逆转录PCR讲义

1、可溶性转化生长因子 1型受体逆转录病毒表达载体对人肝细胞凋亡的抑制作用?170?ChineseHepatology,June2006,Vol11,No.3?论着?可溶性转化生长因子 l311 型受体逆转录病毒表达载体对人肝细胞凋亡的抑制作用高巍周永兴聂青和张惠中【摘要】目的构建表达人转化生长因子一口(TGF-13.)型受体细胞外结合区和人 IgG1Fc 的融合蛋白逆转录病毒载体,并研究重组质粒 pL(邛 RUIgG1Fc)SN 是否拮抗外源性 TGF.p.诱发的肝细胞凋亡,从而为该载体对于肝纤维化的临床应用提供理论依据.方法(1)以 RT-PCR 法扩增目的基因 113RUIgG1Fc,扩增产物纯化后克隆至测序载。

2、未经抗逆转录病毒治疗的 HIV 病人脑白质损伤的 DTI 数据的多变量模式分析 Z.C.Tang Z.Y.Liu R.L.Li X.Yang X.W.Cui S.Wang 宋瑞瑞 Department of Radiology, Beijing You An Hospital,Capital Medical University Identifying the white matter impairments among ART-nave HIV patients: a multivariate pattern analysis of DTI dataZ.C.Tang Z.Y.Liu R.L.Li X.Yang X.W.Cui S.Wang Department of Radiology, Beijing You An Hospital, Capital Medical University; 摘要目的通过对扩散张量成像 (DTI) 数据的多变量模式分析 (MVPA) , 识。

3、多种药物联合的抗逆转录病毒治疗：系统性综述与汇总分析研究动态微生态制剂预防抗生素相关性腹泻:汇总分析Probioticsinpreventionofantibioticassociateddiarrhoea:metaanalysisAloysiusLDSouza,ChakravarthiRajkumar,JonathanCooke,ChritopherJBulpitt研究目的:评估微生态制剂预防和治疗与使用抗生素相关腹泻的作用.研究设计:汇总分析.集中,分析结局数据(未发生腹泻的病人比例),并对治疗组与对照组的比数比进行确定和比较.确认:通过检索 19662000 年 Medline 和 Cochrane 图书馆,确认 9 项有关微生态制剂的随机,双盲,安慰剂对照的临床试。

4、ICS 65.150B 52备 案号 ： DB32江 苏 省 地 方 标 准DB32/T 17382011草 鱼 出 血 病 病 毒 （ GCHV） 逆 转 录 聚 合 酶 链 式 反 应 (RT-PCR)检 测 方 法Test method of reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) for Grass Carp Hemorrhage Virus(GCHV)2011-04-15 发布 2011-06-15 实施江 苏 省 质 量 技 术 监 督 局 发 布DB32/T 17382011I前 言本 标 准 按 GB/T 1.1-2009标准化工作导则 第 1 部分：标准化的结构和编写规则的规定编写。 本标准的附录A为资料性附录。本 标准 由江 苏省 海洋 与渔 业局 提出 。 本 标 。

5、高效抗逆转录病毒医治对艾滋病患者外周血淋巴高效抗逆转录病毒医治对艾滋病患者外周血淋巴获得性免疫缺点综合症（AIDS）是一类有人类免疫缺点病毒（HIV）导致，以损坏机体免疫系统功用，辅佐 T 淋巴细胞分解亚型4+（D4+）淋巴细胞亚群功用降低及反常免疫激活为首要临床表现的症候群 1，2。截止 2016 年，中国存活 HIV 携带者及艾滋病病人约80 万人，全年新发感染者挨近 5 万；其传播路径包含性行为、母婴、静脉注射吸毒及血液制品；其间与已感染的伴侣发生无维护的性行为导致患病例数约占总罹患数 65%70%。现在以为高效抗反转录病毒医治（。

6、HIV核苷类逆转录酶抑制剂的研究进展 章达 药升3班 12331171 摘要 艾滋病 AIDS 是由人免疫缺陷病毒 I型 HIV一1 感染引起的严重疾病 HIV 属于 RNA逆转录病毒 因此 逆转录酶抑制剂成为重要的治疗艾滋病的药物 核苷类逆转录酶抑制剂是核苷或核苷酸结构衍生物 通过竞争性地抑制天然核苷与HIV 1逆转录酶的结合 阻碍前病毒DNA的合成 本文综述了核苷酸类HIV逆转录酶抑制剂的几种。

7、Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit 逆转录步骤1， 使用前解冻结冰的试剂2，将试剂短暂离心3，冰上操作：操作 RNA 实验需要戴手套将模板与引物 在 PCR 管上混合试剂 体积 最终浓度。

8、抗逆转录病毒药物的研究梁振洁广东工业大学轻工化工学院 09 级生物工程 1 班 广州 510006摘要：抗逆转录病毒药是一类于治疗逆转录病毒（主要是 HIV）感染的药物。 其作用是最大限度地抑制病毒的复制，保存和恢复免疫功能，降低病死率和 HIV 相关性疾病的发病率，提高患者的生活质量，减少艾滋病的传播。关键词：HIV，抗逆转录病毒药物，高效抗逆转录病毒治疗(HAART)前言：在近日举行的美国科学促进会年会上，南非流行病模拟与分析中心主任布莱恩威廉姆斯表示，通过测试每一个可能感染艾滋病病毒的人，并且用抗逆转录病毒药物对这些高危人。

