1、有机氯类农药残留量测定法标准操作规程编制/修订人： 日期： 年 月 日部 门 审 核 人 ： 日期： 年 月 日分 管 负 责 人 ： 日期： 年 月 日质 量 审 核 人 ： 日期： 年 月 日企 业 负 责 人 ： 日期： 年 月 日实 施 日 期： 年 月 日文件类别： 管理标准 受控状态 技术标准 工作标准本文件由质量部颁布，根据需要分发于以下部门：行政人事部 生产部 质量部 1 工程部 采购部 物资部 计财部 商务部 存 档 1 有机氯类农药残留量测定法标准操作规程文件编号：TH/GZ(FF)/ZL(ZK)/001版本号：B/1 第 1 页 共 7 页【目的】规范有机氯类农药残留量测
2、定法检验的程序和方法，确保有机氯类农药残留量测定法检验结果准确可靠。【适用范围】适用于本公司有机氯类农药残留量测定法的检验。【职责】1 QC 检验人员负责起草，按审批后的标准执行。2 质量部经理、质量负责人负责审核、监督执行。3 总经理负责审批。【内容】1 简述有机氯类农药是农药史中使用量最大，使用历史最长的一类农药，其化学性质稳定，脂溶性强，残效期长(可达 3050 年之久)，易在脂肪组织中蓄积，造成慢性中毒，严重危及人体健康。本法通过提取、净化和富集等步骤制备供试品溶液，采用气相色谱法，电子捕获检测器测定。2 仪器与用具 2.1 气相色谱仪，带有 63Ni-ECD 电子捕获检测器，载气为高
3、纯氮，必须安装脱氧管。2.2 超声波处理器。 2.3 离心机。 2.4 旋转蒸发仪。 2.5 色谱柱：SE-54 或 DB-1701 弹性石英毛细管柱(30m0.32mm0.25m) 2.6 具塞刻度离心管（10ml)，刻度浓缩瓶，具塞锥形瓶（100ml)，移液管等。 3 试药与试液 3.1 丙酮、石油醚(6090)和二氯甲烷均为分析纯，且全部经过全玻璃蒸馏装置重蒸馏，经气相色谱法确认，符合农残检测的要求。3.2 无水硫酸钠和氯化钠均为分析纯，硫酸为优级纯。 有机氯类农药残留量测定法标准操作规程文件编号：TH/GZ(FF)/ZL(ZK)/001版本号：B/1 第 2 页 共 7 页3.3 农药
4、对照品：六六六（BHC）包括 -BHC，-BHC，-BHC 和 -BHC 四种异构体， 滴滴涕（DDT) 包括 pp-DDE， pp-DDD，op-DDT 和 pp-DDT 四种异构体及五氯硝基苯(PCNB），由中国计量科学研究院提供标示含量(浓度)的农药标准品，也可采用国际认可的农药标准品自行配制。4 9 种有机氯类农药残留量测定法 4.1 色谱条件与系统适用性试验 以（14%-氰丙基-苯基）甲基聚硅氧烷或（5%苯基）甲基聚硅氧烷为固定液的弹性石英毛细管柱（30mX0.32mmX0.25um), 63 Ni-ECD 电子捕获检测器。进样口温度 230，检测器温度 300，不分流进样。程序升温
5、： 初始温度100，每分钟 10升至 220，再以每分钟 8升至 250，保持 10 分钟。 按上述条件操作，理论板数以 -BHC 峰计算应不低于 1 X 106，两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。4.2 操作方法 4.2.1 对照品贮备液的制备 精密称取六六六(BHC) （-BHC，-BHC，-BHC， -BHC）、 滴滴涕(DDT)P ，P-DDE， P，P-DDD ，O，P-DDT， P，P-DDT及五氯硝基苯(PCNB)农药对照品溶液适量，用石油醚(6090 )分别制成每 1ml 约含 45g 的溶液，即得。4.2.2 混合对照品储备液的制备 精密量取上述各对照品贮备液 0.5ml，
6、置 10mI 量瓶中，用石油醚 6090)稀释至刻度，摇匀，即得。4.2.3 混合对照品溶液的制备 精密量取上述混合对照品贮备液，用石油醚(6090) 制成每 1L 分别含 0ug，1g，5g， 10g，50g，100g 和 250g 的溶液，即得。4.2.4 供试品溶液制备 方法 1（药材或饮片） 取供试品，粉碎成粉末（过三号筛），取约 2 g，精密称定， 置 100 ml 具塞锥形瓶中，加水 20 ml 浸泡过夜，精密加丙酮 40ml，称定重量，超声处理 30 分钟，放冷，再称定重量，用丙酮补足减失的重量，再加氯化钠约 6 g，精密加二氯甲烷 30 ml，称定重量，超声处理 15 分钟，再
