加入 500 ul Tris-饱和酚和 500 ul 氯仿，冰浴 2min, 4， 12800rpm,5min。（4） 取上清（650ul） ，加入 3M 醋酸钠（pH4.8）缓冲液 400ul，加入 500 ul 水饱和酚和500 ul 氯仿，冰浴 2min, 4， 12800rpm,5min。（5） 取上清（770ul） ，加入等体积的异丙醇， -20,冰浴 15min。（6） 4， 12000rpm,10min，弃上清，留沉淀。（7） 75乙醇洗沉淀两次，室温条件下。