1、以下反相色谱法流动相常用的乙腈和甲醇进行了比较。粗略地讲是，使用乙腈 HPLC级最好，在选择性，峰形差时试用甲醇 HPLC，但根据各种不用性质设计分析条件也是必要的 序：洗脱能力。一般而言，乙腈较强。乙腈和甲醇分别用同样的比率与水混合时，一般情况下，乙腈的洗脱能力强。特别是混合比率低时，从咖啡因和苯酚的洗脱来看，获得同样的保留时间，乙腈的比率，只需甲醇的比率的一半以下即可。另一方面，有机溶剂 100%或与此极接近时，从胡萝卜素和胆甾醇来看，常常都是甲醇的洗脱能力强。混合比在 50比 1等较为特殊时，调制的误差大，影响保留时间，或平衡化的时间长，乙腈遇到这种情况时，用甲醇的 10比 1混合代替乙
2、腈，这样操作方便些。溶剂受温度影响时，不采用容器定量，而采用重量的方法(考虑比重)，可使混合比的误差减小。首先，乙腈价格高乙腈，特别是 HPLC级的价格很高，但是，文献或 LC厂家所示的条件，多用乙腈，这是为什么呢？现就此谈谈。1、吸光度。乙腈 HPLC级的小。乙腈和甲醇的市销 HPLC级和优级的吸收光谱中，乙腈 HPLC吸收最小（特别是在短波长上小）。所谓 HPLC级是除去具有吸收 UV的杂质，在规定的波长上吸光度限制在规格值以内。在 UV检测时，产生的噪声小，因此在进行UV短波长上的高灵敏度分析时 乙腈 HPLC级最适宜。另外，在 UV检测中的梯度基线上也是乙腈 HPLC级产生鬼峰少，虽然
3、，其他与水相溶性高的有机溶剂有各种各样，但很难能找到比乙腈 HPLC级吸收更小的。另外，甲醇的 HPLC级和优级，虽然所得的光谱相差不大，但是优级不能保证吸光度，有可能产生偏差，价格也相差不大，所以尽量使用 HPLC级。2、压力。乙腈低，柱内承受的压力，根据有机溶剂的种类或混合比率的不同而异，水/乙腈，水/甲醇混合液的比率与输液压力的关系中,甲醇与水混合，压力增高，而乙腈同样与水混合且并不如此。所以，乙腈一方，在同样的流速下不在柱内加上多余的压力。从上述两项，可以确认使用乙腈的意义，那么，甲醇除了价格以外，还有没有其化优点呢?3、流动相的脱气，乙腈类要注意。混合溶剂的置制，不说在 LC装置内，
4、只谈预先在流动相瓶内进行时，(等浓度系统)。甲醇与水混合时发热，多余的溶解空气较易变为脱出气泡(脱气容易)。而乙腈由于吸热冷却，随着慢慢回到室温，产生气泡，所以要考虑脱气(加温搅拌，过滤膜，He 脱气等)。 4、分离(洗脱)的选择性。两者的差异，乙腈和甲醇在分离的选择性上不同。由于有机溶剂分子的化学性质(甲醇和乙醇是质子性，乙腈和四氢呋喃是非质子性)不同所致。因此，在用乙腈类不能获得分离的选择性，就试用甲醇类看看。5、峰形。用时出现差异。像水杨酸化合物(在邻位上具有羧基或甲氧基的苯酚化合物)等，用乙腈类时拖尾大，用甲醇类可抑制。可是，一般情况下，聚合物类反相柱，与硅胶柱相比，更具有峰形宽的倾向
5、，特别是用聚苯乙烯分析柱芳香族化合物等时常见。这在流动相是甲醇时非常显著，而用乙腈时不明显。为此，用聚合物类反相用柱时建议采用后者(乙腈类)，这是因为乙腈使凝胶膨润。6、洗脱能力。一般而言，乙腈较强。乙腈和甲醇分别用同样的比率与水混合时，一般情况下，乙腈的洗脱能力强。特别是混合比率低时，从咖啡因和苯酚的洗脱来看，获得同样的保留时间，乙腈的比率，只需甲醇的比率的一半以下即可。另一方面，有机溶剂100%或与此极接近时，从胡萝卜素和胆甾醇来看，常常都是甲醇的洗脱能力强。混合比在 50比 1等较为特殊时，调制的误差大，影响保留时间，或平衡化的时间长，乙腈遇到这种情况时，用甲醇的 10比 1混合代替乙腈，这样操作方便些。溶剂受温度影响时，不采用容器定量，而采用重量的方法(考虑比重)，可使混合比的误差减小。
