07 水分测定法检验操作规程.doc

1、GMP 质量管理（9） 文件编号：ZL/SOP/TZ/00701第 1 页 共 6 页水分测定法检验操作规程文件名：水分测定法检验操作规程 文件编号：ZL/SOP/TZ/00701制定人： 日期： 年 月 日 文件类型：工作标准审核人： 日期： 年 月 日 版 次：第二版批准人： 日期： 年 月 日 印 数：共 2 份生效日期： 年 月 日 颁发部门：GMP 办公室分发至：质量保证部、化验室1、 目 的 ： 规 范 水 分 测 定 法 操 作 规 程 ， 保 证 检 验 的 质 量 。2、 适 用 范 围 ： 适 于 本 公 司 检 品 的 检 验 。3、 责 任 者 ： 质 量 保 证 部

2、经 理 、 化 验 室 主 任 主 任 、 化 验 员 。4、 检 验 依 据 ： 中 国 兽 药 典 2010 版 一 部 附 录 。5、 内 容 ：水 分 测 定 法5.1 测 定 用 的 供 试 品 ， 一 般 先 破 碎 成 直 径 不 超 过 3mm 的 颗 粒 或 碎 片 。 直 径 和 长度 在 3mm 以 下 的 花 类 、 种 子 和 果 实 类 药 材 ， 可 不 破 碎 。 减 压 干 燥 法 需 先 通 过 二 号筛 。 第 一 法 （ 烘 干 法 ）（ 1） 适 用 范 围 ： 本 法 适 用 于 不 含 或 少 含 挥 发 性 成 分 的 药 品 。（ 2） 操 作

3、 步 骤 ： 取 供 试 品 2 5g 平 铺 于 干 燥 至 恒 重 的 扁 形 称 瓶 中 ， 厚 度 不超 过 5mm， 疏 松 供 试 品 不 超 过 10mm， 精 密 称 定 ， 打 开 瓶 盖 在 100 105 干 燥5 小 时 ， 将 瓶 盖 盖 好 ， 移 置 于 干 燥 器 中 ， 冷 却 30 分 钟 ， 精 密 称 定 ， 再 在 上 述 温度 干 燥 1 小 时 ， 冷 却 ， 称 重 ， 至 连 续 两 次 称 重 的 差 异 不 超 过 5mg 为 止 。（ 3） 计 算 方 法 ： 根 据 减 失 的 重 量 ， 计 算 供 试 品 中 含 水 量 。GMP

4、质量管理（9） 文件编号：ZL/SOP/TZ/00701第 2 页 共 6 页第 二 法 （ 甲 苯 法 ） 本 法 适 用 于 含 挥 发 成 分 的 药 品 。（ 1） 仪 器 装 置 ： A 为 短 颈 圆 底 烧 瓶 （ 500ml） B 为 水 分 测 定 管 ， C 为 直 形冷 凝 管 （ 外 管 长 40cm） 。 使 用 前 ， 全 部 仪 器 应 清 洁 ， 并 置 烘 箱 中 烘 干 。（ 2） 操 作 步 骤 ： 取 供 试 品 适 量 （ 约 相 当 于 含 水 量 1 4ml） ， 精 密 称 定 ， 置A 瓶 中 ， 加 甲 苯 约 200ml， 必 要 时 加

5、入 玻 璃 珠 数 粒 ， 将 仪 器 各 部 分 连 接 ， 自 冷 凝管 顶 端 加 入 甲 苯 ， 至 充 满 B 管 的 狭 细 部 分 。 将 A 瓶 置 电 热 套 中 或 用 其 他 适 宜 方法 缓 缓 加 热 ， 待 甲 苯 开 始 沸 腾 时 ， 调 节 温 度 ， 使 每 秒 钟 馏 出 2 滴 。 待 水 分 完 全馏 出 ， 即 测 定 管 刻 度 部 分 的 水 量 不 再 增 加 时 ， 将 冷 凝 管 内 部 先 用 甲 苯 冲 洗 ， 再 用饱 蘸 甲 苯 的 长 刷 或 其 他 适 宜 的 方 法 ， 将 管 壁 上 附 着 的 甲 苯 推 下 ， 继 续