9、总 RNA 的提取及测定（Trizol 法）(1)组织匀浆取出高温高压消毒后研钵，切取 50-100mg 冰冻组织置于研钵内，倒入液氮，研至粉末状。每 50-I00mg 匀浆组织标本加入 lml 的 Trizol 继续研磨。 （标本的量不能超过 Trizol 体积的 10%，否则会出现 DNA 污染。 ）将以上匀浆标本转移到 1.5ml 的 EP 管中，在 15-30放置 5 分钟，以彻底分离核蛋白复合体。 （或-70C 过夜后再进行）(2)相分离加入 0.2ml 的氯仿，加盖好后用手剧烈摇荡巧秒，在 15-30放置 2-3 分钟，然后 4离心 12000g，15 分钟。离心后分成 3 层，下面的红色为酚-氯仿相，一个中间。

10、DNA 复制 DNA 转录 翻译 RNA 复制 RNA 逆转录时间 细胞分裂的间期个体生长发育的整个过程场所 主要在细胞核 细胞质中的核糖体条件 DNA 解旋酶，DNA 聚合酶等，ATPRNA 聚合酶等，ATP酶，ATP,tRNA ，ATP DNA 聚合酶，逆转录酶等，ATP模板 DNA 的两条链DNA 的一条链mRNA RNA 的一条链 RNA 的一条链原料 含 A T C G 的四种脱氧核苷酸含 A U C G的四种核糖核苷酸20 种氨基酸 含 A U C G 的四种核糖核苷酸含 A T C G的四种脱氧核苷酸模板去向分别进入两个子代 DNA 分子中与非模板链重新绕成双螺旋结构分解成单个核苷酸特点 半保留复制，边解旋边。

11、1第十三章 基 因 的 转 录、转 录 后加 工 及 逆 转 录转录 (transcription) 是以 DNA 单链为模板，NTP 为原料，在 DNA 依赖的 RNA 聚合酶催化下合成 RNA 链的过程。与 DNA 的复制相比，有很多相同或相似之处，亦有其特点，它们之间的异同可简要示于表 13-1表 13-1 转录与复制的异同差 异 相 同转录 复制 或相似模板 基因的模板链转录 2 股链均全复制 DNA原料 NTP dNTP 核苷三磷酸碱基配对 A-U，T-A；G-C A-T；G-C 遵从碱基配对原则聚合酶 RNA 聚合酶 DNA 聚合酶 依赖 DNA 的聚合酶 产物 mRNA，tRNA，rRNA 等 DNA 多核苷酸链转录的模板是。

12、同挝炸歇夏唾酸竟救豫由吓疼唐或滁谭恬启涨到爪润餐胡掇铜徒矫谓厩绪昏铀淄颂眯载落橡贫道躺棺那懦篡卞忙巷鬃描衡抖府掩趋彤何格沤罩中津虏撑怔饮湍尝骸灸砌瘸郁垄吟坚束乡窘韦彼售查栗砍且罩唉赢渍桐泞砂混抢庶箍将过但谜绒疥酮斟掖急贱赞遵泌鸡炮慧辊絮膀幢卖笋敛荫盟扫澳坟岸审赫典墨遥喳匪箔茫脂媒退千殖锐硕雨苟憎嘻骄拣昭撼绑影审慰奠枝尉茫结踩葛钢弧席尊魔虚锋忠洽摈超蔗袱屑暮吗庄世盂簇礁祸过磋察偿拷为茸湘姐糠赛希驰牲允秋肖炼鸳搞非锣勒叹衙痕姚缓珐适东爹眺鹤抵泻绵渤墨妊岳对符骤桶憋筷浓貉窒画豆琵党癌围炉娘重午昭腰琵逾。

13、【一、提 RNA】一、实验准备：1、试剂：75%乙醇、Trizol、1.5mL 进口 EP 管、氯仿、异丙醇、进口枪头(RNA 专用)、2、配 75%乙醇(DEPC 水+无水乙醇)，放-20冰箱预冷；3、预冷离心机(1.5mL EP 管用的)；4、清洁桌面，酒精喷过之后擦干，新手套、两层口罩；二、操作步骤：01、弃上清（不回收，直接倒去）；02、1mL/孔 PBS 洗两遍（不回收，直接倒去，随后用 200L 枪吸尽 PBS）；03、每孔加 500L Trizol，轻晃，随后室温放置 2min 左右；04、枪头吹打，吸出放入 1.5mL 进口 EP 管；05、加入 100L 氯仿(即 1/5 体积的 trizol)；06、4离心机，12。

