1、1实验一 样品的无机化处理湿消化法一、实验目的1、掌握湿消化法敞口消化的操作要领。2、了解湿消化法的优缺点。二、实验内容1、试样的制备。2、样品的消化。三、实验方法1 原理试样加入强氧化性的酸(如浓硫酸、浓硝酸、高氯酸等 )，结合加热来破坏有机质，使包含在有机物中的待测成分释放出来，并形成各种步挥发的无机化合物供测定。2 仪器与试剂2.1 天平，消煮炉等。2.2 浓硝酸、浓硫酸。3 分析步骤称取 5.00g 样品，置于消化管中，先加水少许使湿润，加数粒玻璃珠、30mL 硝酸，混匀，放置片刻，小火缓缓加热，待作用缓和，放冷。沿瓶壁加入 5mL 硫酸，再加热，至瓶中液体开始变成棕色时，不断沿瓶壁滴
2、加硝酸至有机质分解完全。加大火力，至产生白烟，待管口白烟冒净后，管内液体再产生白烟为消化完全，该溶液应澄明无色或微带黄色，放冷。加 20mL 水煮沸，除去残余的硝酸至产生白烟为止，如此处理两次，放冷。将冷后的溶液移入 50mL 容量瓶中，用水洗涤消化管，洗液并入容量瓶中，放冷，加水至刻度，混匀。定容后的溶液每 10mL 相当于 1g 样品，相当加入硫酸量 1mL。取与消化样品相同量的硝酸和硫酸，按同一方法做试剂空白试验。四、注意事项1、加酸进行消化时，应控制好火候。2、为了减少消化时产生大量泡沫，可在消化前于室温下浸泡过夜。3、在消化过程中加酸，必须取下烧瓶冷却后缓缓加入。实验二 动物性食品中
3、总砷的测定银盐法一、实验目的掌握银盐分光光度法（DDC-Ag）的原理，了解本法的操作程序与实验要点。二、实验内容样品消化（硝酸硫酸法） 、测定、标准曲线的绘制及结果计算。三、实验方法1 原理 样品经消化后，以碘化钾、氯化亚锡将高价砷还原为三价砷，然后与锌粒和酸产生的2新生态氢生成砷化氢，经银盐溶液吸收后，形成红色胶态物，与标准系列比较定量。2 试剂除特别注明外，所用试剂为分析纯，水为去离子水。2.1 浓硝酸、浓硫酸、浓盐酸。2.2 无砷锌粒。 2.3 碘化钾溶液(150g/L) ：贮存于棕色瓶中。2.4 酸性氯化亚锡溶液：称取 40g 氯化亚锡(SnCL 22H2O)，加盐酸溶解并稀释至 10
4、0mL，加入数颗金属锡粒。2.5 乙酸铅溶液(100g/L) 。2.6 乙酸铅棉花：用乙酸铅溶液(100g/L)浸透脱脂棉后，压除多余溶液，并使疏松，在100以下干燥后，贮存于玻璃瓶中。2.7 氢氧化钠溶液(200g/L) 。2.8 硫酸(6+94)：量取 6.0mL 硫酸，加于 80mL 水中，冷后再加水稀释至 100mL。2.9 二乙基二硫代氨基甲酸银三乙醇胺三氯甲烷溶液：称取 0.25g 二乙基二硫代氨基甲酸银(C 2H5)2NCS2Ag ，置于乳钵中，加少量三氯甲烷研磨，移入 100mL 量筒中，加入1.8mL 三乙醇胺，再用三氯甲烷分次洗涤乳钵，洗液一并移入量筒中，再用三氯甲烷稀释至
5、 100mL，放置过夜。滤入棕色瓶中贮存。2.10 砷标准溶液：准确称取 0.1320g 在硫酸干燥器中干燥过的或在 100干燥 2h 的三氧化二砷，加 5mL 氢氧化钠溶液(200g/L)，溶解后加 25mL 硫酸(6+94)，移入 1000mL 容量瓶中，加新煮沸冷却的水稀释至刻度，贮存于棕色玻塞瓶中。此溶液每毫升相当于 0.10mg 砷。2.11 砷标准使用液：吸取 1.0mL 砷标准溶液，置于 100mL 容量瓶中，加 1mL 硫酸(6+94) ，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于 1.0g 砷。3 仪器3.1 752 型分光光度计。3.2 测砷装置（砷化氢发生器） 。注意：所用玻璃仪
6、器均需以硝酸(1+5) 浸泡过夜，用水反复冲洗，最后用去离子水冲冼干净。4 测定方法4.1 样品消化（硝酸硫酸法） 见实验一的 3 部分。4.2 测定4.2.1 吸取一定量的消化后的定容溶液( 相当于 5g 样品)及同量的试剂空白液，分别置于150mL 锥形瓶中，补加硫酸至总量为 5mL，加水至 50mL。各加 3mL 碘化钾溶液(150g/L)，0.5mL 酸性氯化亚锡溶液，混匀，静置 15min。各加入 3g 锌粒，立即分别塞上装有乙酸铅棉花的导气管，并使管尖端插入盛有 4mL 银盐溶液的离心管中的液面下，在常温下反应45min 后，取下离心管，加三氯甲烷补足 4mL。用 1cm 比色杯，