6、蒸 馏 5 分钟 ， 放 冷 至 室 温 ， 拆 卸 装 置 ， 如 有 水 粘 附 在 B 管 的 管 壁 上 ， 可 用 蘸 甲 苯 的 铜 丝推 下 ， 放 置 ， 使 水 分 与 甲 苯 完 全 分 离 （ 可 加 亚 甲 蓝 粉 末 少 量 ， 使 水 染 成 蓝 色 ， 以便 分 离 观 察 ） 。 检 读 水 量 ， 并 计 算 供 试 品 中 的 含 水 量 （ %） 。（ 3） 附 注 ： 用 化 学 纯 甲 苯 直 接 测 定 ， 必 要 时 甲 苯 可 先 加 水 少 量 ， 充 分 振 摇 后放 置 ， 将 水 层 分 离 弃 去 ， 经 蒸 馏 后 使 用 。第 三

7、法 （ 减 压 干 燥 法 ）（ 1） 适 用 范 围 ： 本 法 适 用 于 含 有 挥 发 性 成 分 的 贵 重 药 品 。（ 2） 减 压 干 燥 器 ： 取 直 径 12cm 左 右 的 培 养 皿 ， 加 入 新 鲜 五 氧 化 二 磷 干 燥 剂适 量 ， 使 铺 成 0.5 1cm 的 厚 度 ， 放 入 直 径 30cm 的 减 压 干 燥 器 中 。（ 3） 操 作 步 骤 ： 取 供 试 品 2 4g， 混 合 均 匀 ， 分 取 约 0.5 1g， 置 与 供 试品 同 样 条 件 下 干 燥 并 称 重 的 称 瓶 中 ， 精 密 称 定 ， 打 开 瓶 盖 ， 放

8、入 上 述 减 压 干 燥 器中 ， 减 压 至 2.67Kpa（ 20mmHg） 以 下 持 续 半 小 时 ， 室 温 放 置 24 小 时 。 在 减 压干 燥 器 出 口 连 接 新 鲜 无 水 氯 化 钙 干 燥 管 ， 打 开 活 塞 ， 待 内 外 压 一 致 ， 关 闭 活 塞 ，打 开 干 燥 器 ， 盖 上 瓶 盖 ， 取 出 称 瓶 迅 速 精 密 称 定 重 量 ， 计 算 供 试 品 中 的 含 水 量 （ %） 。第 四 法 （ 气 相 色 谱 法 ）色 谱 条 件 与 系 统 适 用 性 试 验 用 直 径 为 0.25 0.18mm 的 二 乙 烯 苯 -乙 基

9、 乙烯 苯 型 高 分 子 多 空 小 球 作 为 载 体 ， 柱 温 为 140 150 ， 热 导 检 测 器 检 测 。 注 入无 水 乙 醇 ， 照 气 象 色 谱 法 （ 附 录 37 页 ） 测 定 ， 应 符 合 下 列 要 求 ：（ 1） 理 论 板 数 按 水 峰 计 算 应 大 于 1000； 理 论 板 数 按 乙 醇 峰 计 算 应 大 于GMP 质量管理（9） 文件编号：ZL/SOP/TZ/00701第 3 页 共 6 页150。（ 2） 水 和 乙 醇 两 峰 的 分 离 度 应 大 于 2。（ 3） 将 无 水 乙 醇 进 样 5 次 ， 水 峰 面 积 的 相

