1、1周次 日期 课时安排 3 课时课题 实验三 液相色谱法测定苯甲酸、山梨酸含量重点难点教学目标1、了解高效液相色谱仪的结构和工作原理；2、理解苯甲酸和山梨酸的高效液相色谱方法。教学方法教学手段1要求学生实验前认真预习实验内容，实验前教师检查并批改预习报告，了解学生预习情况。2实验前先进行重点的讲解和示范基本操作、实验步骤中的注意事项，实验过程中巡回指导。教学过程实验操作参考 GB/T 5009.29-2003 食品中山梨酸、苯甲酸的测定 第二法 高效液相色谱法一、原理试样加温除去二氧化碳和乙醇，调 pH 至近中性，过滤后进高效液相色谱仪，经反相色谱分离后，根据保留时间和峰面积进行定性和定量。二
2、、试剂方法中所用试剂，除另有规则外，均为分析纯试剂，水为蒸馏水或同等纯度水，溶液为水溶液。甲醇：经滤膜（0.5m）过滤。稀氨水（1+1）：氨水加水等体积混合。乙酸铵溶液（0.02mol/L）：称取 1.54g 乙酸铵，加水至 1000mL，溶解，经 0.45m滤膜过滤。碳酸氢钠溶液（20g/L）：称取 2g 碳酸氢钠（优级纯），加水至 100mL，振摇溶解。苯甲酸标准储备溶液：准确称取 0.1000g 苯甲酸，加碳酸氢钠溶液（20g/L）5mL，加热溶解，移入 100mL 容量瓶中，加水定容至 100mL，苯甲酸含量为 1mg/mL，作为储备溶液。2教学过程山梨酸标准储备溶液：准确称取 0.1
3、000g 山梨酸，加碳酸氢钠溶液（20g/L）5mL，加热溶解，移入 100mL 容量瓶中，加水定容至 100mL，山梨酸含量为 1mg/mL，作为储备溶液。苯甲酸、山梨酸标准混合使用溶液：分别取苯甲酸、山梨酸标准储备溶液1、2.5、5、10、15mL，放入 100mL 容量瓶中，加水至刻度，经 0.45m 滤膜过滤。三、仪器高效液相色谱仪（带紫外检测器）四、分析步骤试样处理汽水：称取 5.00g10.0g 试样，放入小烧杯中，微温搅拌除去二氧化碳，用氨水（1+1）调 pH 约 7。加水定容至 10mL20mL，经滤膜（HA 0.45m）过滤。果汁类：称取 5.00g10.0g 试样，用氨水（
4、1+1）调 pH 约 7，加水定容至适当体积，离心沉淀，上清液经 0.45m 滤膜过滤。配制酒类：称取 10.0g 试样，放入小烧杯中，水浴加热除去乙醇，用氨水（1+1）调pH 约 7，加水定容至适当体积，经 0.45m 滤膜过滤。高效液相色谱参考条件柱：YWG-C 18 4.6mm250mm，10m 不锈钢柱。流动相：甲醇：乙酸铵溶液（0.02mol/L）（5:95）。流速：1mL/min。进样量：10L。检测器：紫外检测器，230nm 波长。 根据保留时间定性，外标峰面积法定量。课后作业教学后记 2 分钟出现的可能是溶剂峰脱机文件 调用实验结果3推一针 浓度 峰面积提取 10ml 雪碧（只
5、含苯甲酸）稀释至 50ml 稀释五倍六个芒果（只含山梨酸）4,5 组 雪碧 样品min2 4 6 8 10mAU-2002040608010120140160VWD1 A, Wavelngth=230 nm (C:HEM321DAT20140623名名名 2014-10-19 10-45-10.D)1.7811.972.01 2.345 2.6817.024,5 组 芒果 样品min2 4 6 8 10 12mAU050101502025030VWD1 A, Wavelngth=230 nm (C:HEM321DAT20140623名名名 2014-10-19 10-57-01.D)1.405
6、 1.922.164 2.3572.495 2.62 2.831 2.97 3.1856.45810.63样品序 1 2 3 4 5时间 样品 序号 1 2 3 4 5 雪碧 芒果 6.5min7min 苯甲酸 739 1803 3523 7347 10988 2257 183610min 山梨酸 840 2108 4144 8477 12650 5736 杂质4号浓度ug/ml 10 25 50 100 150739 1803 3523 7347 10988峰面积840 2108 4144 8477 12650数据处理：雪碧检测样品中苯甲酸含量 y=2257 代入标准曲线 y=73.548x
7、-47.704得 x=31.33 ug/ml由于检测样品为稀释了五倍的雪碧， mlugcvvc/3.1,5,2221 所以 c1=5*31.33=156.5ug/ml芒果饮料检测样品中山梨酸含量 y=5736 代入标准曲线 y=84.55x-21.065 得 x=68.10 ug/ml由于检测样品为稀释了五倍的原饮料，所以 c3=340.5ug/ml由 GB 中饮料的山梨酸含量不得超过 200ug/ml，碳酸饮料中苯甲酸含量不得超过 500ug/ml，可知测得样品符合国家标准。芒果饮料的速溶图中 5min 处出现峰，并非苯甲酸。因为笨甲酸的峰出现时间为 6.293min,查配料表及其他数据可推出其为乙酰胺酸钾。