7、以零管调节零点，于波长520nm 处测吸光度，绘制标准曲线。4.2.2 标准曲线的绘制吸取 0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0mL 砷标准使用液(相当0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0g)，分别置于 150mL 锥形瓶中，加水至 40mL，再加 10mL 硫酸(11)。5 计算3102VmX式中：X 样品中砷的含量， mg/kg 或 mg/L；m1样液吸光度查标准曲线对应 As 的含量，g；m 样品质量，g；V1样品消化液定容体积， mL；V2检测用样液体积。四、试剂作用1、硝酸、硫酸为试样消化液，试样中的砷消化后全部变为五价砷。2、碘化钾、氯化亚锡溶液为还原剂，在酸性环境
8、中将五价砷还原为三价砷。 3、锌粒在酸的作用下生成氢气，继而试样中的三价砷与氢反应生成砷化氢气体，通过乙酸铅棉花滤去干扰气体硫化氢后导入吸收液中。4、二乙基二硫代氨基甲酸银为砷化氢吸收液。将银离子还原为元素银，元素银在氯仿中呈5、三乙醇胺为强碱性高价离子的掩蔽剂，并具有对 DDC-Ag 吸收液促使胶状银的生成，具有显色稳定作用，达到提高检测的灵敏度。五、实验要点1、无砷锌粒规格应严格控制。锌粒大要适当多加和延长时间；绝不能用锌粉代替锌粒，因锌粉反应猛烈，致使砷化氢吸收不全。2、乙酸铅棉花应干燥，棉花装填不宜太松或太紧。3、配制 DDC-Ag 吸收液如有不溶物，应过滤。本试剂显色后可稳定 2 小
9、时。但整个操作过程应避光。4、氯化亚锡溶液应保持一定酸度，试剂无酸雾时，应重新配制。否则还原作用减弱。5、消化试样时要防止因高氯酸干涸而发生爆炸等事故的发生。实验三 鲜乳中抗生素残留的检验一、实验目的掌握鲜乳中抗生素残留检验程序、原理和判定方法。二、实验内容指示菌的活化、菌液制备、样品检测与结果判定。三、实验方法1 原理将嗜热乳酸链球菌接种在乳汁中培养，所产生的代谢产物可使 TTC 还原变成红色。如果样品乳中残留的抗生素的量足以抑制嗜热乳酸链球菌的生长，则乳样颜色不变。如果样品乳中无抗生素残留，或残留量不足以抑制嗜热乳酸链球菌的生长繁殖，则乳样变为红色或微红色。2 仪器与试剂2.1 水浴锅、恒
10、温箱、100温度计、试管架。42.2 灭菌吸管：1mL、10mL。2.3 灭菌试管：15mm150mm。2.4 菌种：嗜热乳酸链球菌。2.5 脱脂乳：经 113灭菌 20min。2.6 4% 2，3， 5氯化三苯四氮唑(TTC)水溶液：称取 1gTTC，溶于 5mL 灭菌蒸馏水中，装褐色瓶内于 7冰箱保存，临用时用灭菌蒸馏水稀释至 5 倍。如遇溶液变为玉色或淡褐色，则不能再用。3 检验程序鲜乳中抗生素残留检验程序如下：4 操作步骤4.1 菌液制备：将菌种移种脱脂乳，经 361培养 15h 后，以灭菌脱脂乳 1:1 稀释待用。4.2 检测：取检样 9mL，置 15mm150mm 试管内，80水浴
11、加热 5min 冷却 37以下，加菌液 1mL，361水浴培养 2h，加 TTC 0.3mL，361 水浴培养 30min，观察如为阳性，再于水浴中培养 30min 作第二次观察，每份检样作二份，另外再作阴性和阳性对照各一份，阳性对照管用无抗生素的乳 8mL 加抗生素及菌液和 TTC。阴性对照管用无抗生素乳 9mL加菌液和 TTC。4.3 判断方法：准确培养 30min 观察结果，如为阳性，再继续培养 30min 作第二次观察。乳中有抗生素存在，则检样中虽加入菌液培养物，但因细菌的繁殖受到抑制，因此指示剂TTC 不还原，不显色。与此相反，如果没有抗生素存在，则加入菌液即行增殖，TTC 被还原而