10、对 标 准 偏 差 不 得 大 于 3.0%。对 照 溶 液 的 制 备 取 纯 化 水 约 0.2g， 精 密 称 定 ， 置 25ml 量 瓶 中 ， 加 无 水 乙醇 至 刻 度 ， 摇 匀 ， 即 得 ，供 试 品 溶 液 的 制 备 取 供 试 品 适 量 （ 含 水 量 约 0.2g） ， 剪 碎 或 研 细 ， 精 密 称定 ， 置 具 塞 锥 形 瓶 中 ， 精 密 加 入 无 水 乙 醇 50ml， 密 塞 ， 混 匀 ， 超 声 处 理 20 分钟 ， 放 置 12 小 时 ， 再 超 声 处 理 20 分 钟 ， 密 塞 放 置 ， 待 澄 清 后 倾 取 上 清 液 ，

11、即 得 。测 定 法 取 无 水 乙 醇 、 对 照 溶 液 及 供 试 品 溶 液 各 1 5l， 注 入 气 相 色 谱 仪 ，测 定 ， 即 得 。附 注（ 1） 对 照 溶 液 与 供 试 品 溶 液 的 配 制 需 用 新 开 启 的 同 一 瓶 无 水 乙 醇 。（ 2） 用 外 标 法 计 算 供 试 中 的 含 水 量 。 计 算 时 应 扣 除 无 水 乙 醇 的 含 水 量 ， 方法 如 下 ：对 照 溶 液 中 实 际 加 入 的 水 的 峰 面 积 =对 照 溶 液 中 总 水 峰 面 积 -K对 照 溶 液中 乙 醇 峰 面 积供 试 品 中 水 的 峰 面 积 =供

12、 试 品 溶 液 中 总 水 峰 面 积 -供 试 品 溶 液 中 乙 醇 峰 面 积无 水 乙 醇 中 水 峰 面 积K= 无 水 乙 醇 中 乙 醇 峰 面 积5.2 依 据 兽 药 典 一 部 水 分 测 定 法第 一 法 （ 费 休 氏 法 ）A 容 量 滴 定 法试 剂 ： I2 SO2 吡 啶 无 水 甲 醇仪 器 与 用 具 ： 附 滴 定 装 置 的 棕 色 瓶 微 量 水 分 测 定 仪操 作 步 骤 ： 本 法 是 根 据 碘 和 二 氧 化 硫 在 吡 啶 和 甲 醇 溶 液 中 能 与 水 起 定 量 反 应的 原 理 以 测 定 水 分 。 所 用 仪 器 应 干 燥

13、 ， 并 能 避 免 空 气 中 水 分 的 侵 入 ； 测 定 操 作 宜在 干 燥 处 进 行 。 本 法 即 为 费 休 氏 法 中 的 容 量 滴 定 法 。费 休 氏 试 液 的 制 备 与 标 定 ：GMP 质量管理（9） 文件编号：ZL/SOP/TZ/00701第 4 页 共 6 页(1)配 制 ： 称 取 碘 （ 置 硫 酸 干 燥 器 内 48 小 时 以 上 ） 110g， 置 干 燥 的 具 塞 烧 瓶中 ， 加 无 水 吡 啶 160ml， 注 意 冷 却 振 摇 至 碘 全 部 溶 解 后 ， 加 无 水 甲 醇 300ml，称 定 重 量 ， 将 烧 瓶 置 冰 浴

14、 中 冷 却 ， 通 入 干 燥 的 二 氧 化 硫 至 重 量 增 加 72g， 再 加无 水 甲 醇 稀 释 成 1000ml， 密 塞 ， 摇 匀 ， 在 暗 处 放 置 24 小 时 。本 液 应 遮 光 ， 密 封 ， 置 阴 凉 干 燥 处 保 存 。 临 用 前 再 标 定 浓 度 。(2)标 定 ： 用 水 分 测 定 仪 直 接 标 定 。 或 取 干 燥 的 具 塞 玻 瓶 ， 精 密 称 入 重 蒸 馏 水约 30mg,除 另 有 规 定 外 加 无 水 甲 醇 2 5ml， 用 本 液 滴 定 至 溶 液 由 浅 黄 色 变 为 红棕 色 ， 或 用 永 停 滴 定 法

