1、Your Reliable Source of Human and Animal Primary Cells Your Reliable Source of Human and Animal Primary Cells Your Reliable Source of Human and Animal Primary Cells 齐氏生物科技有限公司 2015年第三次经销商培训会 技术部 张亚洲 原代细胞培养相关产品 市场拓展培训 Your Reliable Source of Human and Animal Primary Cells 目录 原代 细胞 培养 基本概念 原代 细胞 培养 基本
2、要求 原代 细胞 培养 基本技术 Your Reliable Source of Human and Animal Primary Cells 原代细胞培养 指的是将细胞从动物体中直接取出，模拟体内生理环境，在适当温度、氧气浓度和一定营养条件下，使之生存和生长并维持其结构和功能的方法。 Your Reliable Source of Human and Animal Primary Cells 优点 组织细胞 刚脱离生物体 ，生物性状尚未发生较大变化，在一定程度上能够反映体内的状态。 Your Reliable Source of Human and Animal Primary Cells
3、传代培养 原代培养的细胞在生长 、增殖 一定时间后，由于空间不足或细胞密度过大导致营养枯竭，会影响细胞的生长，因此需要 进行 分瓶 培养， 即称为 传代培养。 Your Reliable Source of Human and Animal Primary Cells 培养细胞的生长方式及类型 贴附生长型细胞 必须贴附于底物才能生长的细胞。从形态上大体分为（ 1）成纤维细胞型细胞（ 2）上皮细胞型细胞（ 3）多形型细胞 悬浮 生长型细胞 不需要附着于底物而于悬浮状态下即可生长。 Your Reliable Source of Human and Animal Primary Cells （ 1
4、）成纤维细胞型细胞 梭形或不规则三角形，细胞 中央有 卵圆形核， 2-3个突起，生长时呈放射状、漩涡状走向。 Your Reliable Source of Human and Animal Primary Cells （ 2）上皮型细胞 扁平、多角形，圆形核，连成单层细胞时呈鹅卵石状。 Your Reliable Source of Human and Animal Primary Cells （ 3）多形型细胞 形态上不规则型的细胞，一般分胞体和胞突两部分 ,如神经组织源细胞。 Your Reliable Source of Human and Animal Primary Cells （
5、 4）悬浮生长型细胞 胞体始终呈球形，培养效率高、易大规模生产。 Your Reliable Source of Human and Animal Primary Cells 贴附生长型细胞的生长过程 游离期 贴壁期 潜伏期 对数生长期 停止期（平台期） Your Reliable Source of Human and Animal Primary Cells Your Reliable Source of Human and Animal Primary Cells Your Reliable Source of Human and Animal Primary Cells 原代细胞培养基
6、本要求 常用仪器设备 培养器皿 培养基 血清 其他细胞培养试剂 Your Reliable Source of Human and Animal Primary Cells Your Reliable Source of Human and Animal Primary Cells Your Reliable Source of Human and Animal Primary Cells Your Reliable Source of Human and Animal Primary Cells Your Reliable Source of Human and Animal Primary
7、 Cells Your Reliable Source of Human and Animal Primary Cells Your Reliable Source of Human and Animal Primary Cells Your Reliable Source of Human and Animal Primary Cells Your Reliable Source of Human and Animal Primary Cells 培养基 干粉培养基和液体培养基 常用 的 培养基类 型 RPMI-1640、 H-DMEM、L-DMEM、 DMEM/F12、M199、 -MEM
8、等。 Your Reliable Source of Human and Animal Primary Cells 血清 多种蛋白质 （ 白蛋白 、 球蛋白 、 铁蛋白等 ） ； 多种金属离子； 激素； 促贴附物质 ， 如纤粘蛋白 、 冷析球蛋白 、 胶原等； 各种生长因子； 转移蛋白； 不明成分； Your Reliable Source of Human and Animal Primary Cells 血清使用注意事项 血清必须贮存于 20 -70 ，若存放于 4 ，请勿超过一个月。 逐步解冻法 : -20 或 70 至 4 冰箱溶解一天，至室温下全溶后再分装。 勿将血清置于 37 太久
9、，若在 37 放置太久，血清会变得混浊，同时血清中许多较不稳定之成份亦会因此受到破坏，而影响血清之品质 。 热灭活（ heat-inactivation）是指 56, 30 min 加热已完全解冻之血清。此热处理之目的是使血清中之补体成份去活化。除非必须，一般不建议作此热处理，因为会造成沉淀物之显著增多，且会影响血清之品质。 Your Reliable Source of Human and Animal Primary Cells 谷氨酰胺 谷氨酰胺在细胞代谢过程中起重要作用，合成培养基中都要添加。由于谷氨酰胺在溶液中很容易降解， 4 下放置 2周即可分解约 50%，所以都是在使用前添加。
10、使用终浓度为 1-4mM，一般配制为 100倍浓缩液，过滤除菌，分装后 -20 保存 。 Your Reliable Source of Human and Animal Primary Cells 细胞原代培养 细胞换液与传代 细胞冻存与复苏 原代细胞培养基本技术 Your Reliable Source of Human and Animal Primary Cells Your Reliable Source of Human and Animal Primary Cells 原代细胞培养流程图 Your Reliable Source of Human and Animal Primary Cells 原代细胞纯化方式 -差速贴壁法 小鼠心肌成纤维细胞、小鼠心肌细胞