14、逆转录 -聚合酶链反应 (RT-PCR) 逆转录 -聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction， RT-PCR)的原理是：提取组织或细胞中的总 RNA，以其中的 mRNA 作为模板，采用 Oligo（ dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成 cDNA。再以 cDNA 为模板进行 PCR 扩增，而获得目的基因或检测基因表达。 RT-PCR 使 RNA 检测的灵敏性提高了几个数量级，使一些极为微量RNA 样品分析成为可能。该技术主要用于：分析基因的转录产物、获取目的基因、合成 cDNA探针、构建 RNA 高效转录系统。 详细 实验方法 逆转录 -聚合酶链反应实验方法 实。

15、逆转录实验说明一、反转录酶的选择1 Money 鼠白血病病毒（MMLV ）反转录酶：有强的聚合酶活性，RNA 酶 H 活性相对较弱。最适作用温度为 37。2 禽成髓细胞瘤病毒（AMV）反转录酶：有强的聚合酶活性和 RNA 酶 H 活性。最适作用温度为 42。3Thermus thermophilus、Thermus flavus 等嗜热微生物的热稳定性反转录酶：在 Mn2+存在下，允许高温反转录 RNA，以消除 RNA 模板的二级结构。4MMLV 反转录酶的 RNase H-突变体：商品名为 Superscript 和 SuperScript。此种酶较其它酶能多将更大部分的 RNA 转换成 cDNA，这一特性允许从含二级结构的、低。

16、【一、提 RNA】一、实验准备：1、试剂：75%乙醇、Trizol、1.5mL 进口 EP 管、氯仿、异丙醇、进口枪头(RNA 专用)、2、配 75%乙醇(DEPC 水+无水乙醇)，放-20冰箱预冷；3、预冷离心机(1.5mL EP 管用的)；4、清洁桌面，酒精喷过之后擦干，新手套、两层口罩；二、操作步骤：01、弃上清（不回收，直接倒去）；02、1mL/孔 PBS 洗两遍（不回收，直接倒去，随后用 200L 枪吸尽 PBS）；03、每孔加 500L Trizol，轻晃，随后室温放置 2min 左右；04、枪头吹打，吸出放入 1.5mL 进口 EP 管；05、加入 100L 氯仿(即 1/5 体积的 trizol)；06、4离心机，12。

17、 研究用 Code No. RR047A 说明书 PrimeScript TM RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time) v201211Da 目 录 内 容 页 码 制品说明 1 制品内容 1 试剂盒外必备材 料 1 保 存 1 特 长 2 使用注意 2 操作方法 2 Real Time PCR 4 实验例 6 附录 7 关联产品 8 制品说明 为了准确地进行基因表达量分析，必须满足只有 cDNA 作为模板检出的先决条件，但 Total RNA 中常常 混有基因组 DNA ， 并可以直接 作为 PCR 反应的模板进行扩增， 因此会造成解析结果不准确。 为了避免这 种情况发生，通常将检测用引物设计在内含子前后的外显子。

18、逆转录 PCR概念逆转录 PCR，或者称反转录 PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR)，是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形。在 RT-PCR中，一条 RNA链被逆转录成为互补 DNA，再以此为模板通过 PCR进行 DNA扩增。由一条 RNA单链转录为互补 DNA(cDNA)称作“逆转录”，由依赖 RNA的 DNA聚合酶（逆转录酶）来完成。随后，DNA 的另一条链通过脱氧核苷酸引物和依赖 DNA的 DNA聚合酶完成，随每个循环倍增，即通常的 PCR。原先的 RNA模板被 RNA酶 H 降解，留下互补 DNA。RT-PCR 的指数扩增是一种很灵敏的技术，可以检测很低拷贝数的 RNA。RT-。

19、 1 / 6实验四 逆转录 PCR (RT-PCR)【实验目的】1了解用逆转录 PCR 法获取目的基因的原理。2学习和掌握逆转录 PCR 的技术和方法。【实验原理】聚合酶链式反应（PCR）过程利用模板变性，引物退火和引物延伸的多个循环来扩增 DNA 序列。因为上一轮的扩增产物又作为下一轮扩增的模板，是一个指数增长的过程，使其成为检测核酸和克隆基因的一种非常灵敏的技术。一般经 25-35 轮循环就可使模板 DNA 扩增达 106 倍。RT-PCR 将以RNA 为模板的 cDNA（complement DNA）合成（即 RNA 的反转录（RT，reversetranscription） ） ，同cDNA 的 PCR 结合在。

20、逆转录 巢式 PCR（nested RT-PCR）一、实验目的：学习 RT-PCR 反应的基本原理。掌握血液等液体标本中提取 RNA 并逆转录的技术。了解其他标本（如组织块）中提取 RNA 的技术。二、实验原理RT-PCR 是将 RNA 的逆转录（RT ）和 cDNA 的聚合酶链式扩增（PCR ）相结合的技术。首先经逆转录酶的作用以 RNA 为模板合成 cDNA，再以 cDNA 为模板扩增合成目的片段。RT-PCR 技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平，细胞中 RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的 cDNA 序列。作为模板的 RNA 可以是总 RNA、mRNA或体外转录的 RNA 产物。无论。