15、 指 示 终 点 ； 加 作 空 白 试 验 ， 按 下 式 计 算 。WF=A-B式 中 ： F 为 每 1ml 费 休 氏 试 液 相 当 于 水 的 重 量 ， mg；W 为 称 取 重 蒸 镏 水 的 重 量 ， mg；A 为 滴 定 所 消 耗 费 休 氏 试 液 的 容 积 ， ml；B 为 空 白 所 消 耗 费 休 氏 试 液 的 容 积 ， ml。测 定 法 ： 精 密 称 取 供 试 品 适 量 （ 约 消 耗 费 休 氏 试 液 1 5ml） ， 除 另 有 规 定外 ， 溶 剂 为 甲 醇 ， 用 水 分 测 定 仪 直 接 测 定 。 或 将 供 试 品 置 干 燥

16、的 具 塞 玻 瓶 中 ， 加溶 剂 2 5ml， 在 不 断 振 摇 （ 或 搅 拌 ） 下 用 费 休 氏 试 液 滴 定 至 溶 液 由 浅 黄 色 变 为 红棕 色 ， 或 用 永 停 滴 定 法 指 示 终 点 ； 另 作 空 白 试 验 ， 按 下 式 计 算 。供 试 品 中 水 分 含 量 （ %） = 100%WFBA)(式 中 ： A 为 供 试 品 所 消 耗 费 休 氏 试 液 的 容 积 ， ml；B 为 空 白 所 消 耗 费 休 氏 试 液 的 容 积 ， ml；F 为 每 1ml 费 休 氏 试 液 相 当 于 水 的 重 量 ， mg；W 为 供 试 品 的

17、重 量 ， mg。注 意 事 项(1)配 制 时 所 用 试 剂 的 纯 度 ， 特 别 是 含 水 量 应 严 格 控 制 在 0.1%以 下 ， 如 试 剂水 分 超 过 规 定 ， 可 事 先 用 干 燥 的 分 子 筛 将 其 水 分 除 掉 后 再 用 。 本 试 液 接 触 的 一 切仪 器 均 应 清 洁 干 燥 ， 标 定 或 测 定 时 宜 在 干 燥 环 境 中 进 行 。(2)配 制 本 试 液 时 必 须 配 戴 眼 镜 等 保 护 用 具 。GMP 质量管理（9） 文件编号：ZL/SOP/TZ/00701第 5 页 共 6 页(3)本 试 液 不 稳 定 ， 随 放

18、置 时 间 增 加 浓 度 逐 渐 降 低 ， 因 为 碘 、 二 氧 化 硫 、 吡 啶 、甲 醇 四 种 组 分 在 一 起 容 易 发 生 副 反 应 。 当 F 值 低 至 3.0mg/ml 以 下 时 ， 滴 定 终 点不 敏 锐 ， 不 宜 再 用 。 F 值 应 在 4.0mg/ml 以 上 。(4)某 些 固 体 供 试 品 需 先 溶 于 无 水 甲 醇 （ 或 规 定 溶 剂 ） 2 5ml 中 ， 再 依 法 测定 。 另 作 空 白 试 验 校 正 。B.库 仑 滴 定 法本 法 仍 以 卡 尔 -费 休 氏 （ Karl Fischer） 反 应 为 基 础 ， 应

19、用 永 停 滴 定 法 （ 附 录52 页 ） 测 定 水 分 。 与 容 量 滴 定 法 相 比 ， 库 仑 滴 定 法 中 滴 定 剂 碘 不 是 从 滴 定 管 中 加入 ， 而 是 由 含 有 碘 离 子 的 阳 极 电 解 液 电 解 产 生 。 根 据 法 拉 第 定 律 ， 产 生 的 碘 的 量与 通 过 的 电 量 成 正 比 ， 因 此 可 以 用 测 量 滴 定 过 程 中 流 过 的 电 量 的 方 法 测 定 水 分 总量 。 本 法 主 要 用 于 测 定 含 水 微 量 成 分 （ 0.0001% 0.1%） 的 物 质 ， 特 别 适 用 于 测定 化 学 惰