7、称定重量，用二氯甲烷补足减失的重量，静置（使分层），将有机相迅速移入装有适量无水硫酸钠的 100 ml 具塞锥形瓶中，放置 4 小时。精密量取 35ml，于 40水浴上减压浓缩至近干，有机氯类农药残留量测定法标准操作规程文件编号：TH/GZ(FF)/ZL(ZK)/001版本号：B/1 第 3 页 共 7 页加少量石油醚(6090)如前反复操作至二氯甲烷及丙酮除净，用石油醚(6090)溶解并转移至 10ml 具塞刻度离心管中，加石油醚(6090 )精密稀释至 5ml，小心加入硫酸 1 ml，振摇 1 分钟，离心(3000 转/分钟) 10 分钟，精密量取上清液 2ml，置具刻度浓缩瓶中，连接旋转
8、蒸发器，40下(或用氮气)将溶液浓缩至适量，精密稀释至 1 ml，即得。同法制备空白样品。4.2.5 方法 2(制剂) 取供试品，研成细粉(蜜丸切碎，液体直接量取)，精密称取适量 (相当于药材 2g)，以下按方法 1，制备供试品溶液。4.2.6 测定法 分别精密吸取供试品溶液和与之相对应浓度的混合对照品溶液各11，注入气象色谱仪，按外标法计算供试品中 9 种有机氯农药残留量。5 22 种有机氯类农药残留量测定法5.1 色谱条件与系统适用性试验 分析柱：以 50% 苯基 50%二甲基聚硅氧烷为固定液的弹性石英毛细管柱（30mX0.25mmX0.25um),试验柱：以 100%二甲基聚硅氧烷为固定
9、液的弹性石英毛细管柱（ 30mX0.25mmX0.25um)， 63 Ni-ECD 电子捕获检测器。 进样口温度 240，检测器温度 300，不分流进样，流速为恒压模式（初始流速为 1.3ml/min）。程序升温： 初始 70，保持 1 分钟，每分钟 10升至 180，保持 5 分钟，再以每分钟5升至 220，最后以每分钟 100升至 280，保持 8 分钟。理论板数以 -BHC 计算应不低于 1 X 106，两个相邻色谱峰的分离度应大于 1.5。5.2 操作方法 5.2.1 对照品储备液的制备 精密称取表 1 中农药对照品适量，用异辛烷分别制如表1 中浓度，即得。5.2.2 混合对照品储备液
10、的制备 精密量上述对照品贮备溶液各 1ml,置 100ml 量瓶中，用异辛烷稀释至刻度，摇匀，即得。5.2.3 混合对照品溶液的制备 分别精密量取上述对照品备贮溶液，用异辛烷制成每 1L 分别含 10g、20g、50g、100g、200g、500g 的溶液，即得（其中 -六六六，异狄氏剂、P，P- 滴滴滴、O，P-滴滴涕每 1L 分别含20g、40g、100g、200g、400g、1000g)。5.2.4 供试品溶液制备 取供试品，粉碎成粉末（过三号筛）,取约 1.5 g，精密有机氯类农药残留量测定法标准操作规程文件编号：TH/GZ(FF)/ZL(ZK)/001版本号：B/1 第 4 页 共
11、7 页称定，置于 50 ml 聚苯乙烯具塞离心管中，加水 10 ml，混匀，放置 2 小时，精密加入乙腈 15ml，剧烈振摇提取 1 分钟，再加人预先称好的无水硫酸镁 4g 与氣化钠 1 g 的混合粉末，再次剧烈振摇 1 分钟后，离心(4000 转/分钟）1 分钟。精密吸取上清液 10ml，40减压浓缩至近干，用环己烷 -乙酸乙酯（1:1)混合溶液分次转移至 10ml 量瓶中，加环己烷-乙酸乙酯（1 :1)混合溶液至刻度，摇匀，转移至预先加入 1g 无水硫酸钠的离心管中，振摇，放置 1 小时 ，离心（必要时滤过)，取上清液 5ml 过凝胶渗透色谱柱（ 400mmX 25m m ,内装 BIO-
12、Beads S-X3 填料；以环己烷 -乙酸乙酯（ 1 : 1 )混合溶液为流动相；流速为每分钟 5.0ml)净化，收集 18 30 分钟的洗脱液 ，于 40水浴减压浓缩至近干，加少量正己烷替换两次，加正己烷 1ml 使溶解，转移至弗罗里硅土固相萃取小柱 1000mg/6ml,用正己烷-丙酮（ 95 : 5)混合溶液 10ml 和正己烷 10ml 预洗上 ，残渣用正己烷洗涤 3 次,每次 1ml，洗液转移至同一弗罗里硅土固相萃取小柱上，再用正己烷-丙 酮( 95：5)混合溶液 10ml 洗脱，收集全部洗脱液,置氮吹仪上吹至近干，加异辛烷定容至 1ml，涡旋使溶解，即得。5.2.5 测定法 分别