12、显红色，也就是说检样呈乳的原色时为阳性，呈红色为阴性。四、实验要点观察结果时要迅速，避免光照过久发生干扰。实验四 动物性食品中亚硝酸盐含量的测定一、实验目的5掌握测定动物性食品中亚硝酸盐的原理与试剂作用；掌握分光光度法操作程序与实验要点。二、实验内容用分光光度法测定动物性食品中亚硝酸盐含量。三、实验方法1 原理样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色染料，与标准比较定量。2 试剂实验用水为蒸馏水，试剂不加说明者，均为分析纯试剂。2.1 亚铁氰化钾溶液：称取 106.0g 亚铁氰化钾，用水溶解，并稀释至 1000mL。 2.2 乙酸
13、锌溶液：称取 220.0g 乙酸锌，加 30mL 冰乙酸溶于水，并稀释至 1000 mL。2.3 饱和硼砂溶液：称取 5.0g 硼砂钠，溶于 100mL 热水中，冷却后备用。2.4 对氨基苯磺酸溶液(4g/L)：称取 0.4g 对氨基苯磺酸，溶于 100mL 20%的盐酸中，置棕色瓶中混匀，避光保存。2.5 盐酸萘乙二胺溶液(2g/L)：称取 0.2g 盐酸萘乙二胺，溶于 100mL 水中，置棕色瓶中，避光保存。2.6 亚硝酸钠标准溶液：准确称取 100.0mg 于硅胶干燥器中干燥 24h 的亚硝酸钠，加水溶解移入 500mL 容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀，在 4避光保存。此溶液每毫升相当于
14、200g 的亚硝酸钠。2.7 亚硝酸钠标准使用液：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液 2.500mL，置于 100mL 容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于 5.0g 亚硝酸钠。3 仪器小型粉碎机，分光光度计。4 操作步骤4.1 样品处理称取约 2g 经绞碎混匀样品，置于 50mL 烧杯中，加饱和硼砂溶液 5mL，混匀，以70左右的水约 100mL，将样品全部洗入 200mL 容量瓶内，置沸水浴中加热 15min 混匀，取出后冷至室温，然后一面转动，一面加入 2mL 亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入 2mL 乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质。加水至刻度，摇匀，放置 0.5h，除去上层脂肪，用滤纸过滤，弃
15、去初滤液 10mL，收集滤液备用。4.2 测定4.2.1 亚硝酸盐标准曲线的制备：吸取 0，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0mL 亚硝酸钠标准使用液(相当于 0，2.0，4.0，6.0， 8.0，10g 亚硝酸钠) ，分别置于 50mL 带塞比色管中。于标准管中分别加入 2mL 对氨基苯磺酸溶液，混匀，静置 35min 后加入盐酸萘乙二胺溶液1mL，加水至刻度，混匀，在暗处静置 15min，用 2cm 比色杯，以零管调节零点，于波长6538nm 处测吸光度，绘制标准曲线。4.2.2 样品测定：吸取 20.0mL 上述滤液于 25mL 带塞比色管中，混匀，加入 1mL 对氨基苯磺酸溶液，混
16、匀，静置 35min 后加入盐酸萘乙二胺溶液 0.5mL，加水至刻度，混匀，在暗处静置 15min，用 2cm 比色杯，以零管调节零点，于波长 538nm 处测吸光度，同时做试剂空白。5 计算102/AXW式中：X样品中亚硝酸盐的含量， mg/kg；W样品质量，g；A测定用样液中亚硝酸盐的质量， g；6 判定标准不得高于 30mg/kg。四 试剂作用1、硼砂、亚铁氰化钾、乙酸锌溶液在本试验中为蛋白沉淀剂，去除样品中蛋白。2、对氨基苯磺酸在本试验中为弱酸条件下与亚硝酸盐起重氮化反应，生成重氮化合物。3、盐酸萘乙二胺盐在本试验中与亚硝酸盐和对氨基苯磺酸反应生成的重氮化合物偶联成紫红色的重氮染料而呈色。