20、性 物 质 如 烃 类 、 醇 类 和 酯 类 中 的 水 分 ， 所 用 仪 器 应 干 燥 ， 并 能 避 免 空 气中 水 分 侵 入 ； 测 定 操 作 宜 在 干 燥 处 进 行 。费 休 氏 试 液 按 卡 尔 -费 休 氏 库 仑 滴 定 仪 的 要 求 配 制 或 购 置 滴 定 液 。 本 法 无须 标 定 滴 定 液 。测 定 法 先 将 系 统 中 的 水 分 预 滴 定 除 去 ， 而 后 精 密 量 取 供 试 品 适 量 （ 含 水 量0.5 5mg） ， 迅 速 转 移 至 阳 极 电 解 液 中 ， 用 卡 尔 -费 休 氏 库 仑 滴 定 仪 直 接 测 定

21、，以 永 停 滴 定 法 （ 附 录 52 页 ） 指 示 终 点 ， 从 仪 器 显 示 屏 上 直 接 读 取 供 试 品 中 水 分的 含 量 ， 其 中 每 1mg 水 相 当 于 10.72C 的 电 量 。第 二 法 （ 甲 苯 法 ）（ 1） 仪 器 装 置 ： 如 兽 药 典 附 录 59 图 。 A 为 500ml 的 短 颈 圆 底 烧 瓶 ； B 为水 分 测 定 管 ； C 为 直 形 冷 凝 管 ， 外 管 长 40cm。 使 用 前 ， 全 部 仪 器 应 清 洁 ， 并 置烘 箱 中 烘 干 。（ 2） 测 定 法 ： 取 供 试 品 适 量 （ 约 相 当 于

22、含 水 量 1 4ml） ， 精 密 称 定 ， 置A 瓶 中 ， 加 甲 苯 约 200ml， 必 要 时 加 入 玻 璃 珠 数 粒 ， 将 仪 器 各 部 分 连 接 ， 自 冷 凝管 顶 端 加 入 甲 苯 至 充 满 B 管 的 狭 细 部 分 。 将 A 瓶 置 电 热 套 中 或 用 其 他 适 宜 方 法缓 缓 加 热 ， 待 甲 苯 开 始 沸 腾 时 ， 调 节 温 度 ， 使 每 秒 钟 馏 出 2 滴 。 待 水 分 完 全 馏出 ， 即 测 定 管 刻 度 部 分 的 水 量 不 再 增 加 时 ， 将 冷 凝 管 内 部 先 用 甲 苯 冲 洗 ， 再 用 饱蘸 甲

23、 苯 的 长 刷 或 其 他 适 宜 方 法 ， 将 管 壁 上 附 着 的 甲 苯 推 下 ， 继 续 蒸 馏 5 分 钟 ，GMP 质量管理（9） 文件编号：ZL/SOP/TZ/00701第 6 页 共 6 页放 冷 至 室 温 ， 拆 卸 装 置 ， 如 有 水 粘 附 在 B 管 上 ， 可 用 蘸 甲 苯 的 铜 丝 推 下 ， 放 置使 水 分 与 甲 苯 完 全 分 离 （ 可 加 亚 甲 蓝 粉 末 少 量 ， 使 水 染 成 蓝 色 ， 以 便 分 离 观 察 ） 。检 读 水 量 ， 并 计 算 成 供 试 品 的 含 水 量 （ %） 。（ 3） 附 注 ： 甲 苯 须 先 加 水 少 量 充 分 振 摇 后 放 置 ， 将 水 层 分 离 弃 去 ， 经 蒸 馏 后使 用 。