13、精密吸取供试品溶液和混合对照品溶液各 1ul，注入气相色谱仪 ，按外标标准曲线法计算供试品中 22 种有机氣农药残留量 。5.2.6 限度 除另有规定外,每 1kg 中药材或饮片中含总六六六（a- BHC,-BHC ，-BHC , - BHC 之和）不得过 0.2mg；总滴滴涕 （P，P-DDE， P，P-DDD，O，P-DDT， P，P-DDT 之 和 ）不得过 0. 2mg；五氣硝基苯（Quintozene)不得过 0.1m g；六氯苯 （ Hexachlorobenzene)不得过 0,1mg;七氯（ Heptachlor)、顺式环氧七氯（ Heptach 丨 orexo-epoxide
14、)和反式环氧七氯( Heptachlor*endo-epoxide)之和不得过0.05mg;艾氏 剂（ AIdrin)和狄氏剂（ Dieldrin)之和不得过 0. 05mg;异狄氏剂( Endrin)不得过 0.05mg; 顺式氯丹 Chlordane)、反式氯丹（trans-Chlordane)和氧化氯丹（ oxy-Chlordane)之和不得过 0.05mg; a-硫丹( a-Endosulfan)-硫丹(-E ndosulfan)和硫丹硫酸盐 （ Endosulfan sulfate)之和不得过 3mg。【 附注】(1)当供试品中有农药检出时,可在验证柱中确认检出的结果，再进行定量。必
15、要时,可用气相色谱一质谱法进行确证。(2)加样回收率应在 70%120%之间 。 有机氯类农药残留量测定法标准操作规程文件编号：TH/GZ(FF)/ZL(ZK)/001版本号：B/1 第 5 页 共 7 页表 1 22 种有机氯类农药对照品贮备液浓度、相对保留时间及检出限参考值序号 中文名 英文名 对照品贮备液（ug/ml) 相对保留时间(分析柱） 检出限（mg/kg) 1 六氯苯 Hexachlorobenzene 100 0. 574 0. 0012 a-六六六 a- B H C 100 0. 601 0. 0043 五硝基苯 Quintozene 100 0. 645 0. 0074 -
16、六六六 y -B H C 100 0. 667 0. 0035 -六六六 -B H C 200 0. 705 0. 0086 七 氣 Heptachlor 100 0. 713 0. 0077 -六六六 - BHC 100 0. 750 0. 0038 艾 氏 剂 Aldrin 100 0. 760 0. 0069 氧化氯丹 Oxy-Chlordane 100 0.816 0. 00710 顺 式 环 氧 七 氣 Heptachlor-exo-epoxide 100 0. 833 0. 00611 反 式 环 氧 七 氣 Heptachlor-endo-epoxide 100 0. 844 0
17、. 00512 反式氯丹 trans-Chlordane 100 0. 854 0. 00513 顺式氯丹 cis-Chlordane 100 0. 867 0, 00814 a-琉丹 a-Endosulfan 100 0. 872 0.0115 p,p/滴 滴 伊 p,p /-DDE 100 0. 892 0. 00616 狄 氏 剂 Dieldrin 100 0. 901 0. 00517 异 狄 氏 剂 Endrin 200 0. 932 0. 00918 o,p/滴 滴 涕 o , p/ f-DDT 200 0. 938 0.01819 p,p/滴 滴 滴 p , p/ f-DDD 2
18、00 0. 944 0.00820 -硫丹 -Endosulfan 100 0. 956 0. 00321 p,/p -滴 滴 涕 p , p /-DDT 100 0. 970 0. 00522 硫丹硫酸 Endosulfan sulfate 100 1.000 0. 004有机氯类农药残留量测定法标准操作规程文件编号：TH/GZ(FF)/ZL(ZK)/001版本号：B/1 第 6 页 共 7 页注：各对照品的相对保留时间以硫丹硫酸盐为参照峰计算6 注意事项 6.1 本试验所用器皿应严格清洗(不能残存卤素离子)。 6.2 供试品溶液制备时，有机相减压浓缩务必至近干，避免待测成分损失。 6.3 为防止假阳性结果，可选择不同极性的色谱柱进行验证，有条件的可采用气质联用 予以确认。6.4 如样品中其它成分有干扰，可适当改变色谱条件，但需进行空白验证。 【相关文件】文件名称 文件编号中国药典2015 版四部 /
